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石蜡切片制作过程(番红固绿)

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番红固绿染色法制取水稻茎穗部石蜡切片

1.苯胺番红溶液配制：番红：5g；95%酒精：50ml；苯胺油：20ml；蒸馏水：100ml

先将番红溶于95%酒精，使其充分溶解后加入苯胺油，充分搅拌，再加入蒸馏水，过滤备用。

2.苯胺固绿染色液配制：固绿：1g；无水酒精：100ml；苯胺油：4ml

先将固绿溶于无水酒精中，使其充分溶解后过滤，再加入苯胺油即成。

（苯胺油具毒，不能与粘膜接触）

3.番红——固绿双重染色法

适用于高等植物根，茎，叶的染色，染色结果是木质化的细胞壁及核呈红色，薄壁细胞，细胞质等呈绿色。步骤如下：

固定后的水稻茎穗部

流水冲洗24h

番红苯胺液染色3天

系列脱水，透明，包埋

切片，粘片，烘片

纯二甲苯脱蜡（蜡脱完为止）

1/2二甲苯+1/2纯酒精对半混合液

5-10分钟

纯酒精5分钟

饱和苦味酸95%酒精溶液分色（镜检适度）

纯酒精冲洗1分钟

固绿酒精苯胺溶液复染1分钟

纯酒精冲洗1分钟

1/2二甲苯+1/2纯酒精对半混合液 5分钟

纯二甲苯 5分钟

封片

4.脱水：

按照以下乙醇质量分数梯度进行脱水，括号里面的是每一级的时间：

30%（15min）→50%（15min）→70%（15min，如果当天做不完可将材料放入其中过夜，第二天再处理）→83%（30min，用83%代替85%是因为83%正好处于85%与95%之间，效果最好）→90%（30min）→100%（15min）→100%（15min）→1/2酒精+1/2二甲苯3

5.透明：

（1）滴加纯二甲苯至与100%乙醇等量，此时二甲苯占总体积的1/2；（若此时溶液变浑浊，证明脱水不彻底，要重新退回到100%乙醇中）；

（2）再滴加二甲苯超过100%乙醇的量，此时乙醇占总体积的1/3，二甲苯占总体积的2/3；

（3）换纯二甲苯直到材料变得透明为止。

6.浸蜡与包埋：

（1）室温浸蜡：往含有二甲苯及已经透明材料的坩埚中加入蜡屑至过饱和，放置3d或者更长（“更长”的意思是做到这一步可以停下来，以后可以想什么时候做下面的步骤都行）。

（2）温箱内浸蜡：

①先将温箱温度调至37度，在已熔的材料中加入蜡屑至过饱和，放置1d；

②再将温箱温度升高到45度，在已熔的材料中加入蜡屑至过饱和，放置1d；

③最后将温箱温度升高到60-62度，换三次纯蜡，并进行包埋，此过程不超过2h，否则材料会变脆。如果材料太多，2小时内完成不了，可做到②后即将材料全部取出，然后再分批次进行③，再进入③时先将温箱温度调至45度，将材料放入，再慢慢将温度调至60-62度。

7.切片、粘片、烘片：

选择蛋白胶粘剂粘片，将一滴胶粘剂滴到载玻片的中央，然后加上水，将切片平放于载玻片上，然后放在温箱上，待粘完很多片子后，用一张大的滤纸覆盖在所有的盖玻片上，用手轻轻压一遍，压平且吸走多余的水分。 将粘好的片子放在温箱里，烘24h即可，温箱温度不得超过45度。如果急用，可在温箱内加一小杯甲醛，15min即可将片子烘干，但一般不采用此法。

8.脱蜡、复水、复染：

脱蜡前应注意：切片一定要是热的，可以通过三种方法得到：（1）从温箱中取出（2）吹风机吹热（3）在温箱内脱蜡。另外二甲苯一定要是新鲜的，如果发现装二甲苯的饼子底部有固体物，则说明二甲苯里面有了石蜡，不可再用。

注意：用工程绘图用的碳素墨水笔标记玻片，记号不会被洗掉。

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石蜡切片的主要步骤

石蜡切片的主要步骤

石蜡切片的主要步骤

石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理

在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋

将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片

切片是石蜡切片过程中最关键的一步。首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片

切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色

切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边

染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标

封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。首先，将封片放置在通风干燥箱中，使其自然干燥。在干燥过程中，要避免切片受到污染或损坏。然后，使用适当的工具贴上标签，标明切片的信息和制备日期，便于后续使用和管理。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程

一、取材 选取目的组织块，修剪到合适的大小；

二、固定

将组织块放入福尔马林固定液（10%甲醛溶液），固定时间由组织块大小而定，一般不少于24h；体积1cm3的组织块，一般为3-7天；

三、冲水 自来水洗几下，泡1小时；

四、系列酒精脱水

50%酒精，1h；

70%酒精，1h；

80%酒精，1h；

90%酒精，1h；

100%酒精（I），1h；

100%酒精（II），1h；

五、透明

酒精：二甲苯=1：1溶液，过夜；

二甲苯，1h；

六、包埋

二甲苯：石蜡=1：1，65-70 ℃，2h；

新鲜石蜡（I），65-70 ℃，1h；

新鲜石蜡（II），65-70 ℃，4h；

新鲜石蜡包埋；

七、切片 切片厚度为5-7um；

八、展片 温水（40-42 ℃）展片；

九、捞片 将展好的片子贴于载玻片上；

十、烘片 42 ℃将片子上的水烘干；

十一、烤片 60 ℃烤片12-24h；

十二、脱腊

二甲苯（I）：2min；

酒精：二甲苯=1：1溶液：2min；

十三、水化

100%酒精（I）：1min；

100%酒精（II）：1min；

95%酒精：1.5min；

80%酒精：1.5min；

70%酒精：1.5min；

50%酒精：1.5min；

自来水洗：2min

十四、H&E染色

Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果)，自来水洗3次，盐酸分化（2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸），10s；自来水洗蓝化，镜下观察染色效果；（伊红）Eosin染色30-50s，直接脱水（90%酒精-----100%酒精I，100%酒精II各1分------酒精：二甲苯=1：1溶液：1-1.5min）；

十五、脱水

90%酒精-100%酒精-100%酒精，各1min；

十六、透明

二甲苯：酒精：1-1.5min；二甲苯：2min； 十七、封片

中性树胶封片；

石蜡切片的详细制作过程

石蜡切片的详细制作过程

石蜡切片的制作过程

石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。

1．取材

材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。

（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。

（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。

（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。

（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。

2．固定

组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。这种处理就是固定。除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。

固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在

一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。

固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。 固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。

简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。其中，苦味酸、升汞、铬酸既能凝固细胞清蛋白，又能凝固核蛋白；乙醇只能凝固清蛋白，而醋酸只能凝固核蛋白；甲醛、饿酸和重铬酸钾对这两种蛋白质都不凝固。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：

1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。