不同品种百合中多糖和皂苷含量的测定

一４３２一　江苏农业科学２０１１年第３９卷第５期　周秀玲，李家敏．不同品种百合中多糖和皂苷含量的测定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１１，３９（５）：４３２—４３３　

不同品种百合中多糖和皂苷含量的测定　周秀玲，李家敏　（宜春学院化学与生物工程学院，江西宜春３３６０００）　

摘要：采用分光光度法，多糖采用苯酚一硫酸法，皂苷以浓硫酸为显色剂，测定不同品种百合中多糖和皂苷的含　量。结果表明，薯蓣皂苷元浓度（　）在１Ｏ．７５～５３．７５　ｍＬ范围内与吸光度（Ｙ）呈良好的线性关系，线性方程为Ｙ＝　２０．８９３ｘ一０．１２３　６，ｒ＝０．９９９　１；葡萄糖的线性方程为Ｙ＝０．０４５　７ｘ＋０．２２１　９，ｒ＝０．９９９　２。该方法准确、快速，重复性　好，适于百合中多糖和皂苷含量的测定。　关键词：百合；多糖；皂苷；含量测定；分光光度法　中图分类号：Ｒ２８４．１　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—１３０２（２０１１）０５—０４３２—０２　

中药百合来源于百合（Ｌｉｌｉｕｍ　ｂｒｏｗｎｉｉ　ｖａｒ．ｖｉｒｉｄｕｌｕｍ　Ｂａｋ—　ｅｒ）、卷丹（Ｌ．１ａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ　Ｔｈｕｎｂ．）和山丹（Ｌ．ｐｕｍｉｌｕｍ　ＤＣ．）的　干燥肉质鳞茎，其肉质鳞茎的鳞片营养丰富，性味甘寒，具有　止咳化痰、养阴清肺、清心安神、抗疲劳的功效　。研究表　明，百合主要含有酚酸甘油酯、皂苷、生物碱及多糖，它们都是　有药用价值的活性成分；另外还含有一些磷脂、蛋白质和无机　元素等　。本研究采用分光光度法，多糖采用苯酚一硫酸　法，皂苷以浓硫酸为显色剂，测定不同品种百合中多糖和皂苷　的含量。　

１材料与方法　１．１仪器　ＴＵ一１８１０紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限　责任公司），ＧＺＸ一９０７０　ＭＢＥ数显鼓风干燥箱（上海博讯实　业有限公司医疗设备厂），ＣＰ２２５Ｄ型分析天平（北京赛多利　斯仪器系统有限公司），ＳＫ５２００ＬＨＣ型超声波清洗器（上海科　导超声仪器有限公司），ＨＨ一４数显恒温水浴锅（常州国华电　器公司）。　１．２材料　薯蓣皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所，批号为　１５３９—２００００１），葡萄糖对照品；甲醇、乙醇、浓硫酸、苯酚均为　分析纯。百合样品及来源见表１，样品由宜春学院周秀玲副　教授鉴定。　１．３　方法　１．３．１葡萄糖对照品溶液的配制　精确称取１０５　ｏＣ干燥至　恒重的葡萄糖２５．０　ｍｇ，置５０　ｍＬ量瓶中，加适量蒸馏水溶　解，稀释至刻度。精密移取葡萄糖溶液２．０、４．０、６．０、８．０、　１０．０　ｍＬ于５０　ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水至刻度，备用。　１．３．２薯蓣皂苷元对照品溶液的配制精确称取薯蓣皂苷　元标准品２．１５　ｍｇ，置１０　ｍＬ容量瓶中，甲醇定容至刻度，密　闭备用。　收稿日期：２０１０—１０—１３　基金项目：江西省宜春市科技计划（编号：ＪＸＹＣ２００９ＫＮＡ００７）。　作者简介：周秀玲（１９６０一），女，江西南昌人，副教授，主要从事药用　植物研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｘ１６００８２０＠１６３．ｃｏｒｎ。　１．３．３百合皂苷样品溶液的配制精确称取６０℃烘干２　ｈ　的百合粉末２　ｇ（过２０目筛），置具塞锥形瓶中，加入８０％乙　醇３０　ｍＬ超声提取２次，每次３０　ｍｉｎ，过滤。滤液回收乙醇后　得浸膏，加适量水溶解，用水饱和正丁醇萃取３次，每次　１０　ｍＬ，回收正丁醇得浸膏，用甲醇溶解，定容成１０　ｍＬ作为待　测液备用。　１．３．４百合多糖样品溶液的配制将按照上述条件８０％乙　醇提取后的百合滤渣，挥发干乙醇，加水３０　ｍＬ超声提取２　次，每次３０　ｍｉｎ，过滤，合并２次滤液，浓缩至含量为　０．５　ｇ／ｍＬ。加无水乙醇至含醇量为８０％，静置２４　ｈ，过滤，残　渣用无水乙醇反复洗涤，真空干燥，即得百合多糖。精确称取　百合多糖４．０　ｍｇ置５０　ｍＬ容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，　即得多糖样品溶液。　２结果与分析　２．１　百合多糖标准工作曲线　精确移取含量为０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、０．１０　ｍｇ／ｍＬ葡　萄糖对照品溶液各２　ｍＬ置于干燥刻度试管中，分别加入５％　苯酚溶液１．０　ｍＬ，摇匀，然后加入浓硫酸９．０　ｍＬ摇匀；另以　２　ｍＬ蒸馏水同上操作，作为空白液。于沸水浴中恒温３０　ｍｉｎ，　取出，冰水浴冷却１５　ｍｉｎ后，在４８８　ａｍ波长处测其吸光度。　以葡萄糖浓度（　ｇ／ｍＬ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标　准曲线，得回归方程为：Ｙ＝０．０４５　７ｘ＋０．２２１　９，ｒ＝０．９９９　２。　２．２百合皂苷标准工作曲线　分别移取对照品溶液０．２、０．４、０．６，０．８、１．０　ｍＬ置于带　塞试管内，挥发干甲醇，加入浓硫酸４　ｍＬ，７０　ｏＣ水浴３０　ｒａｉｎ，　冰水浴１０　ｍｉｎ，终止反应；以浓硫酸为空白，在４０８　ｎｌｌｌ处测其　吸光度，绘制标准曲线。以薯蓣皂苷元的浓度（　）对吸光度　（Ｙ）进行线性回归，线性方程为Ｙ＝２０．８９３ｘ一０．１２３　６，ｒ＝　０．９９９　１，薯蓣皂苷元在１Ｏ．７５～５３．７５　ｍＬ范围内与吸光　度呈良好的线性关系。　２．３　多糖换算因素的测定　精确称取真空干燥的百合多糖４　ｍｇ，用蒸馏水溶解后定　容到５０　ｍＬ容量瓶中，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖　储备液２．０　ｍＬ，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度。按　下式计算换算因素：ｆ＝ｍ／（∞）。式中，ｍ为粗多糖质量　周秀玲等：不同品种百合中多糖和皂苷含量的测定　一４３３一　（ｍｇ），Ｃ为多糖液中葡萄糖的质量浓度（　ｇ／ｍＬ），Ｄ为多糖　的稀释因素，测得．厂＝１．９７４　１。　２．４精密度试验　精确移取葡萄糖和皂苷元对照品溶液，按照各自显色条　件操作，测吸光度。葡萄糖结果为０．３６９、０．３７１、０．３７２、　０．３７５、０．３７８，ＲＳＤ为０．９５％，皂苷结果为０．５３１、０．５３６、　０．５２９、０．５３８、０．５３２，ＲＳＤ为０．６９％。　２．５稳定性试验　精确量取０．０２　ｍｇ／ｍＬ多糖样品２．０　ｍＬ，显色后０、３０、　６０、１２０、１８０　ｍｉｎ，在４８８　ｎｍ波长处测定吸光度，结果分别为　０．０４２、０．０４４、０．０４５、０．０４３、０．０４４，ＲＳＤ为２．６２％。结果表　明，测定的样品溶液在３　ｈ内稳定。　精确移取百合皂苷溶液０．３　ｍＬ，按照显色条件操作，显　色后０、３０、６０、１２０、１８０　ｍｉｎ，测吸光度，结果分别为０．７５７、　０．７６７、０．７６９、０．７７４、０．７８３，ＲＳＤ为１．２４％。结果表明，测定　的样品溶液在３　ｈ内稳定。　２．６重现性试验　精确称取同批百合样品４　ｍｇ各５份，配制供试品溶液在　４８８　ｎｍ处测定其吸光度，结果表明，多糖的平均质量分数为　２．９２％，ＲＳＤ为１．７９％。　精确称取同批百合样品６份各２　ｇ，按照百合皂苷样品溶　液的配制方法制备，测定吸光度，计算的百合皂苷平均含量为　２．８６２　３　ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．２９％。　２．７回收率试验　精确称取多糖样品５份，每份２．５　ｍｇ，分别加入葡萄糖　对照品溶液（０．１０　ｍｇ／ｍＬ）１４　ｍＬ，加水定容至５０　ｍＬ，精确量　取２　ｍＬ，置于１０　ｍＬ试管中，另取２．０　ｍＬ蒸馏水置于１０　ｍＬ　试管中作为空白，在４８８　ｎｍ处测定其吸光度，结果表明，葡萄　糖的平均回收率为１００．５２％，ＲＳＤ为２．４７％。　精确称取百合样品６份，每份约１　ｇ，分别加入薯蓣皂苷　元对照品溶液０．２　ｍＬ，按照供试品溶液的配制方法制备后，　测定其吸光度值，结果表明，平均回收率为９９．６７％，ＲＳＤ为　２．０６％。　２．８样品含量测定　精确称取不同来源百合样品２　ｇ各３份，制备样品液，测　吸光度，计算多糖和皂苷含量，结果见表１。　３结论与讨论　３．１显色剂的选择　本试验为测定不同品种百合样品的多糖和皂苷的含量测　定。多糖的测定多采用苯酚一浓硫酸法，该法的原理是多糖　表１不同品种百合样品中多糖和皂苷含量　在强酸作用下水解生成单糖，并迅速脱水生成糠醛，糠醛与酸　性物质缩合成有色化合物，这样用分光光度法在适当波长处　测定，再通过计算，可以得到多糖的量　。　。由于苯酚易氧　化，产生酚类杂质，随放置时间延长溶液颜色不断加深，吸光　度不稳定，因此苯酚溶液宜现配现用　。对皂苷的测定采用　浓硫酸显色法，甾体皂苷分子与浓硫酸等强酸反应后，因分子　内发生脱水、脱羧、氧化、双键移位及形成多烯碳正离子等原　因，使皂苷分子在２００—６００　ａｍ范围内出现一定程度的吸收，　常运用这一反应来定量皂苷的含量　。　３．２样品测定结果　多糖含量中，松叶百合最高；皂苷含量中，卷丹含量最高。　药用百合（百合、卷丹、山丹）与其他百合的多糖与皂苷含量　相比没有很大的差别。本研究结果可为百合的质量分析评价　和质量标准制定提供一定参考。　３．３样品测定方法　本试验中对样品百合的处理为，先提取皂苷成分后再提　取多糖成分，一份样品经处理能获得皂苷和多糖的样品溶液，　再经显色处理后用分光光度法检测含量。此检测方法简便，　准确性高，能进行大批量百合的皂苷和多糖含量测定。　

参考文献：　［１］中华人民共和国卫生部药典委员会．中国药典［Ｍ］．北京：中国　医药科学技术出版社，２０１０．　［２］杨林莎，孙艳红，方晓艳．中药百合的研究进展［Ｊ］．河南中医药　学刊，２００２，１７（１）：７４—７６．　［３］杨林莎，李玉贤，李明丽，等．苯酚一硫酸比色法测定百合多糖的　含量［Ｊ］．中国中医药信息杂志，２００４，１１（８）：７０４—７０５．　［４］马淑凤，陈利梅，徐化能，等．白灵菇胞外多糖的分离纯化及其抗　氧化活性的研究［Ｊ］．江苏农业学报，２０１０，２６（１）：１５７—１６２．　［５］张慧芳，蔡宝昌，张志杰，等．百合不同炮制品中多糖的测定［Ｊ］．　中草药，２００６，３７（１１）：１６７５—１６７７．　［６］肖崇厚．中药化学［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９７．