麻疹疫苗病毒感染对JEC生长的影响

第３Ｏ卷第３期　２０ｏ７年９月　遵义医学院学报　

ＡＣＴＡ　ＡＣＡＤＥＭＩＡＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＡＥ　ＺＵＮＹＩ　Ｖ０１．３Ｏ　Ｎ０．３　

Ｓｅｐ．２００７　

麻疹疫苗病毒感染对Ｊ　ＥＣ生长的影响　王春艳，吴中明　（遵义医学院微生物教研室，贵州遵义５６３００３）　

【摘要】目的探讨麻疹疫苗病毒（ＭＶ）对子宫内膜腺癌细胞系ＪＥＣ的敏感性及其生长的影响。方法用倒置显微　镜、ＨＥ染色法，观察麻疹疫苗病毒感染ＪＥＣ的形态结构变化，以此确定ＪＥＣ对ＭＶ感染的敏感性；用四甲基偶氮唑蓝　（ｍＴ）比色法动态监测ＭＶ对ＪＥＣ增殖活力的影响。结果ＭＶ感染后第２天，即见形成形态巨大的多核巨细胞，ＨＥ　染色可见在胞浆和胞核内有嗜酸性包涵体结构形成，ＭＴｒ结果提示，感染后６ｄ内，病毒对细胞的生长表现为促进作　用，而且感染浓度越高，其促进作用越强。６天后，ＭＶ对细胞的生长开始发挥抑制作用，最终造成细胞死亡，其抑制作　用于感染时间、浓度呈正相关。结论ＪＥＣ是一株对ＭＶ敏感的细胞，ＭＶ能够抑制ＪＥＣ的生长，其抑制作用的发挥与　感染时间及浓度有正相关　【关键词】麻疹疫苗病毒；ＪＥｃ；细胞生长　【中图分类号】Ｒ７３７．３３［文献标识码】Ａ　［文章编号】１０００－２７１５（２００７）０３—０２４８—０３　

Ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅ　ｖａｃｃｉｎａｌ　ｖｉｒｕｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ＷＡＮＧ　Ｃｈｕｎ－ｙａｎ，ＷＵ　Ｚｈｏｎｇ－ｍｉｎｇ　（Ｄｅｐａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｉｏｌｏｇｙ，Ｚｕｎｙｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｚｕｎｙｉ　５６３ｏｏ３，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｑ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅ　ｖａｅｅｉｎａｌ　ｖｉｒｕｓ　ｏｎ　ＪＥＣ（ｅｄｏｍｅｔｒｉａｌ　ａｄｅｎｏｃａｍｉｎｏｍａ　ｃｅｌ１）ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＪＥＣ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｓｌｅ　ｖａｅｅｉｎａｌ　ｖｉｒｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＪＥＣ　Ｗｅｒｅ　ｏｂ￣ｒｖｅ　ｂｙ　ｉｎｖｅｒｔｅｄ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌｓ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｓｌｅ　ｖａｅｅｉｎａｌ　ｖｉｒｕｓ　ｉｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＭＴＹ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌａｒｇｅ　ｓｙｎｃｙｔｉｕｍ　ｃｅｌｌ　ｉｎ　ＭＶ—ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｓｅｅｎ　ａｔ　２　ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｂｏｄｙ　ｉｎ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ　ａｎｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ｏｆ　ＪＥＣ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＭＶ．Ａｆｔｅｒ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ。ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＭＴｒ　ｓｈｏｗｅｄ　ＭＶ　ｐｒｏｍｏｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　６　ｄａｙｓ。　ｆｉｒｓｔ，ｔｈｅｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ。ａｔ　ｌａｓｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌｓ　ｔｏ　ｄｅａｔｈ　ａｆｔｅｒ　６ｔｈ　ｄａｙ，ｔｈｅ　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｉｍｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌ　ｉｓ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｔｏ　ＭＶ，ＭＶｅａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＪＥＣ　ｃｅｌｌｓ．Ｉｔｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｅｓ　ａｒｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｉｍｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ．　［ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｌｎｅａｓｌｅ　ｖａｅｃｉｎａｌ　ｖｉｒｕｓ；ＪＥＣ　ｃｅｌｌｓ；ｇｒｏｗｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　

副粘病毒科的麻疹病毒（ｍｅａｓｌｅ　ｖｉｒｕｓ，ＭＶ）可以　感染多种细胞系，如ＦＬ、ＢＨＫ２１、Ｍｅｍ、Ｈｅｌａ、Ｖｅｒｏ和　ＫＢ等细胞，并可造成多种细胞的凋亡【　－３］，根据这种特　性，近年有人利用ＭＶ开展了治疗肿瘤的研究　，并取　得了一定的成果。ＪＥＣ细胞是本室建立的一株人子宫　内膜腺癌细胞系网，当用ＭＶ可以感染ＪＥＣ时，可以出　［收稿日期】２００７－０４—１２　【基金项目］贵州省省长　［２００５：３１３］资助　・２４８・　现多核巨细胞和嗜酸性包涵体等变化同。肿瘤细胞系　是研究病毒学和肿瘤学的实验工具，本研究拟用减毒　麻疹疫苗病毒感染ＪＥＣ、并以Ｖｅｒｏ—Ｅ６绿猴肾细胞系　作对照，观察ＪＥＣ对ＭＶ的敏感性及感染后对细胞生　长的影响，为下一步探讨利用麻疹疫苗病毒治疗人子　宫内膜癌和其他肿瘤，提供依据。　

１材料和方法　１．１材料麻疹疫苗病毒为北京天坛生物制品股份　有限公司生产的麻疹减毒活疫苗，批号：　２００４０１０１　１０２；ＪＥＣ和Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞均由遵义医学院　微生物教研室保存；ＲＰＭＩ一１６４０为ＧＩＢＣＯ公司产品：　

维普资讯 http://www.cqvip.com 遵义医学院学报　３０卷　新生小牛血清为上海第二医科大学产品，ＭＴｒ购于华　美生物工程公司。　１．２　方法　１，２．１病毒感染浓度的选定ＴＣＩＤ∞测定按照中国　生物制品规程操作，以含２％小牛血清的维持液进行　倍比稀释病毒，接种生长良好的ＪＥＣ时，每个稀释度　设４复孔，并设空白对照，置３７℃、相对湿度９７％、５％　ＣＯ　孵箱中培养，每日观察，连续观察７ｄ。以第７天能　使２孔或２孔以上感染细胞出现多核巨细胞病变的　病毒的最高稀释度作为病毒效价。经试验，病毒　ＴＣＩＤ５０的稀释度为１：１６０，拟用１：８０、ｌ：４０、ｈ２０、１：１０　四个稀释度作为感染浓度。　１．２．２　ＭＶ感染对细胞生长的影响　用９６孔板接种　细胞，每孑Ｌ接种８ｘ１０ｓ个细胞，先用含１０％／ｂ牛血清　的ＲＰＭＩ１６４０生长液进行培养，至细胞贴壁伸展生长　后，然后感染细胞，每个稀释度设６复孔，并设无病毒　感染的正常细胞对照。病毒感染后改用含２％小牛血　清的ＲＰＭＩ１６４０维持液进行培养，分别于感染后第１　天至第１Ｏ天进行ＭＴＦ检ｉ贝４。　１．２．３细胞形态结构变化观察用浓度为５ｘ１０　细　胞接种于２５ｍｌ培养瓶，待细胞成单层后，以ｌ：２Ｏ病　毒稀释度感染，比较两种细胞形成多核巨细胞的时间　及形态变化。ＭＶ感染后两天，收集细胞，进行石蜡包　埋切片，ＨＥ染色，观察细胞内包涵体的形成。　１．２．４统计方法采用ＳＰＳＳ１２．０统计软件进行方差　分析，两组间比较采用ｔ检验。实验数据以均数±标准　差（　）表示，两变量的相关性以相关系数（ｒ）值确定，　ｒ值采用ｔ检验。　

２结果　２．１　多核巨细胞的形成ＭＶ感染后第２天，Ｖｅｒｏ—Ｅ　细胞在部分区域形成多核巨细胞（见图１）；而ＪＥＣ细　胞在感染第２天开始，亦见细胞收缩变圆，部分细胞　相互融合，细胞核聚集，形成形态典型的巨大的多核　巨细胞，融合细胞的周围呈空白区（图２）。　２．２包涵体观察ＭＶ感染后两天，经石蜡包埋切　片，ＨＥ染色，在细胞的胞浆及胞核内均可见典型的圆　形嗜酸性包涵体形成（图３　Ａ、Ｂ）。　２．３　ＭＶ感染对ＩＥＣ细胞的生长抑制作用（表１）　结果以抑制率表示，计算按公式：抑制率＝１一（病毒组　ＯＤ／正常对照组ＯＤ）　２．３．１　病毒浓度的影响　ＭＴＦ法结果表明，同一感染　

—＿　图１　Ｖｅｒｏ—Ｅ６形成的多核图２　ＪＥＣ形成的多核巨细　巨细胞（ｘ２００）　胞（ｘ２００）　Ｆｉｇ．１　ｌａｒｇｅ　ｓｙｎｃｙｔｉＢｉｌｌ　ｃｅｌｌ　ｉｎ　Ｆｉｇ．２　ｌａｒｇｅ　ｓｙｎｅｙｔｉｎｍ　ｃｅｌｌ　Ｖｅｒｏ（ｘ２００）　ｉｎＪＥＣ（ｘ２００）　

图３胞浆及核内形成的包涵体（Ａ核内包涵体Ｂ浆内包涵　体）ＨＥｘｌ０００　Ｆｉｇ３　ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｂｏｄｙ　ｉｎ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ　ａｎｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ｏｆ　ＪＥＣ（Ａ，ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｂｏｄｙ　ｉｎ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｎｕｃｌｅｕｓ，Ｂ　ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｂｏｄｙ　ｉｎ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ）ＨＥｘｌ０００　

浓度条件下，病毒感染时间与抑制率呈正相关（Ｐ＜　Ｏ．０１）。感染后６ｄ内，病毒对细胞的生长表现为促进　作用；而６ｄ后，开始出现抑制作用。　

表１　ＭＶ感染ＪＥＣ细胞后的Ｍ１＿ｒ抑制率（　，ｎ＝６）　Ｔａｂｌｅ１　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ＭＴＴ　Ｏｉｌ　ＪＥＣ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　’ｖｉ出ＭＶ（　．ｉｌ＝６）　

感染后６ｄ以内，各浓度组的抑制率均为负值，说　明病毒对细胞的生长有一定的促进作用。１ｄ至３ｄ，各　浓度组的抑制率呈逐步降低的趋势，而且感染浓度越　高，感染Ｈ，／Ｉ＇．－Ｊ越长其降低的水平越高，提示感染浓度、　感染时间与病毒的促生长作用呈正相关（Ｐ＜Ｏ．０５）；６ｄ　后，各感染浓度组对细胞的抑制率上升为正值，病毒　对细胞的生长开始发挥抑制作用，６ｄ至９ｄ随时间的　

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