鸡球虫的分离与感染试验

鸡球虫的分离与感染试验
作者：戴银沈学怀张丹俊等
来源：《安徽农业科学》2015年第06期
摘要 [目的] 为探讨长期有效的鸡球虫病防控方法奠定基础。

[方法] 分离并培养鸡球虫卵囊，通过感染雏鸡试验研究其卵囊发育和感染的过程。

[结果] 分离到的球虫卵囊大多形态饱满，为宽椭圆形，少数为卵圆形，壁光滑，中间明显可见1个圆形核，原生质呈淡褐色，卵囊大小约为18.5～25.5 μm×16.7～22.5 μm。

正常的孢子化卵囊多能见到分化明显的4个孢子，18 h可看到部分卵囊孢子化，36 h孢子化达80%。

接种后发病雏鸡的体重缓慢增加，血便明显，死亡率较高，同时解剖可见盲肠病变明显，肠壁增厚，严重者因充满大量血液而盲肠肿大。

[结论]根据卵囊的形态、发病鸡的临床表现、卵囊寄生部位和盲肠病理变化等特征，初步判断分离的球虫主要为柔嫩艾美耳球虫。

关键词鸡球虫；卵囊；雏鸡感染特征
中图分类号S852.72+3文献标识码A文章编号0517-6611（2015）06-151-02
鸡球虫病（Chicken coccidiosis）是一种鸡常见且危害严重的寄生虫病，经常由一种或多种球虫联合引起的急性流行性寄生虫病[1-2]。

不同种类的球虫在鸡肠道内寄生部位有所差异，其致病力也有所不同，其中柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）寄生于盲肠，致病力最强[3]。

10～30日龄的雏鸡发病率最高，死亡率为20%～30%，严重时可高达80%[4]。

感染的雏鸡病愈后，生长发育受阻，体重增加缓慢，严重影响肉鸡饲料转化率及蛋鸡产蛋率。

成年鸡则一般不发病，但多为带虫者，增重和产蛋能力降低，是传播球虫病的重要病源之一。

该病在全球发病普遍，我国每年也因该病造成巨大的经济损失。

目前，使用抗生素类和化学合成药物是控制鸡球虫病的主要手段，这些药物对鸡球虫病的防治起到重要作用，但由于大部分养殖人员没有科学用药，再加上我国对抗球虫药物使用的监管力度不够，长期高剂量用药现象严重，导致大量耐药虫株的出现，使得一些抗球虫治效果降低甚至失效，因此对鸡球虫病防治工作越发困难[5-7]。

笔者分离并培养较为常见且危害严重的鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊，研究卵囊发育和感染的过程，以期为探索长期有效的鸡球虫病防控方法打下基础。

1材料与方法
1.1试验材料安徽省某家禽养殖场具有典型感染球虫病鸡的粪便。

1.2试剂与仪器
1.2.1 试剂。

饱和食盐水、生理盐水、2.5%重铬酸钾溶液。

1.2.2 仪器。

烧杯、计数板、载玻片、盖玻片、培养皿、玻璃棒、60目铜筛、离心管、低速离心机、恒温培养箱、电子天平、电子显微镜、烘箱。

1.3球虫卵囊的分离与培养从安徽省农业科学院畜牧兽医研究所的养殖基地取感染球虫病鸡的粪便置于干净的烧杯中，加入少量蒸馏水用玻璃棒捣碎混匀，再加入5倍体积的蒸馏水搅拌均匀，用60目筛网过滤，重复水洗粪便2～3次，弃去残渣。

将滤液置于离心管中，4 00
0r/min离心6 min，弃去上清液。

在沉淀中加入5倍体积的饱和食盐水，搅拌混匀，装入离心管中，4000 r/min离心6 min，取上清液置于干净烧杯中，弃沉淀。

用蒸馏水6倍稀释上清，稀释后置于离心管中，4 000 r/min离心6 min，弃上清液，重复水洗2次，洗去卵囊沉淀中的盐分，加入2.5%的重铬酸钾溶液，置于培养皿中混匀，28 ℃条件下培养。

1.4球虫卵囊的观察将培养18、24、36、48 h后的球虫卵囊置于显微镜下观察并记录其形态、颜色、大小和数量变化。

当有80%以上的卵囊发育为孢子化卵囊时停止培养，收集卵囊，于4 ℃下保存备用。

1.5球虫卵囊的接种将30只15日龄的健康肉雏鸡随机分成感染组和空白对照组，早晨空腹逐只称重，记录并计算初始平均体重，各组试验鸡在相同条件下进行饲养，空白对照组进行单独隔离饲养，以防污染。

感染处理组每只鸡接种约1×105个卵囊，接种后每天观察并记录各组鸡的临床表现（如采食、饮水、行为、羽毛的光泽度、精神状态，血便和发病死亡情况等），试验结束后解剖发病鸡，记录发病部位和发病程度。

2结果与分析
2.1卵囊的形态变化混匀培养溶液，用移液枪吸取少量的液体滴在载玻片上，盖上盖玻片，在电镜下观察。

从图1可以看出，分离到的球虫卵囊大多形态饱满，为宽椭圆形，少数为卵圆形，壁光滑，中间明显可见1个圆形的核，原生质呈淡褐色，卵囊大小约为18.5～25.5
μm×16.7～22.5 μm。

正常的孢子化卵囊多能见到分化明显的4个形状规则的孢子，试验发现18 h即可看到部分卵囊孢子化，约占总数的13%；24、36、48 h分别有33%、80%和95%的卵囊孢子化。

注：a.未孢子化的卵囊；b孢子化的卵囊。

图1电镜下球虫卵囊的形态变化2.2接种鸡的临床表现接种后每天观察并记录2组鸡的临床表现，感染组第3天有个别鸡状态不佳，第4天感染组部分雏鸡不同程度表现出采食量减少、食欲不佳、精神萎靡沉郁、羽毛蓬乱、翅膀下垂等临床症状，严重则出现离群呆立，缩颈闭眼，甚至食欲废绝等症状，继而出现拉稀或者血便等现象。

第5天陆续出现6例因感染球虫而致死的死亡病例。

然而，健康对照组雏鸡则精神、食欲、饮欲和粪便均表现正常。

2.3血便、死亡和体重变化未接种卵囊的雏鸡整个试验过程中均较健康，未出现血便和死亡现象。

接种卵囊的雏鸡第4天开始出现血便，占全部粪便的50%，第6天出现大量血便，占达80%左右，第7天血便量则有所下降（表1）。

由表2可知，接种雏鸡第5天死亡2只，第6天死亡3只，第7和8天则各死亡1只，到试验结束时存活率仅为5
3.3%。

未接种和接种雏鸡试验结束时平均净增重差异明显，分别为76.7和9.3
3讨论
近年来，随着规模化养殖的发展，球虫病的危害日趋严重。

鸡球虫分布广、危害性大，种类较多，世界各国已经记载的约有14种，我国已发现的至少7种[8-9]。

传统的形态学方法是球虫种类鉴定常用的方法，该方法准确性高，可应用于鸡球虫的鉴定[10]。

鸡球虫不同种类寄生部位和致病性均有差异，其中柔嫩艾美耳球虫致病性最强，是危害最严重的一个种。

柔嫩艾美耳球虫寄生于盲肠，临床上出现明显的血便，这种特征有助于纯种的分离鉴定。

该研究分离的鸡球虫球虫卵囊形态饱满，多为宽椭圆形，卵囊大小约为18.5～25.5 μm×16.7～22.5 μm，孢子化卵囊多能见到分化明显的4个形状规则的孢子；此外，接种的发病雏鸡，体重增加缓慢，血便明显，死亡率较高，同时解剖可见盲肠明显病变，且肠壁增厚，严重者因充满大量血液而盲肠肿大。

根据卵囊的形态、大小，发病鸡的临床特征，卵囊寄生部位和盲肠病理变化等特征，以及已有文献的报道[9，11-12]，初步判断该试验分离到的球虫主要为柔嫩艾美耳球虫。

目前，控制球虫病的手段主要还是抗球虫药物，由于抗生素和化学药物的长期不规范使用导致球虫产生了耐药性，药物使用年限不断缩短，造成了巨大的经济损失。

笔者对安徽地区的鸡球虫进行了初步分离和感染试验，为进一步深入研究鸡球虫的致病和抗药机制及鸡球虫病预防控制奠定基础。

参考文献
[1] 林毅，冯泽光.雏鸡实验感染柔嫩艾美尔球虫的病理学研究[J].畜牧兽医学报，1993（5）：64-69.
[2] 汪明.兽医寄生虫学[M].北京：中国农业出版社，2003：284-288.
[3] 索勋，李国清.鸡球虫病学[M].北京：中国农业大学出版社，1998：238-268.
[4] 张浩男，张秀英.常山提取物与西药联合用药对鸡球虫病的疗效试验[J].东北农业大学学报，2012，43（3）：68-72.
[5] 甘德培.抗球虫药与球虫的抗药性研究进展[J].中国兽医寄生虫病，1999，7（2）：53-56.
[6] 张克勤，蒋丽，张俊杰，等.金丝桃素抗鸡球虫效果观察[J].湖北农业科学，2012（10）：4316-4320.
[7] 许金俊，陶建平，彭金彪，等.柔嫩艾美耳球虫扬州分离株对8种抗球虫药的抗药性[J].畜牧与兽医，2008，40（1）：18-21.。