中国药典三部血液制品方法包20120323
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
人免疫球蛋白
Column: SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 600 mm ) SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 50 mm ) Mobile phase: 0.2 M Phosphate buffer ( pH 7.0, 1% Isopropyl alcohol ) Flow rate: 0.6 mL/min Detector: UV 280 nm Column temperature: Room temperature Injection volume: 20 µL
检定项目中：分子大小分布（附录ⅥR） 附录ⅥR：人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法 要求：IgG单体与二聚体含量之和应不低于90.0% 色谱条件与系统适用性试验： 色谱柱：用亲水硅胶高效体积排阻柱(SEC,排阻极限300kD，粒度 10um)，柱直径7.5mm，长60cm； 流动相：以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液为流动相 检测波长：280 nm 流速：0.6mL/min 样品浓度：12 mg/mL 进样量:20 uL 要求：人免疫球蛋白对照品单体峰与裂解体峰的分离度应大于1.5， 人血白蛋白对照品单体峰与二聚体峰的分离度应大于1.5，拖尾因 子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。 • • • •
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32.18 32.18 32.17 32.13 32.12
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1.14 17932 17861 18389 17571 16478 17351 16196 17964 18005 1.10 1.16 1.18 1.19 1.18 1.20 1.20 1.38 1.37
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
Ⅵ P 人血液制品中糖及糖醇测定法 Carbomix-H—P40
• 实验目的： 按照中国药典三部中静注人免疫球蛋白中“糖及糖醇”项下，用
Carbomix-H检测样品中的糖及糖醇。要求如制品中添加麦芽糖或蔗糖, 应为90 – 110 g/L;如加山梨醇或葡萄糖，则应为40 – 60 g/L。测定 法中系统适用性要求麦芽糖与磺基水杨酸两峰的分离度应大于1.5，拖 尾因子以麦芽糖峰计算应为0.95 – 1.50。 • • 样品信息： 静注人免疫球蛋白 样品配制： 取供试品0.5 mL，加1.5%磺基水杨酸2.0 mL，混匀，室温放置2 h，以 每分钟3000转的转速离心10 min，取上清液过滤。（供试品浓度未知）
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
人血白蛋白
Column: SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 600 mm ) SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 50 mm ) Mobile phase: 0.2 M Phosphate buffer ( pH 7.0, 1% Isopropyl alcohol ) Flow rate: 0.6 mL/min Detector: UV 280 nm Column temperature: Room temperature Injection volume: 20 µL
Resolution
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
mAU 200 175 150 125 100 75 50 25 0 0
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30 40 50
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105 131
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Tailing 1.44 3943 1.43 1.43 1.48 1.48 1.47 1.45 1.45 1.43 1.42 3921 3803 3708 3644 3674 3566 3521 3531
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2.22 2.17 2.2 2.16 2.12 2.11 2.13 2.1 2.09 2.06
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
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中国药典三部 附录部分：
Ⅵ Q 人血白蛋白多聚体测定法 SEC
Ⅵ R 人免疫球蛋白类制品IgG 单体及二聚体测定法 SEC Ⅵ P 人血液制品中糖及糖醇测定法 Carbomix-H ⅦH 枸橼酸离子测定法 Carbomix-H
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
静注人免疫球蛋白中糖及糖醇的检测
Column: Carbomix H-NP10:8% ( 10 µm, 7.8 x 300 mm ) Mobile phase: 4 mM H2SO4 Flow rate: 0.6 mL/min Detector: RI ( 40 ℃ ) Column temperature: 45 ℃ Injection volume: 20 µL Sample: 20 mg/mL Maltose : 1.5% sulfosalicylic acid in water ( 1:1 )
mAU mAU 100 25 20 80 15 26.016 10 60 5 0 40 -5 0 10 20 30 40 33.594 SRT-300-7860-人免疫球蛋白-1222-新
局部放大图
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Human Normal Immunoglobulin
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9.589 CARBOMIX-H-NP10-8%-36282-系统适用性-2 nRIU 175000 150000 125000 100000 75000 50000 25000 0 0
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
Ⅵ Q 人血白蛋白多聚体测定法 SEC
• 检定项目中：多聚体含量的检测（附录ⅥQ） • 附录ⅥQ：人血白蛋白多聚体测定法 • 要求：应不高于5.0% • 色谱条件与系统适用性试验： 色谱柱：用亲水硅胶高效体积排阻柱(SEC,排阻极限300kD，粒度10um)， 柱直径7.5mm，长60cm； 流动相：含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液 检测波长：280nm 流速：0.6mL/min 样品浓度：12mg/mL 进样量:20uL 要求：人血白蛋白单体峰和二聚体峰间的分离度应大于1.5， 拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。
60min 30 40
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29.099
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min
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
SRT-300 对人血白蛋白多聚体的检测
实验条件：
Column: SRT-300 Guard Column: SRT-300 Mobile phase: 0.2 M Phosphate buffer ( pH 7.0, 1% Isopropyl alcohol ) Flow rate: 0.6 mL/min Detector: UV 280 nm Column temperature: 25 ℃ Injection volume: 20 µL Sample: 1/4.17 Human Immunoglobulin solution in mobile phase ( 12 mg/mL ) 连续进样150针，每隔15针叠加数据 Injection 1 15 31 45 61 75 91 105 131 150 RT 32.16 32.14 32.13 32.17 Plates 18488
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SRT-300-34012-人血白蛋白-1
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min
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
Ⅵ R 人免疫球蛋白类制品IgG 单体及二聚体测定法 SEC
mAU SRT-300-7860-34012-人血白蛋白-1236 32.097 mAU 500 80 60 40 300 20 200 0 0 100 10 20 30 40 19.886 55.462
局部放大图
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Human Serum Albumin
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2.49 2.47 2.46 2.51 2.49 2.45 2.48 2.43 2.52 2.61
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
人免疫球蛋白
Column: SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 600 mm ) SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 50 mm ) Mobile phase: 0.2 M Phosphate buffer ( pH 7.0, 1% Isopropyl alcohol ) Flow rate: 0.6 mL/min Detector: UV 280 nm Column temperature: Room temperature Injection volume: 20 µL
检定项目中：分子大小分布（附录ⅥR） 附录ⅥR：人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法 要求：IgG单体与二聚体含量之和应不低于90.0% 色谱条件与系统适用性试验： 色谱柱：用亲水硅胶高效体积排阻柱(SEC,排阻极限300kD，粒度 10um)，柱直径7.5mm，长60cm； 流动相：以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液为流动相 检测波长：280 nm 流速：0.6mL/min 样品浓度：12 mg/mL 进样量:20 uL 要求：人免疫球蛋白对照品单体峰与裂解体峰的分离度应大于1.5， 人血白蛋白对照品单体峰与二聚体峰的分离度应大于1.5，拖尾因 子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。 • • • •
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"Better Surface Chemistry for Better Separation."
Ⅵ P 人血液制品中糖及糖醇测定法 Carbomix-H—P40
• 实验目的： 按照中国药典三部中静注人免疫球蛋白中“糖及糖醇”项下，用
Carbomix-H检测样品中的糖及糖醇。要求如制品中添加麦芽糖或蔗糖, 应为90 – 110 g/L;如加山梨醇或葡萄糖，则应为40 – 60 g/L。测定 法中系统适用性要求麦芽糖与磺基水杨酸两峰的分离度应大于1.5，拖 尾因子以麦芽糖峰计算应为0.95 – 1.50。 • • 样品信息： 静注人免疫球蛋白 样品配制： 取供试品0.5 mL，加1.5%磺基水杨酸2.0 mL，混匀，室温放置2 h，以 每分钟3000转的转速离心10 min，取上清液过滤。（供试品浓度未知）
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人血白蛋白
Column: SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 600 mm ) SRT-300 ( 5 µm, 300 Å, 7.8 x 50 mm ) Mobile phase: 0.2 M Phosphate buffer ( pH 7.0, 1% Isopropyl alcohol ) Flow rate: 0.6 mL/min Detector: UV 280 nm Column temperature: Room temperature Injection volume: 20 µL
Resolution
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
mAU 200 175 150 125 100 75 50 25 0 0
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中国药典三部 附录部分：
Ⅵ Q 人血白蛋白多聚体测定法 SEC
Ⅵ R 人免疫球蛋白类制品IgG 单体及二聚体测定法 SEC Ⅵ P 人血液制品中糖及糖醇测定法 Carbomix-H ⅦH 枸橼酸离子测定法 Carbomix-H
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静注人免疫球蛋白中糖及糖醇的检测
Column: Carbomix H-NP10:8% ( 10 µm, 7.8 x 300 mm ) Mobile phase: 4 mM H2SO4 Flow rate: 0.6 mL/min Detector: RI ( 40 ℃ ) Column temperature: 45 ℃ Injection volume: 20 µL Sample: 20 mg/mL Maltose : 1.5% sulfosalicylic acid in water ( 1:1 )
mAU mAU 100 25 20 80 15 26.016 10 60 5 0 40 -5 0 10 20 30 40 33.594 SRT-300-7860-人免疫球蛋白-1222-新
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Ⅵ Q 人血白蛋白多聚体测定法 SEC
• 检定项目中：多聚体含量的检测（附录ⅥQ） • 附录ⅥQ：人血白蛋白多聚体测定法 • 要求：应不高于5.0% • 色谱条件与系统适用性试验： 色谱柱：用亲水硅胶高效体积排阻柱(SEC,排阻极限300kD，粒度10um)， 柱直径7.5mm，长60cm； 流动相：含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液 检测波长：280nm 流速：0.6mL/min 样品浓度：12mg/mL 进样量:20uL 要求：人血白蛋白单体峰和二聚体峰间的分离度应大于1.5， 拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。
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SRT-300 对人血白蛋白多聚体的检测
实验条件：
Column: SRT-300 Guard Column: SRT-300 Mobile phase: 0.2 M Phosphate buffer ( pH 7.0, 1% Isopropyl alcohol ) Flow rate: 0.6 mL/min Detector: UV 280 nm Column temperature: 25 ℃ Injection volume: 20 µL Sample: 1/4.17 Human Immunoglobulin solution in mobile phase ( 12 mg/mL ) 连续进样150针，每隔15针叠加数据 Injection 1 15 31 45 61 75 91 105 131 150 RT 32.16 32.14 32.13 32.17 Plates 18488
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