培养基适用性检查标准操作规程

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培养基适用性标准操作规程

目的

规范培养基适应性检查的标准操作。

范围

本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。

责任

本规程由质量保证中心主任指定人员起草。

与本文件相关的部门负责人参与审阅,企业质量负责人批准本文件。

质量控制中心负责具体实施本规程。

内容

依据

《药品生产质量管理规范》(2010年修订)

《中华人民共和国药典》2010年版二部

试验用菌株及培养基

试验用仪器设备

恒温培养箱(30~35℃)、霉菌培养箱(23~28℃)、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平

锥形瓶、培养皿(9cm)、量筒、试管及塞、吸管(1ml分度,10ml分度)

接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。

操作步骤

菌液的制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,于30~35℃培养18~24h。取30~35℃培养18~24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml,用%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50~100cfu的菌悬液,备用。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上,于23~28℃培养24~48h。取于23~28℃培养24~48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml,用%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50~100cfu的菌悬液备用。

接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,于23~28℃培养5~7天,加入3~%(ml/ml)聚山梨酸酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,然后,用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含%(ml/ml)聚山梨酸酯80的%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液备用。

菌液的计数(每种菌液制备2个平皿)

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液1ml(含菌数50~100cfu)接种至营养琼脂培养基上,30~35℃培养48h,白色念珠菌和黑曲霉菌1ml(含菌数50~100cfu)接种至改良马丁琼脂培养基上,23~28℃培养72h,计数。

适用性检查实验操作

培养基的配制:按规定程序新鲜配制营养琼脂(被检培养基和对照培养基)、玫瑰红钠琼脂(被检培养基和对照培养基)以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂(被检培养基和对照培养基),灭菌后备用。

营养琼脂培养基的适用性检查

取7个无菌平皿,分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿,每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌做空白对照,倾注对照营养琼脂培养基,混匀,凝固后于30~35℃倒置培养48h,计数。

被检培养基同法操作。

玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查

取5个无菌平皿,分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿,每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌做空白对照,倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基,混匀,凝固后于23~28℃倒置培养72h,计数。

被检培养基同法操作。

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查

取3个无菌平皿,分别接种白色念珠菌2皿,每皿接种1ml菌液(含菌50~100cfu),另一平皿不接种菌做空白对照,倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固后于23~28℃倒置培养72h,计数。

被检培养基同法操作。

结果判断:若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的

70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致,则判断该培养基的适用性检查符合规定。