液相色谱仪波长检定的探讨

农 药AGROCHEMICALS 第49卷第8期2010年8月Vol. 49, No. 8Aug. 201094种化合物高效液相色谱分析中紫外吸收波长的选择吴国旭1，翟立红2，毕富春3(1.天津渤海职业技术学院 环境工程系，天津 300402； 2.河北省廊坊市诺农生物工程有限公司，河北 廊坊 065000；3.南开大学 元素有机化学研究所，天津 300071)摘要：研究了94种化合物在高效液相色谱分析中对紫外光波吸收波长的选择，并找出了这些化合物的最大吸收波长和适宜分析波长。

化合物的残留分析可选择最大紫外吸收波长；化合物常规定量分析可选择适宜分析波长，它可以简化操作步骤及减少分析时间。

关键词：化合物；紫外吸收波长；高效液相色谱法中图分类号：TQ450.7 文献标志码：A 文章编号：1006-0413(2010)08-0581-04Selection of UV Absorption Wavelength for 94 Pesticide Analysis by HPLCWU Guo-xu 1, ZHAI Li-hong 2, BI Fu-chun3(1.The Department of Environmental Engineering, Tianjin Bohai College of Professional Technology, Tianjin 300402, China;2.Hebei Langfang Nuonong Bioengineering Co., Ltd., Langfang 065000, Hebei, China;3.Institute of Elemental Organic Chemistry, Nankai University, Tianjin 300071, China)Abstract: The selection of UV absorption wavelength of 94 chemicals by HPLC was studied. The maximum and appropriate absorption wavelengths of the chemicals were chose out. The maximum absorption wavelengths were appropriate for the residue analysis of chemicals. The appropriate absorption wavelengths were appropriate for quantitative analysis of chemicals. The utilizing appropriate absorption wavelengths of chemicals could simply operating steps of analytical methods and reduce operating time. Key words: chemicals; UV absorption wavelength; HPLC随着科学技术的发展，高效液相色谱仪在农药分析中广范使用，特别是紫外可变波长检测器的普及，使农药分析技术得到极大提高。

水质检测液相色谱实验原理及应用高效液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术，在分析测定有机化合物方面，以其快速、灵敏、选择性好的特点，倍受分析工作者青睐，是环境监测、卫生防疫、石油化工、食品生产等行业作为水质分析的标准仪器。

一、液相色谱紫外检测器原理液相色谱仪紫外检测器是应用最广泛的一种检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见光检测器。

紫外检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此可用于对光吸收小、消光系数低的物质进行微量分析。

既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。

由于紫外检测器对流速和温度均不敏感，又可用于制备液相色谱仪。

但在使用液相色谱仪紫外检测器时，要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长，如果溶剂中含有吸光杂质，则会提高背景噪音，降低灵敏度。

大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外或可见光吸收基团，因而有较强的紫外或可见光吸收能力，因此UVD既有较高的灵敏度，也有很广泛的应用范围，是液相色谱中应用最广泛的检测器。

二、应用1、水相中的溶质溶解方式水相中需溶解的无机盐和表面活性剂等固体溶质，建议采用加热法，不建议采用振摇、超声等方式。

因此种方式的溶解，溶质可能处于“临界胶团浓度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有机溶剂、温度剧降等），极易析出少量结晶；而一旦析出，便将损伤仪器和色谱柱，呈现泵头处析出“盐和白粉”的现象。

2、流动相的配制与使用2.1.恒度洗脱一定是将水相与有机相超声、抽滤（使用混合型过滤膜）后，因此种情形极易造成水相中盐和表面活性剂的少量析出。

剩余流动相完全可继续使用，密封后放置阴凉处；待下次试验时与新配制的流动相混合后抽滤即可。

无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题。

2.2.梯度洗脱流动相配制最为科学的方式是：A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为低比例的水相-高比例的有机相；其次为：A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为纯有机相；最不科学的为：A相为纯水相、B相为纯有机相，梯度洗脱结束后，建议经5分钟回到初始状态，再平衡5分钟后开始下一针测定。

液相色谱仪检定规程一、通用技术要求1.1仪器外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计量器具许可证MC 标志。

1.2仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。

二、计量性能要求1.1输液系统1.1.1输液管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无泄漏。

1.1.2流量设定值误差S s和流量稳定性误差Sr应符合表1的要求。

1.1.3梯度误差Gc:不超过±3%。

1.2柱温箱1.2.1柱箱温度设定值误差△T s：不超过±2℃。

1.2.2柱温稳定性Tc：不超过1℃。

1.3检测器液相色谱仪检测器的主要技术指标见表2。

表1流量设定值误差S s和流量稳定性误差Sr的要求表2液相色谱仪检测器的主要技术1.4整机性能仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示。

1.4.1定性测量重复性（6次测量）RSD6:不超过1.5%。

1.4.2定量测量重复性（6次测量）RSD6: 不超过3.0%。

三、检定方法1、通用技术要求的检查按第1.1、1.2条的要求，目视、手动检查。

2、输液系统的检定a)泵耐压检定将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1mL/min，按说明书启动仪器，压力平稳后保持10 min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。

卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5 min无泄漏。

b)泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差Sr的检定按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2计算）S s和S r。

S s=（F-F s）/F s×100% （1）mSr=(F max-F min)/ Fm×100% （2）3、基线噪声和基线漂移的检定选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0Ml/min，紫外检测器的波长选在254nm，检测灵敏度调到最灵敏档，记录纸速调至5—10mm/min 。

分析液相色谱仪检定方法和注意事项摘要液相色谱仪是高精度的仪器之一，在物质分离分析中所起的作用日渐重要，针对该仪器的检定，国家颁布了统一的检定标准，检定过程需要严格按照该标准来执行。

本文主要介绍了液相色谱仪的工作原理及其组成，并简单介绍了几个常见项目的检定方法和在检定过程中需要注意的一些问题，为检定人员提供一定的参考。

关键词液相色谱仪；检定；液相色谱法液相色谱仪是广泛应用在研究所，实验室等场所、对所研究样品进行分离分析的常规仪器之一。

它的优点主要有：1）可以在短时间内把样品分析出来；2）对于所分析样品没有太多要求，只要能制成液体即可；3）不需要太多的样品就可以分析出来；4）对于各组分含量很少的样品也能分析出来。

以上优点决定了该仪器在生物、医药、食品、材料等各领域研究工作的广泛应用。

1 液相色谱仪的原理高压泵利用高压把流动相压进系统中，然后样品溶液从进入到流动相中，并跟随流动相运动，最终进入色谱柱中，由于样品溶液的各个组成物质具有不同的性质，在色谱柱中运动时会有一定的差异，经过一段时间的运动以后，运动速度差异会变得越来越大，这样就被分成多个部分分别从色谱柱中流出，这样在检测器中就记录下了这些样品组分的浓度，然后以图谱的形式呈现出来。

2 液相色谱仪的组成液相色谱仪主要由加入样品系统、输送样品系统、分离样品系统、检测结果系统和结果分析处理系统组成。

2.1样品加入系统一般是用安装有隔膜的注射器或者是利用高压来加进样品，为了提高所分析样品的重复性，要在加样时注意使每次加入的样品量保持相同。

2.2样品输送系统高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分组成了输送样品系统。

高压泵的一般压强为14.7MPa～44MPa，如此高的压强可以使待分析样品液体以相当大的速度通过层析柱，较大速度可降低样品在层析柱中向四周扩散。

贮存器和密度梯度仪的作用是使样品流动相随着所用固定相和样品的变化而变化，具体包括改变洗脱液的吸水性、阴阳离子浓度、PH值，这样就可使各种样品成分最终都可以实现有效的分离，增强分离的效果。