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槟榔提取物对人口腔纤维母细胞的毒性及DNA损伤的研究

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祜，ｆ确　脆裔　ｔ　蠕　槟榔　提取物对人口腔纤维母细胞　的毒性及ＤＮＡ损伤的研究　

查盟刘蜀凡沈予华：’　（口腔医学系长沙，４１０００８）　李镇辉　唐发清　（附属湘雅医　验室长沙４１００７８）　

！　

提要观察口腔粘膜纤维母细胞的毒性和ＤＮＡ损伤的作用・结果显示，琏着接榔提取转琅度增文，　细胞存活率降低，细胞ＤＮＡ掘伤程度惫严重。表明接榔提取物具有潜在致癌的可能性。　

关键词接榔碱｛　脱氧植糖桩醯损坏；　细胞毒素类；　纤维母细胞　中圈号Ｒ３６２　

在印度　东南亚、非洲以及我国的台湾、海　南、云南、湖南以及散居在欧美的一些亚洲移民　中，咀嚼槟榔已成为他们日常生活中的一种嗜　好或习惯。据Ｉ　９８５年调查，大约有６００万人，其　中亚洲、太平洋岛屿就有４５０多万人咀嚼槟榔　混合物［１。］。近十年来，欧美、印度等国家和地区　的学者研究表明：槟榔的主要有效成分可以使　ＤＮＡ分子单链断裂，姐妹染色单体交换频率增　高，基因突变，具有致癌作用０］。Ｓｔｉｅｈ【３　的流行　病学调查发现：口腔癌发病率上升与槟榔混合　物的内容、加工方法有关，具有地区性差异。　长沙市销售的槟榔多来自海南岛，经晒干、　烟熏泡制而成　本课题采用原位缺口平移技术　检测市售槟榔的提取物对人胚口腔粘膜纤维母　细胞（ＨＥ一０ＭＦ）ＤＮＡ的损伤作用。　

１材料与方法　ｌ　１材料胎儿口腔粘膜（为本院水囊弓ｌ产胎儿），槟　榔果（市兽）．噻唑蓝（ＭＴＴ．瑞士Ｆｌｕｋａ公司出品）．　ｄＮＴＰ（华美生物制品公司），ＤＮＡ多聚酶Ｉ（华美生物　制品公司），　Ｈ一晌腺嘧啶核苷（　Ｈ—ＴｄＲ），乳化闪烁液：　

１９９６　０７　０２收搞　

ＰＰ０：５ｇ，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００：３３０ｍｌ，二甲苯ｊ　６７０￣１，二氧化碳　培养箱（日本产），真空低温干燥仪（糟国产，国家遗传　重点实验室），ＥＬＩＳＡ光度检测仪（ｍｉ０ｉ￣ｌｅｒ　ｌ，美国　产，肿瘤研究所），ＦＪ．２１０１型液体闪烁计数仪（西安　产）．　１．２方法　１　２　１　ＨＥ—ＯＭＦ的培养取胎特３～４月健康的水囊　引产眙儿的１２１腔牯膜，置于双抗菌素（Ｐｅｎｉｃ；ｌｌ　ｉｎ　１００Ｕ　・ｍｌ～，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　１００Ｕ・ｍｌ＿。）的Ｈａｎｋｓ溶液中　漂洗３次，剪成２～３ｒａｍ的小块，加入０．２５　胰蛋白　酵，在３６．５＂Ｃ下热消化３０ｒａｉｎ，过滤，１　５００ｒ・ｍｉｎ７　离　心５ｒａｉｎ，去上清，加入台２Ｏ　小牛血清（ＦＣＳ）及双抗菌　素的ＥＭＥＭ培养液，置于恒温箱中培育。２４ｈ后换台　１Ｏ　ＦＣＳ的ＥＭＥＭ培养液，每陌２～３ｄ换培养渣一　次，经４～５次换液培养后，冻存于渣氮中备用。　实验前复苏，经６～１０次换液培养后的细胞供实　验用。　１　２　２　细胞毒性试验取对数生长期的ＨＥ—ＯＭＦ细　胞经０．２５　胰蛋白酶／ｏ．２　ＥＤＴＡ（１：Ｉ）消化（室温　下），加入台２０　ＦＣＳ的ＥＭＥＭ培养液，制备成台ｌＯ‘　ｃｅｌｌ・ｍｌ叫的细胞悬液。将槟榔提取物（Ａｒｅｃａ　Ｎｕｔ　Ｅｘ－　ｔｒａｃｔ，ＡＮＥ）的滩度分成７组：０，２００．４００，８００．１　２００，　

报Ｄ　学Ｍ　学Ｎ　赫　医眦　南Ｆ　胡０　维普资讯 http://www.cqvip.com ｌ０６　捌南医科大学学报．１９９７，２：２（２）　１　６００和２　Ｏ００ｇｇ・ｍｌ～。分别用台盼蓝和噻唑蓝法检　测。　１．２．３　台畸蓝（Ｔｒｙｐａｎ　ｂｌｕｅ）拒染法ＬＩ　的洲定　将细　咆悬液以每孔ｌｍｌ的量接种于２４孔细胞培养孔板中，　以４孔为一组，共７十浓度组。置于５　ＣＯ。的培养箱　中ｔ培育２４ｈ后，暇去培养液加入适量磷蛋白酶消化，　用暇管吹打分散细胞，加入生理盐水ｌｍｌ和０．２５　台　盼蓝溶液０．１ｍｌ，死细咆或严重受损的细胞将被染色，　活细胞则不受染。在显擞镜下对各孔未染色的细胞（即　活细胞）计数，按下列公式计算细胞生长存活率　存活率　一寿嚣噩羊鸷兽舞蔷鍪×　。。　

１．２．４　ＭＴＴ法　的测定取细胞悬液接种于９６孔　的细胞培养板中，４孔为一组，取一空白对照组用于校　准仪器，同上法另设７种不同浓度组。在３７℃古５％　ＣＯ　细胞培养中培养２１ｈ，除第一组外（对照组）每组各　孔均分别加入５ｍｇ・ｍｌ＿。ＭＴＴ溶液２０　，继续在　３７Ｃ，５　ＣＯ　培养箱中培育３ｈ，吸去上清液，叉分别　加入二甲亚砜（ＤＭＳＯ）１０　１／孔，使生成的结晶溶解，　置ＥＬ１ＳＡ光度计中检测５７０ｒｉｍ波长时的光密度（ＯＤ）　值，计ｊＩ每组ＯＤ平均值，按下列公式计算细胞生长存　活率。　存活率ｔ％　＝蠢案　｝　哿｛；吕蔷×　。ｏ％　

１．２．５检洲ＤＮＡ粕伤（采用原位缺口平移法）　５．　根据大脑杆菌ＤＮＡ聚合酶１可以从一条ＤＮＡ链缺口　的５　端切除核苷酸，同时从缺口的３　端连接核苷酸，并　依次顺序进行，其结果缺口沿ＤＮＡ链平移。因此，新合　成的拔苷酸数量可反映出ＤＮＡ链的断裂、即ＤＮＡ损　伤的程度。设空白对照组，甲基亚硝基弧（ＭＮＮＧ）阳性　对照组　及２５　ｇ・ｍｒ　，７５　ｇ・ｍｌ～，１２５　・ｍｌ～，　１　７５　・ｍｌ　的４十ＡＮＥ浓度组共６组。每组重复３　次。将１０　十ｃｅｌｌ・ｍｒ　的ＨＥ—ＯＭＦ细胞悬液ｌｍｌ（含　２０％ＦＣＳ的ＥＭＥＭ培养液）接种于２４孔细胞培养板　中，置３７ｃ，５　ＣＯ　细胞培养箱中，２４ｈ后吸去培养　液，以不含血清的ＥＭＥＭ培养液洗２次，加入ｌｍｌ不　合血清的ＥＭＥＭ培养液，井按上述设计加入不伺浓度　的药物，置于培养箱中６　ｈ后吸去培养液，以ＰＢＳ　（ｐＨＴ；４）液洗涮３次，用１：３的冰醋酸／甲醇液固定　１　５ｍｉｎ，晾干，然后每孔加入１５０￣１缺口平移反应液，使　反应渡浸渍所有的细胞。反应渡的配制：①混合液Ａ：　５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ—ＨＣＩ（ｐＨ７　４）１８８　ｕｌ，５０ｍＭ　ＭｇＣｌ　２　１８８　，　１００ｍＭ　琉基乙醇１８８　，１０ｍＭ　ｄＡＴＰ　Ｈ—ＴｄＲ５，　６４　，１０ｍＭ　ｄＧＴＰ　５．６４　，１０ｍＭ　ｄＣＴＰ　５　６４　，　１０ｒａＭ　ｄＴＴＰ　５．６４　．＠反应液（用前临时配制）：混合　

液Ａ　９６．３　ｔ　Ｈ—ＴｄＲ　１６　ｌ大脑杆菌ＤＮＡ聚台酶ｌ　（２０　・ｍｌ　Ｈ。）３Ｏ　ｔ　ＢＳＡ（牛血清白蛋白）２ｒａｇ・ｍｌ＿。　１５　ｔ双蒸水１４５￣１，置恒温箱３７℃下浸泡和温育１ｈ　后，吸去反应液，况集细胞用５０ｍｌ　Ｔｒｌｓ—ＨＣＩ（ｐＨ７．４）　溶液洗涤３次，加８　三氯醋酸０．５ｍｌ处理１５ｍｉｎ，再用　甲醇０．５ｍｌ固定１５ｒａｉｎ后吸去，用清水冲洗２次，每孔　加入６０　ＨＣＩ　Ｏ．／Ｈ２Ｏ２（１：２）酸性消化液０．２ｍｌ，置　６Ｏ℃恒温箱中反应３０ｒａｉｎ，待样品完全溶解后，混匀，将　溶液样品放入盛５ｍｌ乳化内烁液的测量瓶中静置过夜　后作放射计数测定。　１．３统计学处理将细胞生长存活率的结果绘制细　胞毒性曲线图，组问比较用“检验；反映细咆ＤＮＡ损　

伤的ＣＰＭ值用均数土标准差（　土　）绘制曲线图，组　间比较用ｔ检验。　

２结　果　２．１　１　ＡＮＥ对ＨＥ—ＯＭＦ的细胞毒性作用　结果见表１，图１。随着ＡＮＥ浓度的增加，ＨＥ—Ｏ　ＭＦ生长存活率下降，细胞毒性增强（Ｐ＜　０．０５）｛当ＡＮＥ在较低浓度时不明显，在２００￣ｇ　・ｍｒ　以上时即具有细胞毒性作用，从图１估　算半致死浓度接近或超过１　０００￣ｇ・ｍｌ～。　表１　ＡＮＥ对ＨＥ—ＯＭＦ的细胞毒性试验　

＠与＠；０与＠，⑤比｝⑦与＠，＠比　＠与＠　＠比　均尸＜　ｏ　０５　表２　ＡＮＥ对ＨＥ—ＯＭＦ的ＤＡＮ损伤的　

检测（；±ｓ）　

④或＠与对照比；＠与＠比均Ｐ＜ｏ．ｏｌ；＠　⑤与④比：尸＜　ｏ　０５　

维普资讯 http://www.cqvip.com ｔ　接榔提取物对人口腔纤维母细孢的毒性及ＤＮＡ损伤的研究方厂云等　２．２　ＡＮＥ对ＨＥ—ＯＭＦ的ＤＮＡ损伤的检测　结果见表２，圈２。反映ＤＮＡ分子损伤程度的　ＣＰＭ值随ＡＮＥ浓度升高而加大（Ｐ＜Ｏ．０５）。　

ｉ００　、一９Ｏ　褂ｓ０　怒７ｏ　６ｏ　，ｏ　剖加　

如　乏２０　

０　１０　

凹０　０　２００　４ＯＯ　８０Ｏ　１２００　１６００　２０００　ＡＮＥ｛盘度（　Ｉ・ｍｌ一‘）　

田１　ＡＮＥ对ＨＥ—ＯＭＦ的细胞毒性剂量一效应关系　Ｆｉｇ．１　Ｄ０ｓｅ—ｅ“代ｔ　ｒｅＬａｄｏｎｓｈＪｐ　０ｆ　ＡＮＥ　ｏｎ　ｔｒｙｐａｎ　ｂｌｕｅ　ｅＸ－　ｃｌｕ￣ｉｏｎ　ａｎｄ　ＭＴＴ　ｕｐｔａｋｅ　ｉｎ　ＨＥ・（）ＭＦ　

３讨　论　本研究中发现ＡＮＥ对ＨＥ一０ＭＦ的细胞毒　性明显，与Ｓｕｎｄｇｖｉｓｔ的研究结果接近”　。ＡＮＥ　的致死浓度较之Ｗａｒｙ的实验结果要高４倍　］，　这可能与槟榔加工方法以及细胞培养体系不同　有关。　当ＡＮＥ在２５Ｆｇ・ｍｌ　时即具有ＤＮＡ损　伤作用。Ｎａｉｒ　在单纯嚼槟榔者的唾液中测得　槟榔碱含量０～８９．８Ｈｇ・ｍｌ　（均数为２９．６９ｐｇ　・ｍ１－。，约相当于８４０￣ｇ・ｍｌ　以上的ＡＮＥ），　说明嚼槟榔者的口腔粘膜细胞中的ＤＮＡ分子　处于易被损伤的环境之中。在实验中，当ＡＮＥ　浓度增至１７５Ｈｇ・ｍｌ　时，ＣＰＭ值呈下降倾向。　这很可能是园损伤而死亡的细胞数上升，粘附　在培养板孔中的细胞数已大大减少所致。　国外众多研究表明．槟榔提取物具有损伤　ＤＮＡ分子的毒性作用０］。尽管长沙地区泡制槟　榔的方法不同于国内外其他地区，但本组实验　证实同样具有相似的毒性作用。这种作用与槟　榔碱的分子结构有关　］。摈榔碱具有烷化、羟化　

但当浓度达到１７５￣ｇ・ｍｌ～，所测得ＣＰＭ值明　显降低。　。　

皇　【）　焉ｊ　措　

３Ｏｏｏ　２３００　２０００　１５００　１０００　湖　０　０　２５　７５　１２Ｊ　ｌ　ＡＮＥ维度（　Ｉ・ｍｌ　）　

圉２　ＡＮＥ对自Ｅ—ＯＭＦ损伤的剂量一效应关系　Ｆ　．２　Ｄｏｓｅ—ｅｆｆｅ￣ｒｅｌａｔｉｃａ￣ｈｉｐ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｍＢｇｅ　ｅｓ￣ｅｄ　ｂ，　ＡＮＥ　ｉｎ　ＨＥ．ＯＭＦ　

作用而导致ＤＮＡ分子结构异常，使正常细胞转　化为癌前细胞潜伏下来，潜伏期不定。据有关报　道，嚼摈榔可引起口腔粘膜下纤维性变（０ｓＦ），　其癌变多发生在诊断为ＯＳＦ后的３～ｌ０年．癌　变平均年龄为６４．４岁　而其他致癌因素所致的　口腔癌平均年龄为５５岁，说明槟榔致癌发病较　晚，潜伏期较长。　

参考文献　１翦新春　剜蜀着　沈子华　等　口腔牿膜下纤维性变的临靡　研究．中华口腔医学杂志　１９８９．１５：２９９—３０２　２　Ｓｅｎ　Ｓ，Ｔａｔｕｋｄｅｒ　Ｇ，Ｓ￣ｒｍａ　Ａ．Ｂｅｔｅｌ　ｅｙｔｏｔｏｘｉｃｈｙ．Ｊ　￣ｔｈｎｏｐｈａ㈨　１９８９，２６（３）：２１７—２４７　３　Ｓｔｉｃｈ　ＨＦ．Ｒｏｓｉｎ　ＭＰ．ｂｒｕ力ｎ㈨　ＫＤ　Ｏｒａｌ　ｌ＿ｅｓｉｏⅡｓ．　ｇｅｎｏｔｏｘｉｔｙ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓ　ｉｎ　ｂｅｔｅｌ　ｑｕｄ　ｃｈｅｗｅｒｓ，ｗｉｔｈ　ｎＤ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｏ　ｌ　ｅｒ　ｒｉｓｋ．Ｃａｎｃｅｒ［．ｅｔｔ，１９８６．　．　３１：１５—２５　４谢冰芬，刘宗ｊ朝，潘启超，等二己基辩菲缠琳二氯锝曲细　胞毒作用和对ＤＮＡ的损伤．癌症，１９９０．９（６）｛４６７—４７１　５　章静渡，郁昌虎　原位缺口移位技术检测药物对细孢ＤＮＡ　的断裂损伤．细孢生物学杂志，１９９１．１３（１）：４４—４６　６［Ａｂｂｕｓ　ＢＬ．１ｌｌｅｎｙ￣ＳＡ．Ｃｒａｉｇｈｅｎｄ　ＪＥ　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｓｔｒａｎｄ　ｂｒｅａｋｓ　ｉｎ　Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｒａｔ　ｅｍｂｒｙｏ　ｃｅｌｌｓ　ｅｒｏｅｌｄｏｌｉｒｅ　ａ　

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世界卫生组织把它评为含致癌物最高的食物 很多人却还经常吃

世界卫生组织把它评为含致癌物最高的食物 很多人却还经常吃

世界卫生组织把它评为含致癌物最高的食物很多人却还经常吃!最近槟榔致癌的问题不知为何又闹的沸沸扬扬，可是明明多年前WHO（世界卫生组织）就把槟榔说成一级致癌物了，为啥又翻出来了呢？我想，大概是因为国内始终没有标准，而且槟榔确实可以致癌，食用者并不知道还是一味贪食，这就造成了槟榔导致的癌症越来越多，人们的情绪也越来越高了。

在槟榔流行的国家和地区中，口腔癌的发病率名列前茅，全世界每年有39万口腔癌患者，其中有22.8万（58%）发生在有嚼食槟榔习惯的人身上。

而且，早在2003年国际癌症研究中心就把槟榔列入“黑名单”，和烟酒、砒霜等同列为一级致癌物。

如果长期的咀嚼槟榔的话，会使牙齿变黑，还会出现牙齿疼痛的现象，因为槟榔的液汁是呈紫红色的，所以说槟榔要少吃的哦。

长时间咀嚼还会导致罹患口腔疾病、口腔癌，过量的话还会导致中毒，因为它里面有可致癌的生物碱，所以长期咀嚼还会导致致癌的，真是太可怕了！除了致癌，槟榔还有哪些危害？1、槟榔的汁液呈紫红色，长时间嚼槟榔会使人的牙齿变黑。

而且容易形成牙结石，长期用力嚼食槟榔损耗牙质，严重者是牙齿松动或脱落。

2、由于嚼食槟榔会造成口腔黏膜下纤维化和白斑病，也就是口腔癌的前期病变，其临床症状为张口困难、疼痛、麻木感、口腔黏膜变白及溃疡。

癌症现在在人们的生活中越来越常见，据专家调查显示着很大一部分原因跟人们的不良饮食习惯有关，有句话说病从口入，不良的饮食习惯容易给人们的健康带来很到的危害，易引发癌症的发生。

平时我们应该多吃一些抗癌防癌的水果，那么吃哪些水果可以防癌呢？让我们一起来看下吧！1、大枣近年来发现，大枣的热水提取物对体外培近年来发现，大枣的热水提取物对体外培养的肿瘤细胞有抑制作用，其抑制率可达90%。

但这种提取物对正常细胞也有轻微的抑制作用。

这种抑制特点与该种提取物的使用剂量有关。

大枣的抑癌作用与大枣中含有丰富的环式-磷酸腺苷和丰富的维生素有关。

山楂能活血化瘀、化滞消积、开胃消食，同时还含有丰富的维生素C.中医认为，癌瘤为实性肿块，往往具有气滞血瘀征象，由于山楂能活血化淤、善消肉积，又能抑制癌细胞的生长，所以适宜多种癌瘤患者的治疗。

巴豆醛的毒性和危害研究

巴豆醛的毒性和危害研究

巴豆醛的毒性和危害研究巴豆醛（ricin）是一种天然毒素，主要存在于巴豆（Ricinus communis）的种子中。

巴豆醛由于其高毒性而被广泛研究，被认为是世界上最强大的毒素之一。

本文将从巴豆醛的毒性、危害以及相关研究方面进行探讨。

首先，巴豆醛具有极高的毒性。

据研究表明，仅需要摄入1～20毫克的巴豆醛即可对人类造成致命的危害。

巴豆醛的毒性主要体现在其通过抑制蛋白质合成来杀伤细胞。

巴豆醛与细胞表面的受体结合后，进入细胞质并抑制核糖体的活性，阻断蛋白质的合成。

这导致细胞无法正常运作，最终引发多器官功能衰竭，甚至导致死亡。

其次，巴豆醛产生的危害涉及多个方面。

首先，巴豆醛可以通过多种途径进入人体，包括摄入、吸入或皮肤接触。

在摄入巴豆醛后，其毒性会迅速发挥作用。

中毒症状常包括剧烈腹痛、呕吐、腹泻、恶心、中毒性休克以及多系统损害等。

在严重中毒的情况下，巴豆醛可能导致死亡。

其次，巴豆醛还被广泛认为是一种生物恐怖主义的工具。

其在实施恐怖袭击时可被用作生物毒剂，甚至比许多化学武器更具杀伤力和危险性。

此外，巴豆醛还具有潜在的医药价值，但应用受到极大限制，因为其毒性特别强大。

对巴豆醛的毒性和危害进行研究具有重要意义。

首先，了解巴豆醛的毒性特点有助于人们更好地认识和了解这种毒素的危害性，从而提高人们对巴豆醛的防范意识。

其次，研究巴豆醛的毒性机制有助于开发相关的解毒剂或治疗方法。

尽管目前尚无特效的解毒剂能够完全中和巴豆醛的毒性，但对其毒性机制的深入了解有助于为解毒剂的研发提供理论基础。

此外，研究巴豆醛的毒性还可以为相应的应急处理和医疗措施提供参考。

研究巴豆醛的毒性和危害是一个复杂而严肃的课题。

因为巴豆醛的毒性非常强大，研究过程需要严格的实验条件和安全措施。

毒性实验必须在专门的实验室中进行，且需要经过严格的审查和监管。

此外，在研究巴豆醛的过程中，应制定相应的应急计划，以防万一发生中毒事故。

充分重视实验室安全和保护人员健康至关重要。

卫生部公告2005年第4号——关注食品中的丙烯酰胺，采取措施减少食品中的丙烯酰胺含量

卫生部公告2005年第4号——关注食品中的丙烯酰胺，采取措施减少食品中的丙烯酰胺含量

卫⽣部公告2005年第4号——关注⾷品中的丙烯酰胺，采取措施减少⾷品中的丙烯酰胺含量⽂号：卫⽣部公告2005年第4号颁布⽇期：2005-04-13执⾏⽇期：2005-04-13时效性：现⾏有效效⼒级别：部门规章2005年3⽉2⽇，世界卫⽣组织及联合国粮农组织⾷品添加剂联合专家委员会警告公众关注⾷品中的丙烯酰胺，呼吁采取措施减少⾷品中的丙烯酰胺含量，确保⾷品的安全性。

丙烯酰胺是⼀种化学物质，是⽣产聚丙烯酰胺的原料，可⽤于污⽔净化等⼯业⽤途。

淀粉类⾷品在⾼温（＞120℃）烹调下容易产⽣丙烯酰胺。

动物试验结果显⽰，丙烯酰胺是⼀种可能致癌物。

职业接触⼈群的流⾏病学观察表明，长期低剂量接触丙烯酰胺出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状，伴随末梢神经病（⼿套样感觉、出汗和肌⾁⽆⼒）。

尽管丙烯酰胺对⼈体健康的影响还有待进⼀步研究，但此问题应引起关注。

卫⽣部⾷品污染物监测⽹监测结果显⽰，⾼温加⼯的淀粉类⾷品（如油炸薯⽚和油炸薯条等）中丙烯酰胺含量较⾼，其中薯类油炸⾷品中丙烯酰胺平均含量⾼出⾕类油炸⾷品4倍，我国居民⾷⽤油炸⾷品较多，暴露量较⼤，长期低剂量接触，有潜在危害。

卫⽣部建议如下：1、尽可能避免连续长时间或⾼温烹饪淀粉类⾷品。

2、提倡合理营养，平衡膳⾷，改变油炸和⾼脂肪⾷品为主的饮⾷习惯，减少因丙烯酰胺可能导致的健康危害。

2005年4⽉13⽇附件：丙烯酰胺危险性评估报告⾷品中丙烯酰胺的危险性评估丙烯酰胺（CH2＝CH－CONH2）是⼀种⽩⾊晶体物质，分⼦量为70.08，是1950年以来⼴泛⽤于⽣产化⼯产品聚丙烯酰胺的前体物质。

聚丙烯酰胺主要⽤于⽔的净化处理、纸浆的加⼯及管道的内涂层等。

在欧盟，丙烯酰胺年产量约为8－10万吨。

2002年4⽉瑞典国家⾷品管理局（National Food Administration，NFA）和斯德哥尔摩⼤学研究⼈员率先报道，在⼀些油炸和烧烤的淀粉类⾷品，如炸薯条、炸⼟⾖⽚、⾕物、⾯包等中检出丙烯酰胺；之后挪威、英国、瑞⼠和美国等国家也相继报道了类似结果。

香烟烟雾提取物对大鼠肺成纤维细胞生长的影响

香烟烟雾提取物对大鼠肺成纤维细胞生长的影响

香烟烟雾是有众多化学成分的复杂混合物，超过6000种成分，会对肺脏和全身产生有害影响。

吸烟已被公认与多种肺部疾病的发生发展有关，吸烟是肺癌的主要病因，也是慢性阻塞性肺疾病（COPD）等疾病的主要危险因素。

如今，吸烟还被认为与某些间质性肺病及肺纤维化有关[1]，但尚不清楚吸烟引起间质性肺病的发病机制，对吸烟与肺纤维化关系的研究也很少。

为此本研究利用体外培养的正常大鼠及肺纤维化大鼠的肺成纤维细胞，观察不同浓度香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract，CSE）对两种细胞的影响，探讨香烟烟雾在肺纤维化中所起的作用。

1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 主要试剂 博来霉素购自天津太河制药有限公司；RPMI-1640培养基、胰蛋白酶、胎牛血清购自美国GIBCO 公司；凋亡检测试剂盒购自美国BD 公司；兔抗大鼠波动蛋白、纤维粘连蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）单克隆抗体及SABC 免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司、第二抗体为羊抗兔IgG 购自美国Jackson 公司；化学试剂购自美国Sigma 公司。

1.1.2 仪器 二氧化碳培养箱（美国FORMA 公司【摘要】 目的 通过观察不同浓度的香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract，CSE）对正常及肺纤维化大鼠肺成纤维细胞的影响，探讨香烟烟雾与肺纤维化的可能关系。

方法 体外培养的正常及博莱霉素造模的肺纤维化大鼠的肺成纤维细胞，分别以不同浓度（25％、50％、100％）的CSE 作用12h 和24h。

噻唑蓝还原法（MTT 法）检测吸光值；流式细胞仪法观察细胞坏死与凋亡情况及细胞周期S 期（DNA 合成期）和G 1期（DNA 合成前期）的比值。

结果 高浓度（100％）的CSE 主要引起两种大鼠肺成纤维细胞的坏死。

较低浓度（25％、50％）的CSE 对正常大鼠肺成纤维细胞无明显影响（P >0.05）。