新业务新技术项目实施计划书

宜昌市第一人民医院 新业务、新技术项目实施计划书

项目名称 HIF-1α在胎儿窘迫中的 表达及相关性研究

项目负责人 学科、专业 科 室 专业方向 起止日期

宜昌市第一人民医院医教科制 二○一二年 填 写 说 明 一、学科（专业）代码按GB/T13745-92“学科分类与代码”表填写。 二、部分栏目填写要求： 1、项目名称——应确切反映研究内容，最多不超过25个汉字（包括标点符号）。 2、学科名称——申请项目所属的第二级或三级学科。 3、所需经费——以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。 4、项目组其他主要成员——指在项目组内对学术思想、技术路线的制定理论分析及对项目的完成起主要作用的人员。 5、合作单位——按排名顺序填写，若超过2个只填写第一、第二合作单位。 6、立项依据——要充分综述国内外本项目的概况，阐明项目的理论、实际意义与要解决的问题，以论证项目的新颖性、创新性和实用性，通过小结本单位在这方面已有的成就或经验论证可行性。 7、项目的实施方案与技术关键——要列出详细的实施方案和技术线路、步骤，说明项目的技术关键所在。 8、已具备的条件与存在的问题——已经具备的和还需要完善或配置的条件包括人员、技术力量、主要仪器设备等，要列出详细清单。 9、项目的进度，经费预算及来源——按实施步骤列出进度（能否按进度实施作为项目考核内容），经费预算要科学合理（杜绝盲目估算），经费来源要可靠。 10、应用前景分析——科学有据地分析预测应用前景，重点论证项目应用能否达到规模效应，并简要说明如何达到。 三、除签名外，所有文字必须认真填写，采用国家公布的标准简化汉字，计算机输入。 1

技术项目

名称 涉及学科（专业） A 名称 B 名称 C

名称

代码 代码 代码 计划开展时间 所需经费 万元

合作单位情况

第一合作 单位名称 主要负责人

通信地址 邮编 单位性质 A.高等院校 ○ B.科研单位 ○ C.其它 ○ 第二合作 单位名称 主要负责人

通信地址 邮编 单位性质 A.高等院校 ○ B.科研单位 ○ C.其它 ○

承担项目组情况

总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 学士 项目负责人

姓名 出生年月 专业技术职称 学术带头人 是○否○ 学位 博士○硕士○学士○ 电话 E-mail 地址 邮编 相关专业学习经历

其他主要成员 情况

姓名 出生年月 专业技术职务 工作单位及科室 项目中的分工 2

一、立项依据：1）综述国内外本项目的概况。 2）项目的理论与实际意义、目的与要解决的问题。 3）小结本单位在这方面已有的成就或经验。 4）新技术的安全性、可行性和适宜性。

胎儿窘迫是指胎儿在子宫内因急性或慢性缺氧危及胎儿健康和生命的一种综合症状，发病率2.7%—38.5%[1]。胎儿缺氧是导致胎儿窘迫、新生儿窒息、围生儿死亡的重要原因之一。存活的窒息儿也常因缺氧致神经系统损害，出现智力迟钝甚至脑瘫等不可逆的后遗症[2,3]。胎儿缺氧时间对胎儿神经系统具有重要影响。而一旦诊断为胎儿宫内窘迫，往往需要采用剖宫产的方式来终止妊娠。但实际中发现，按宫内窘迫而终止妊娠的胎儿娩出后，并无缺氧表现。因此，产前准确预测胎儿宫内缺氧，及时采取防治措施，对降低围产儿患病率和死亡率，提高围产医学质量、选择分娩方式及优生等都具有重要意义。 胎儿窘迫分为两种类型:(1)急性胎儿窘迫，多发生在分娩期;(2)慢性胎儿窘迫，常发生在妊娠晚期，慢性胎儿窘迫在临产后往往表现为急性胎儿窘迫[1].引起胎儿缺氧的因素众多，有：1、母体因素：肝内胆汁淤积（ICP），胎儿宫内窘迫、早产、死胎是ICP的主要危害，母血、脐血的胆汁酸水平与ICP胎儿缺氧密切相关[4-5]。Sepulveda等6的研究指出,高浓度胆汁酸有浓度依赖性血管收缩作用,可供胎盘绒毛表面血管痉挛,绒毛静脉血管阻力增加;在胎盘绒毛膜板的水平,氧合血流量骤然减少,导致胎儿血液灌注急剧下降,胎儿急性缺氧;羊水粪染时,羊水中胆汁酸水平明显升高,胎盘绒毛板静脉腔内(胎内循环),外(羊水)均暴露于高浓度胆汁酸中,导致血管收缩,脐血流急性减少,胎儿急性缺氧[6]。 母体子宫血流(UBF)减少，低氧血症，麻醉因素2、胎盘、脐带、羊水等因素。常见常见可能致胎儿窘迫的胎盘因素如下:①胎盘感染，②胎盘发育障碍③胎盘形状异常④胎盘局部循环障碍性疾病3、胎儿本身因素，如严重的先天性心血管疾病,胎儿低血压或心衰,胎儿颅内出血影响心血管中枢等,胎儿血循环流通障碍,胎儿缺氧。 传统胎儿窘迫评价的方法主要有胎心监护（EFM）、催产素激惹试验(OCT)、羊水过少、胎动、胎儿心电图、胎儿头皮血气分析、生化指标、乳酸、彩色多普勒、羊膜镜检查等等。上述方法各有优劣，EFM是临床上诊断胎儿窘迫的主要依据，应用最为普遍，但研究发现仅靠EFM诊断胎儿窘迫，假阳性率高且增加了剖宫产率及阴道手术分娩率[7]，而EFM显著降低新生儿神经系统损伤的观点也未能得到证实[8]。除此之外，EFM不会降低脑瘫的发生. 缺氧诱导因子（HIF-1α）是近年来发现的介导哺乳动物细胞低氧反应的核转录因子，是胎盘主要的调节氧代谢平衡的因子[9]。广泛表达于哺乳动物的各种组织，促进机体和细胞适应低氧的环境。人的HIF-1基因定位于14q21～q34，连接在促红细胞生成素(EPO)基因缺氧反应元件(HRE)上，受缺氧的诱导。HIF-1含有826个氨基酸，是由HIF-1α和1β构成的异二聚体，其中HIF-1α具有生物活性[10]。 HIF-1α作为一种转录因子，低氧时在组织细胞中广泛表达，在常氧条件下，HIF-1α由其结构中的氧依赖降解结构域(ODD)控制，并通过泛素-蛋白酶体途径迅速降解，几乎检测不到HIF-1α蛋白[11]。在缺氧细胞，HIF-1α降解受阻，HIF-1α在胞内积聚，并与HIF-1β形成二聚体，通过HIF-1 3

αC末端的转录激活区域(CTAD)诱导辅激活因子CBP/P300入核，共同形成大分子复合物，并与缺氧反应基因的缺氧反应元件(HRE)上的HIF-1结合位点(5'TACGTG 3′)结合，促进缺氧反应基因的转录，引起细胞对缺氧的一系列适应性反应[12]。目前已研究的靶基因有：促红细胞生成素(EPO)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1、葡萄糖载体蛋白1(GLUT-1)、糖酵解酶、诱导型NOS(iNOS)、血红素氧化酶-1(HO-1)、内皮素-1(ET-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)等[13]近六十种。 研究证明，缺氧对滋养层细胞相关的侵袭和分化过程调节的分子机制是HIF。Ietta等[14]证实，人类早期滋养层细胞分化的氧调节过程部分是由TGF-β3通过HIF-l转录因子活化所介导的，能下调HIF-l的表达，认为在胎盘中，HIF-l与TGF-β3表达是平行的，妊娠5～8周低氧时这两种因子表达都很高，从而抑制滋养细胞对子宫内膜的浸润；到妊娠l0～l2周时随着氧分压的上升表达均有所下降，而TGF-β3表达下降可使滋养细胞表达浸润型表型增加。有研究发现[15]在缺氧条件下培养绒毛组织块并用反义核酸抑制HIF-l的表达，可以同时抑制TGF-β3的表达并促使侵袭性滋养层细胞表型出现，表明HIF-l是TGF-β3的上游分子，氧通过HIF-1—TGF-β3途径对早期滋养细胞侵袭分化进行调节。Caniggial等[16]用妊娠5～8周的人绒毛培养物，在缺氧条件下发现可以促进滋养层细胞增殖、纤维结合蛋白合成，而且α5整合素的表达以及明胶酶A活性都增高，这些生化标志在常氧条件下却不能检测出。在缺氧条件下用反义核酸抑制HIF-l的表达，可使细胞停止增殖，整合素表达下降，明胶酶A活性降低，同时促使侵袭性滋养层细胞表型出现，例如αl整合素和明胶酶B的表达出现。这些都说明，缺氧对滋养层细胞分化早期的调节，部分是通过HIF-l转录因子所调节的。 本研究旨在检测胎儿脐血及母血中缺氧诱导因子－1α（HIF-1α）的含量，联合气血分析判断临床胎儿是否处于窘迫状态及认为可能存在宫内窘迫的胎儿是否确实出现宫内缺氧。 4

二、项目的实施方案与技术关键（包括项目从何处引进、及人员培训情况）。 1.实施方案 1）研究对象分组：选取我院产科住院，单胎分娩患者，经临产后经阴道试产因急性胎儿窘迫行急诊剖宫产者30例作为研究组，选择同时期临产后无急性胎儿窘迫(因头盆不称、社会因素等)行 择期剖宫产者30例为对照组. 急性胎儿窘迫诊断标准参照乐杰主编的《妇产科学》第七版[1]:(1)胎心率异常>160bpm或 <120bpm，胎儿电子监护宫缩应激试验(CST)出现多发晚期减速、重度变异减速。(2)羊水胎粪污染，根据程度不同，羊水污染分3度:I度:浅绿色、质薄;n度:深绿色或黄绿色，提示胎儿急性缺氧;111度:呈棕黄色， 稠厚，提示胎儿缺氧严重。(3)胎动异常，缺氧初期为胎动频繁，继而出现胎动减弱及胎动次数减少。(4)胎儿头皮血气检测分析，pH<7.20，PO2<10mmHg，PCO2>60mmHg。 因为我院目前尚未开展胎儿头皮血气检测分析，故以剖宫产胎儿娩出立即断 脐，抽取脐动脉血行血气分析检查，血气指标包括酸碱度(pH)、碱剩余(BE)，以 pH<7.10或BE<-10作为诊断酸中毒指标[17] 2）标本收集 ①母血:胎儿窘迫组产妇在发现胎儿窘迫(时间均<30分钟)，行常规处理(吸氧、左侧卧位、补液等处理)前抽取肘静脉血3ml，静置1小时后，3O00r/min离心15min，分装血清，置一20℃冰箱冻存待测。对照组在因头盆不称或社会因素决定剖宫产终止妊娠时抽取肘静脉血3ml，静置1小时后，3000r/min离心15min，分装血清，置一20℃冰箱冻存待测，采血后处理同胎儿窘迫组。 ②脐动脉血:各组均在胎儿娩出后，断脐，分别抽取脐动脉血约3.sml，其中3ml静置1小时后，3000r/min离心15min，分装血清，置一20℃冰箱冻存待测。另0.5ml脐动脉血，在30min内行血气分析检查。血气指标包括，酸碱度(pH)、碱剩余(BE)，以PH<7.10或BE<-10作为诊断酸中毒指标。 3.ELISA法检测各组中HIF。 4.整理数据，分析结果，撰写论文