从环境中分离酵母菌 实验设计方案
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实验设计方案
从环境中分离酵母菌
班级：10级生科（2）班
组员:刘楠楠: 201008010222
潘婷: 201008010225
李炜昊：201008010221
马森:201008010224
实验：从环境中分离出酵母菌
实验设计方案
一、 采样
采样的理由：
1、 酵母菌与人类的关系密切
酵母菌是一类单细胞真菌的俗称，分类学上分属于子囊菌纲
半知菌类
特征:
1. 个体一般以单细胞状态存在；
2. 多数营出芽生殖，有的裂殖；
3. 能发酵糖类产能；
4. 细胞壁常含有甘露聚糖；
5. 喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。
酵母菌分布：主要生长在偏酸的含糖环境中，在水果、蜜饯的表面和果园土壤中最为常见。
种类：据1982年的资料，已知的酵母有56属，500多种。酵 母菌与人类的关系极其密切。千百年来，人类几乎天天离不开酵母菌，例如酒类的生产，面包的制作，乙醇和甘油发酵，石油及油品的脱蜡，饲用、药用等的生产。
2、 酵母菌细胞的形态和构造
电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图
细胞直径比细菌粗10倍左右，如Saccharomyces cerevisiae细胞的宽度为2.5~10μm，长度为4.5~21μm。因此在光学显微镜下可以模糊地看到它们细胞内的各种结构分化。酵母菌细胞的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
细胞壁：酵母细胞壁呈“三明治”结构 外层：甘露聚糖（约占30%，以α-糖苷键联结（并非所有酵母菌都有）
内层：葡聚糖（约占30-40%，由D-葡萄糖以β-糖苷键联结）
中间层：蛋白质（含6-8%，多为酶类）
细胞膜： 酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（甾醇）、VitD的前体----麦角固醇，这在原核生物是罕见的。
细胞核:
核膜： 核孔40～70nm ，透性比任何生物膜都大。
• 染色体:由DNA和组蛋白牢固结合而成，呈线状, 数目因种而异。
• 核仁：核内有一或几个区域rRNA含量很高，这一区域为核仁，是合成核糖体的场所。
• 中心体: 在核膜外，由蛋白质亚基组成的细丝 状结构，在细胞繁殖分裂中起作用。 细胞核的功能:携带遗传信息，控制细胞的增殖和代谢。
3、 酵母菌的繁殖方式
4.酵母菌的菌落
大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调。常见白色、土黄色、红色。
采样的方法：
原理：大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5一6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。故可以从甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮上取样。利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长）
实验材料和用具
1、 苹果果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。
2、豆芽汁葡萄糖培养基 芽殖（各属酵母都存在）裂殖（裂殖酵母属）节孢子（地霉属）掷孢子（掷孢酵母属）后垣孢子（白假假丝酵母）产无性孢子无性有性（产子囊孢子）酵母菌的繁殖方式原料：黄豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、 蒸馏水（1000ml），自然PH
配制方法： 陈新鲜豆芽100克，放入烧杯中，加水1000ml,煮沸约30min，用纱布过滤，用水补足原量，再加入葡萄糖50克，煮沸融化，121℃灭菌20min.
实验步骤
l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培养液试管中，置28一30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。
2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。
3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。
4、活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。
芽殖过程：
• 母细胞形成小突起（A—D）
• 核裂（E—G）
• 原生质分配（H—I）
• 新膜形成（J—K）
• 形成新细胞壁（L）
二、分离
原理：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。用划线法分离酵母菌培养液，从而得到单个菌落。挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终可获得纯培养。
培养基的设计：马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml），自然PH
配制方法：
将马铃薯去皮后，切片，加水煮烂（煮沸20—30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用4层纱布过滤，再加入糖和琼脂，加热融化后再补足水分至1000ml,并在121摄氏度条件下高压灭菌20分种。
方法:平板划线法
三、 鉴定 原理：大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。
方法:制玻片并在显微镜下观察其形态
四、实验的过程记录及其结果、结果分析
日期 2012/5/27 2012/5/28 2012/5/30 2012/5/31 2012/6/1
记录 配制豆芽汁葡萄糖培养液，并接种，用的材料是成熟的苹果皮。 在28℃的环境下培养了24小时，观察现象，培养液变浑浊。 配制豆芽汁培养基，进一步进行培养。 1.取菌液制片并滴加少许的美蓝染液，用显微镜观察，酵母菌大部分为活的，且处于母细胞形成小突起阶段。2.配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基，用划线法分离酵母菌 1.观察培养基上的菌落，菌落表面光滑、湿润，容易挑起，菌落的质地很均匀，为乳白色。初步断定分离纯化出来的是酵母菌。
2.镜检，在显微镜下观察大部分酵母菌处于核裂阶段，少数处于新膜形成阶段。可断定为酵母菌
五、结果及结果分析:在本实验中，我们的最根本目的是从环境中分离出酵母菌，依据酵母菌的特性，我们选择从成熟的苹果皮中提取，依据酵母菌的形态、菌落特征我们进行了鉴定，最终在经过六天的实验后从环境中提取出了酵母菌，但在实验的过程中所提取出来的酵母菌的量不多，分析原因大概有如下两点:1.苹果皮在接种前洗过，把一些菌洗掉了。2.接种时，接种的量不足，导致后续的培养出来的量也不足。
六、实验感想：此次实验是由四人的一个小组合作完成，在这个过程中，我们既有明确分工，又有合理的合作，同时，我们对自己设计的实验方案不断进行改进，通过这次的实验我们对微生物的实验过程有了更深刻的了解，我们每个人都会进行一次以上的实际操作，在这个过程中，我们对微生物实验的无菌操作及灭菌方法的也有了较好的掌握。
