大孔树脂对金莲花总黄酮的分离纯化研究
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２ 方 法与结 果
金 莲 花 为 毛 莨 科 植 物 金 莲 花 （ ｒｌｓＣ ｉ ｎｉ Ｔｏｉ ｈ ｅｓ ｌｕ ｎ ｓ Ｂｅ的干燥花及花蕾 ， ｇ） 】 产于河北 、 ］ 吉林 、 山西、 辽宁等
２ １ 上柱 液 的制 备 ． 金莲 花 药 材 粉 碎 后 ， １ 以 ２倍 量 ６ ％ 的 乙 醇 于 ０ ８ ℃回流提取 １５ ， ５ ．ｈ 提取 ３次 ； 合并 ３次滤 液 ， 然后 以 聚酰胺层 析柱 （ｃ ） 提 取 液进 行 预处 理 ， 体方 法 ５唧 对 具 为： 以聚酰胺 层析 柱对提取 液充分 吸 附 ， 然后 以大量 蒸
论 ：Ｍ一３ １ Ｄ ０ 型大孔树 脂对金 莲花 总黄酮有较 好 的吸 附与解吸特 性 ， 适合 用于金 莲花 总黄 酮的分 离与纯
化。
关键词 ： 莲花 ； 金 总黄 酮 ； 大孔 吸 附树 脂 ； 离纯化 分
中图分 类号 ： ２４２ Ｒ ８ ．
文献标 识码 ： Ａ
文章编号 ：０２ ３２２０ ）２ ０２— ３ １０ —２９（０７０ —０４ ０
维普资讯
Ａ ＭＰ． ｇ ２ ０ Ｖ １３ ， ｏ ２ Ｃ Ａｕ ， ０ ７， ｏ ． ５ Ｎ ．
中药研 究
大孔树脂对金莲花 总黄酮 的分 离纯化研 究
柳伟 ， 韩凤梅 ， 李路 军 ， 陈勇
（ 湖北大学 中药生物技术省重点实验室， 湖北 武汉 ４０６ ） ３０２
和吸 附量为 ３ ．７ｍ ・。， 吸率 为 ９ ．） ； 态吸 附量 为 ３ ．３ｍ 。～， ９２３ ｇｇ 。解 ７２ ％ 动 Ｊ ６ ７８ ｇ ｇ 解吸 率 为 ９ ．５ ； 柱前 ３５ ％ 上
粗 提物 中金 莲 花总黄 酮的含 量 为 ３ ．７ ， ５ ５ ％ 经大孔 树脂分 离纯化 后金 莲 花 总黄 酮的含 量为 ６ ．３ 。结 １３ ％
摘 要： 目的 ： 究大孔吸 附树 脂分 离纯化金 莲花 总黄 酮 的工 艺条件 。方 法 ： 研 以金 莲花 总黄 酮的 静 态吸
附量 和解吸率 为指标 ， ４种 大孔 吸 附树 脂 Ｄ 对 Ｍ一２１Ｄ一１１ 、 Ｍ一３１Ｄ ０、 ０ —１Ｄ ０ 、 Ｍ一４ １ 行 筛选 ， 以所 ０进 并
选树 脂进 行动 态吸 附和解吸 实验 ， 优化 纯化 条件 。结果 ： Ｍ一３ １ 大孔树 脂对金 莲花总黄 酮的静 态饱 Ｄ ０型
发展起来 的一类有机高聚吸附剂， 在中草药化学成分 的 富集 、 分离 与纯 化 中 的应 用 日趋 广 泛－ ］对黄 酮 类 ４ ， 物质 的分离 与纯 化也 有 大量 应 用 －， 用 于 金莲 花 总 ６但 黄酮的分离纯化则少见报道。本实验研究了大孔树脂 对金莲花总黄酮的分离纯化条件， 取得 了比较满意 的 效果 。
１ 仪器 与试剂
照品 １． ｇ加 甲醇溶解后定容到 ５ ． ｌ ００ ， ａ ｒ ００ 。分别准确 ｍ 移取上 述溶 液 ０ １０ ２０３０４ ０５ ０和 ６０ ｌ 于 ，．， ．， ．，．， ． ．ｍ 置 ２ ．ｍ 容量瓶 中， 用水补至 ６ ０ ｌ然后各加 ５ ５０ ｌ 均 ．ｍ ； ％ Ｎ Ｎ ．ｍ ， ａ Ｏ １０ ｌ静置 ６ ｉ； 各加 １％Ａ （ Ｏ ） 溶液 ｍｎ再 ０ １Ｎ ３３ １０ ｌ静置 ６ ｉ； ．ｍ ， ｍｎ 最后各加 ｌ ｏ Ｌ ａＨ溶液 １． ｌ ｍｌ ＮＯ ／ ０Ｏ ， ａ ｒ 并以水定容至刻度。在 ５０ｍ波长下 ， ０ｎ 以试剂空白为 参比， 测定不 同浓 度芦 丁 溶液 的吸光 度 Ａ。对 Ａ与 芦 丁浓度 Ｃ ｔ／ａ 进行线性 回归处 理， （ ｈ） Ｏ 当芦丁浓度在 ８ ４／／ ｌ 围内时 ， ～ ８ ｇｍ 范 ＿ ｔ 线性 回归方程 为： Ａ＝０００ Ｃ ．１６
作者简介 ： （９５ ， ， ， 柳伟 １７ 一）男 武汉 在读硕士， 研究方向 ： 天然药物化学 。
＊通 讯作者 ： 陈勇 ，ｅ：０７８６３９ ， Ｔｌ（２ ）８６５０ Ｅ—ｍ ／ ｙ０６０ ｐ ．ｏ．ｎ ａ １１１ ＠ｎｃｇｖ ｃ ｈｃ
２３ １ 等温吸附曲线 ： １０ 预处理好 的大孔树脂 ．． 取 ．ｇ 置 于 ５ｍ 具 塞锥 形 瓶 中 ， 入 ３ｍ 一 系 列不 同浓 度 ０ｌ 加 ０ｌ 的金莲花总黄酮上柱液 ， 室温下振荡 ２ｈ ４ 。测定吸附
馏水洗去杂质 ， 再用 ９ ％乙醇进行洗脱 ， ５ 以盐酸镁粉 反应为指示 ， 洗脱至该反应为阴性 ， 收集洗脱液， 将洗 脱 液浓缩 即可得 到上柱 液 。
２２ 含量 测定 ． 标准 曲线 的制 备 ： 密称 取 干燥 至 恒 重 的芦 丁 对 精
总黄酮制剂具有重要的意义。大孔吸附树脂是近年来
１５ｍ×２ｃ ５ｍ×１０ｍ； 丁 对 照 品 （ ．ｃ ５ｍ、ｃ ０ｃ 芦 中国 生 物 制
品检定所 ）长瓣金莲花（ ： 经本院植物学教研室王万贤
教授 鉴定 ）试剂 均为分析 纯 。 ；
２３ 静态 吸附 实验 ．
收稿 日期 －０ 一１ —１ ＇￣ ２ ２ Ｏ 修 回１ ２０ ３期：０７—０ —１ ３ ８
＋０．０１ ｒ ０ ６， ＝０． ９ 仪 ； Ｍ一２ １Ｄ一１１ ６１ Ｄ ０、 ０— １Ｄ 、 Ｍ一３１Ｄ ４ １ ０ 、 Ｍ一 ０ 净品级 大孔 吸 附树 脂 （ 天津 海 光
化工 有限公 司） 聚酰胺 （０～６ ； ３ ０目） 玻璃 色谱 柱 ： ；
地。金莲花始见于 《 本草纲 目拾遗》 味苦 、 “ 性寒” 用 ， 以“ 治疮 喉肿 、 浮热牙 宣 、 耳痛 目摘 ” 。已有研 究证 明金 莲花的主要活性成分为黄酮类物质 ， 如其 中的牡荆甙 （ ｉｘ ） Ｖｔ ｉ 和荭 草 甙 （ ｆｎｎ 具有 明显 的抑 菌 活性 ， ｅｎ Ｏ ｅｔ ） ｉ ｉ 是 金莲花 的 主要 质量控制 指标成 分－ Ｊ因此开发 金莲 花 ２ ，
金 莲 花 为 毛 莨 科 植 物 金 莲 花 （ ｒｌｓＣ ｉ ｎｉ Ｔｏｉ ｈ ｅｓ ｌｕ ｎ ｓ Ｂｅ的干燥花及花蕾 ， ｇ） 】 产于河北 、 ］ 吉林 、 山西、 辽宁等
２ １ 上柱 液 的制 备 ． 金莲 花 药 材 粉 碎 后 ， １ 以 ２倍 量 ６ ％ 的 乙 醇 于 ０ ８ ℃回流提取 １５ ， ５ ．ｈ 提取 ３次 ； 合并 ３次滤 液 ， 然后 以 聚酰胺层 析柱 （ｃ ） 提 取 液进 行 预处 理 ， 体方 法 ５唧 对 具 为： 以聚酰胺 层析 柱对提取 液充分 吸 附 ， 然后 以大量 蒸
论 ：Ｍ一３ １ Ｄ ０ 型大孔树 脂对金 莲花 总黄酮有较 好 的吸 附与解吸特 性 ， 适合 用于金 莲花 总黄 酮的分 离与纯
化。
关键词 ： 莲花 ； 金 总黄 酮 ； 大孔 吸 附树 脂 ； 离纯化 分
中图分 类号 ： ２４２ Ｒ ８ ．
文献标 识码 ： Ａ
文章编号 ：０２ ３２２０ ）２ ０２— ３ １０ —２９（０７０ —０４ ０
维普资讯
Ａ ＭＰ． ｇ ２ ０ Ｖ １３ ， ｏ ２ Ｃ Ａｕ ， ０ ７， ｏ ． ５ Ｎ ．
中药研 究
大孔树脂对金莲花 总黄酮 的分 离纯化研 究
柳伟 ， 韩凤梅 ， 李路 军 ， 陈勇
（ 湖北大学 中药生物技术省重点实验室， 湖北 武汉 ４０６ ） ３０２
和吸 附量为 ３ ．７ｍ ・。， 吸率 为 ９ ．） ； 态吸 附量 为 ３ ．３ｍ 。～， ９２３ ｇｇ 。解 ７２ ％ 动 Ｊ ６ ７８ ｇ ｇ 解吸 率 为 ９ ．５ ； 柱前 ３５ ％ 上
粗 提物 中金 莲 花总黄 酮的含 量 为 ３ ．７ ， ５ ５ ％ 经大孔 树脂分 离纯化 后金 莲 花 总黄 酮的含 量为 ６ ．３ 。结 １３ ％
摘 要： 目的 ： 究大孔吸 附树 脂分 离纯化金 莲花 总黄 酮 的工 艺条件 。方 法 ： 研 以金 莲花 总黄 酮的 静 态吸
附量 和解吸率 为指标 ， ４种 大孔 吸 附树 脂 Ｄ 对 Ｍ一２１Ｄ一１１ 、 Ｍ一３１Ｄ ０、 ０ —１Ｄ ０ 、 Ｍ一４ １ 行 筛选 ， 以所 ０进 并
选树 脂进 行动 态吸 附和解吸 实验 ， 优化 纯化 条件 。结果 ： Ｍ一３ １ 大孔树 脂对金 莲花总黄 酮的静 态饱 Ｄ ０型
发展起来 的一类有机高聚吸附剂， 在中草药化学成分 的 富集 、 分离 与纯 化 中 的应 用 日趋 广 泛－ ］对黄 酮 类 ４ ， 物质 的分离 与纯 化也 有 大量 应 用 －， 用 于 金莲 花 总 ６但 黄酮的分离纯化则少见报道。本实验研究了大孔树脂 对金莲花总黄酮的分离纯化条件， 取得 了比较满意 的 效果 。
１ 仪器 与试剂
照品 １． ｇ加 甲醇溶解后定容到 ５ ． ｌ ００ ， ａ ｒ ００ 。分别准确 ｍ 移取上 述溶 液 ０ １０ ２０３０４ ０５ ０和 ６０ ｌ 于 ，．， ．， ．，．， ． ．ｍ 置 ２ ．ｍ 容量瓶 中， 用水补至 ６ ０ ｌ然后各加 ５ ５０ ｌ 均 ．ｍ ； ％ Ｎ Ｎ ．ｍ ， ａ Ｏ １０ ｌ静置 ６ ｉ； 各加 １％Ａ （ Ｏ ） 溶液 ｍｎ再 ０ １Ｎ ３３ １０ ｌ静置 ６ ｉ； ．ｍ ， ｍｎ 最后各加 ｌ ｏ Ｌ ａＨ溶液 １． ｌ ｍｌ ＮＯ ／ ０Ｏ ， ａ ｒ 并以水定容至刻度。在 ５０ｍ波长下 ， ０ｎ 以试剂空白为 参比， 测定不 同浓 度芦 丁 溶液 的吸光 度 Ａ。对 Ａ与 芦 丁浓度 Ｃ ｔ／ａ 进行线性 回归处 理， （ ｈ） Ｏ 当芦丁浓度在 ８ ４／／ ｌ 围内时 ， ～ ８ ｇｍ 范 ＿ ｔ 线性 回归方程 为： Ａ＝０００ Ｃ ．１６
作者简介 ： （９５ ， ， ， 柳伟 １７ 一）男 武汉 在读硕士， 研究方向 ： 天然药物化学 。
＊通 讯作者 ： 陈勇 ，ｅ：０７８６３９ ， Ｔｌ（２ ）８６５０ Ｅ—ｍ ／ ｙ０６０ ｐ ．ｏ．ｎ ａ １１１ ＠ｎｃｇｖ ｃ ｈｃ
２３ １ 等温吸附曲线 ： １０ 预处理好 的大孔树脂 ．． 取 ．ｇ 置 于 ５ｍ 具 塞锥 形 瓶 中 ， 入 ３ｍ 一 系 列不 同浓 度 ０ｌ 加 ０ｌ 的金莲花总黄酮上柱液 ， 室温下振荡 ２ｈ ４ 。测定吸附
馏水洗去杂质 ， 再用 ９ ％乙醇进行洗脱 ， ５ 以盐酸镁粉 反应为指示 ， 洗脱至该反应为阴性 ， 收集洗脱液， 将洗 脱 液浓缩 即可得 到上柱 液 。
２２ 含量 测定 ． 标准 曲线 的制 备 ： 密称 取 干燥 至 恒 重 的芦 丁 对 精
总黄酮制剂具有重要的意义。大孔吸附树脂是近年来
１５ｍ×２ｃ ５ｍ×１０ｍ； 丁 对 照 品 （ ．ｃ ５ｍ、ｃ ０ｃ 芦 中国 生 物 制
品检定所 ）长瓣金莲花（ ： 经本院植物学教研室王万贤
教授 鉴定 ）试剂 均为分析 纯 。 ；
２３ 静态 吸附 实验 ．
收稿 日期 －０ 一１ —１ ＇￣ ２ ２ Ｏ 修 回１ ２０ ３期：０７—０ —１ ３ ８
＋０．０１ ｒ ０ ６， ＝０． ９ 仪 ； Ｍ一２ １Ｄ一１１ ６１ Ｄ ０、 ０— １Ｄ 、 Ｍ一３１Ｄ ４ １ ０ 、 Ｍ一 ０ 净品级 大孔 吸 附树 脂 （ 天津 海 光
化工 有限公 司） 聚酰胺 （０～６ ； ３ ０目） 玻璃 色谱 柱 ： ；
地。金莲花始见于 《 本草纲 目拾遗》 味苦 、 “ 性寒” 用 ， 以“ 治疮 喉肿 、 浮热牙 宣 、 耳痛 目摘 ” 。已有研 究证 明金 莲花的主要活性成分为黄酮类物质 ， 如其 中的牡荆甙 （ ｉｘ ） Ｖｔ ｉ 和荭 草 甙 （ ｆｎｎ 具有 明显 的抑 菌 活性 ， ｅｎ Ｏ ｅｔ ） ｉ ｉ 是 金莲花 的 主要 质量控制 指标成 分－ Ｊ因此开发 金莲 花 ２ ，
