肿瘤浸润淋巴细胞在人黑色素瘤组织中的形态学观察(一)

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)制剂制备质量管理专家共识陈萌;王涛;初明;王星星;董兆惠;王铁山;严冬;金华君;隋礼丽;张立娜;孙晓男;黎春盈;奚晓鹏;周足力;张秀军【期刊名称】《中国医药导刊》【年(卷),期】2024(26)4【摘要】近年来,采用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)进行过继性T细胞疗法(ACT)的新型免疫治疗方式备受关注。

TIL是从肿瘤组织中分离出的一种新型的抗肿瘤效应淋巴细胞,具有高效、特异、不良反应小等优点,临床应用潜在治疗价值巨大。

国内外已有多家企业布局TIL疗法:2024年,美国FDA加速批准了LN-144,用于治疗PD-1耐药的晚期黑色素瘤患者;国内暂无TIL疗法的上市产品。

鉴于TIL细胞的来源、类型、生产工艺等方面异质性较大,以及肿瘤组织的获取与运输要求、纯化TIL细胞获取方法、产品放行检测项目等有关TIL制剂生产安全性和质量方面的国家标准和行业标准均无统一规范,因此,制订针对性的TIL制剂制备标准对于全面保证TIL 细胞制剂质量的安全性、有效性和可控性具有积极意义。

为加强TIL制剂的质量控制,规范和指导TIL细胞制剂制备的质量管理,我院集合领域内众专家学者,参考国家免疫细胞治疗产品有关文件,结合TIL细胞特点,针对TIL制剂关键工艺步骤对质量控制要素和质量控制技术方法进行规定,特别编撰了《肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)制剂制备质量管理专家共识》,以期为国家制定TIL制剂制备管理相关政策提供借鉴和参考。

该共识明确了编制背景、TIL制剂生产术语、生产条件、质量控制要求、检测方法,重点阐述了肿瘤组织的采集和运输、TIL细胞的分离和纯化、TIL细胞的激活与扩增、TIL细胞制剂的放行等TIL制剂生产质量管理内容,适用于TIL制剂生产的质量控制。

【总页数】5页(P323-327)【作者】陈萌;王涛;初明;王星星;董兆惠;王铁山;严冬;金华君;隋礼丽;张立娜;孙晓男;黎春盈;奚晓鹏;周足力;张秀军【作者单位】中国标准化研究院;解放军总医院第五医学中心;北京大学基础医学院;国家卫生健康委员会医学免疫学重点实验室;北京循生免疫医学转化研究院;北京中医药大学;北京首都医科大学附属北京潞河医院;上海君赛生物科技有限公司;毕诺济(上海)生物技术有限公司;吉林中科生物工程股份有限公司;青岛华赛伯曼医学细胞生物有限公司;北京伯诺生物科技有限公司;北京戴纳魔方生物科技有限公司;北京大学人民医院【正文语种】中文【中图分类】R730【相关文献】1.AKT抑制剂对结直肠癌肝转移患者肿瘤浸润T淋巴细胞生物学活性的影响2.《中国肿瘤临床》文章推荐:免疫检查点抑制剂相关心肌炎监测与管理中国专家共识(2020版)3.《中国肿瘤临床》文章推荐:免疫检查点抑制剂相关心肌炎监测与管理中国专家共识(2020版)4.抗血管生成小分子酪氨酸激酶抑制剂在复发转移或晚期妇科肿瘤临床应用的中国专家共识(2022版)5.淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

女性肿瘤类型（1）外阴尖锐湿疣：主要是由人乳头状瘤病毒(HPV)6型及11型感染引起的良性疣状物。

多数通过性接触传播。

肉眼典型病例呈多个小而尖的乳头。

镜下上皮增生呈乳头状，表面鳞状上皮呈不全角化及轻度角化过度。

棘细胞增生，其中可见多少不等的空泡状细胞。

可通过药物、电灼、冷冻及激光疗法治疗。

（2）子宫颈癌①常见组织学分类：鳞状细胞癌；少见类型：腺癌，小细胞癌。

②子宫颈癌前病变（宫颈上皮内瘤变,Cervical intraepithelial neoplasia, CIN）：宫颈上皮内瘤变（即宫颈鳞状上皮不典型增生）可分为III级：CIN I级：异型细胞局限于上皮层的下I／3；CINⅡ级：异型医药批发增生的细胞累及上皮层的1／2或≤2／3；CINⅢ级/原位癌（carcinoma in situ）：异型增生的细胞超过全层的2／3或累及上皮全层。

③子宫颈早期浸润癌：提示癌细胞形成浅表性浸润，浸润深度≤0.5cm；浸润范围≤0.7cm。

（3）子宫体常见肿瘤类型：子宫内膜癌子宫内膜间质肿瘤子宫平滑肌肿瘤上皮和间叶混合性肿瘤（恶性中胚叶混合瘤）（4）卵巢肿瘤①组织学分类主要分为四类：表面上皮性肿瘤性索-间质肿瘤生殖细胞肿瘤继发性肿瘤（非特异性肿瘤）②交界性肿瘤及常见类型：肿瘤根据其不同的生物特性分为良性、恶性和交界性。

性质介于良性、恶性之间的肿瘤被定义为交界性肿瘤，在卵巢肿瘤中是一类独立的类型，具有其不同于良性和恶性肿瘤的特殊组织形态学、生物学行为和临床预后。

常见的组织学类型：浆液性交界性囊腺瘤；粘液性交界性囊腺瘤。

③常见的生殖细胞肿瘤：畸胎瘤胚胎性癌卵黄囊瘤（内胚窦瘤）无性细胞瘤绒毛膜癌④常见的性索-间质肿瘤：颗粒细胞瘤卵泡膜细胞瘤男性细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumour)⑤常见的继发性肿瘤：转移性癌（Krukenberg tumour）8．乳腺（1）乳腺肿瘤的组织学分类（WHO 2002）①乳腺浸润性癌②癌前病变③良性上皮性病变④肌上皮病变⑤间叶性肿瘤⑥纤维上皮性肿瘤⑦乳头肿瘤⑧恶性淋巴瘤和转移性肿瘤⑨男性乳腺肿瘤（2）与乳腺癌诊治和预后相关的标志物及其意义：有关乳腺癌研究的重要进展之一就是认识到肿瘤组织内的激素受体与激素治疗以及化疗有着密切关系。

细胞治疗：TIL疗法能否最终攻克实体瘤？●●●2019年5⽉，美国FDA授予Iovance Biotherapeutics公司的LN-145（TIL疗法）突破性疗法认定，⽤于治疗在接受化疗后复发、转移性或持久性宫颈癌患者，这标志着TIL疗法即将在癌症治疗中⼤放异彩。

2021年6⽉22⽇，复星凯特CAR-T细胞治疗产品益基利仑赛注射液（⼜称阿基仑赛）已正式获得批准。

中国迎来⾸款获批上市的CAR-T细胞治疗产品，也是中国⾸款获批上市的细胞药物。

⽬前CAR-T主要应⽤在⾎液瘤治疗上，在实体瘤应⽤上仍没有有效的产品。

今天，分享⼀下TIL 细胞疗法是怎么⼀回事，是否能成为对抗实体瘤的“⿊马”。

1TIL细胞与TIL细胞免疫疗法概念⼀：TIL细胞TIL（Tumor Infiltrating Lymphocytes，肿瘤浸润淋巴细胞）是⼀种从肿瘤组织中分离出的浸润淋巴细胞。

⼿术切除的肿瘤组织，⼤部分是肿瘤细胞，少部分为淋巴细胞。

这些淋巴细胞中有这些淋巴细胞中有部分是针对肿瘤特异性突变抗原的T细胞，是深⼊到敌军内部打击能⼒最强的免疫细胞，被认为是⼀种机体对肿瘤细胞特异性免疫反应。

由于肿瘤微环境等原因，T细胞功能受到了限制，或⽆法迁移到达肿瘤组织，或在肿瘤组织中活性抑制，⽆法杀伤癌细胞。

因此，如何激活体内的战⽃部队，加强T细胞“武装”，使它们在肿瘤组织中充分发挥战⽃⼒，攻击肿瘤细胞，是⽬前肿瘤研究的热点之⼀。

概念⼆：TIL细胞疗法指从肿瘤组织中分离肿瘤浸润的淋巴细胞，在体外培养和⼤量扩增后回输到TIL细胞疗法是指从肿瘤组织中分离肿瘤浸润的淋巴细胞，在体外培养和⼤量扩增后回输到病⼈体内的疗法。

TIL细胞疗法的效应细胞是⼀群经过天然选择与富集，肿瘤特异性T细胞⽐例⾼且多样性丰富的细胞群，具有多靶点、肿瘤趋向和浸润能⼒强、副作⽤⼩等优点。

来源于肿瘤组织，识别肿瘤的能⼒⾼于来源于⾎液的免疫细胞。

不是简TIL疗法的免疫细胞来源于肿瘤组织，识别肿瘤的能⼒⾼于来源于⾎液的免疫细胞。

三级淋巴结构在肿瘤免疫治疗中的研究进展摘要三级淋巴结构是指在病理生理环境下，淋巴细胞在非淋巴器官内聚集形成的有组织的异位淋巴结构。

成熟的TLS包括被T细胞包围的B细胞区域和生发中心，普遍存在于多个瘤种中，是肿瘤细胞与免疫细胞相互作用的重要场所，与患者预后密切相关。

因此，诱导形成TLS，使T细胞和B细胞发育分化为能够识别杀伤肿瘤细胞的效应细胞和记忆细胞，可以介导抗肿瘤免疫反应。

本综述主要介绍了TLS的组成成分和形成过程，总结归纳现有的检测手段，强调了TLS不同成熟度、位置和内部组成等特征对肿瘤免疫疗效的影响和预测价值，并探讨诱导TLS作为肿瘤治疗手段的应用潜能。

前言肿瘤微环境是肿瘤发生、发展和转移的“土壤”，除肿瘤细胞外，还包含免疫细胞、成纤维细胞及肿瘤血管系统等，其中三级淋巴结构是反映TME状态的重要标志物。

TLS是在自身免疫性疾病、慢性感染及肿瘤等慢性炎症刺激下，在非淋巴器官内形成的异位淋巴样结构，反映了外周组织在长期暴露于由趋化因子和细胞因子介导的炎症信号时出现的淋巴新生。

多项研究表明，B细胞和TLS与不同肿瘤患者更好的预后相关，但是TLS塑造肿瘤微环境，发挥抗肿瘤效应的具体机制仍不清楚，因此深入解析TLS有助于充分挖掘其在抗肿瘤免疫反应中的潜在应用价值，指导肿瘤精准免疫治疗。

本文重点介绍TLS的组成及其形成过程，检测方法，同时强调了TLS对肿瘤免疫反应的影响并讨论通过诱导TLS形成增强抗肿瘤免疫疗效的可能性。

01、TLS的形成和细胞组成在肿瘤微环境中，TLS的形成过程极为复杂，涉及多个细胞及细胞/趋化因子的调控作用。

目前普遍认为TLS的发育与形成过程类似于次级淋巴结构，由淋巴组织诱导细胞和淋巴组织形成细胞通过相互作用在特定部位形成。

在小鼠肿瘤中，LTi可以是T细胞和B细胞，在人类肿瘤中，LTi可以是固有淋巴样细胞NKp44+ILC3细胞等。

LTo则主要是基质细胞，如肿瘤相关成纤维细胞等。

在TLS形成过程中，一方面LTi通过表达淋巴毒素α1β2与LTo上的淋巴毒素β受体结合，促进LTo分泌血管内皮生长因子C，介导HEV的形成，同时HEV也可以分泌多种黏附分子（ICAM1、VCAM1、MADCAM1），进而促进B细胞和T 细胞的发育。

胃淋巴上皮瘤样癌3例诊治分析邢永俊;张小伟【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2016(038)001【总页数】2页(P54-55)【作者】邢永俊;张小伟【作者单位】323000 丽水市人民医院创伤及疝与腹壁外科;东阳市人民医院病理科【正文语种】中文胃淋巴上皮瘤样癌（LELGC）是指发生在鼻咽部以外、形态学特点与鼻咽未分化癌相似的一类胃肿瘤，原发于胃的淋巴上皮瘤样癌（LELC）临床上罕见。

LELGC边界清楚，无促结缔组织增生的间质，富有淋巴样组织，有小的癌细胞巢均匀分布在淋巴样间质中。

现将笔者近年收治的3例LELGC作一报道，并结合文献分析其临床、病理组织形态、免疫组化特点，以期为临床医师诊治LELGC提供参考。

1.1 对象回顾丽水市人民医院2008至2014年6年间有完整临床病理资料的手术确诊为LELGC的患者共3例，该3例患者的临床特点详见表1。

1.2 方法免疫组化采用Envision二步法，所有抗体包括CK、EMA、CEA、CDX-2、Vimentin、CD3、CD4、CD8、CD20、CD30、SYN、CGA、EBV、HMB45及Melan-A等均购于上海罗氏诊断产品公司。

石蜡包埋组织并以4μm厚连续切片，常规脱蜡，切片浸于3%过氧化氢溶液中3min，高压抗原修复10min，冷却至室温，充分水洗，PBS浸洗，3min×3次；甩去多余液体，加入一抗4℃过夜，PBS浸洗，3min×3次；甩去多余液体，滴加通用型二抗-HRP聚合物，37℃，30 min；DAB显色2 min，在显微镜下观察显色情况，苏木素复染，0.1%盐酸酒精分化，PBS冲洗返蓝，乙醇脱水，透明、中性树胶封固。

以正常小鼠血清代替一抗作替代对照，以PBS作空白对照。

同时由2位高年资病理医师根据染色程度和染色细胞百分率进行结果判读。

2.1 病理组织形态特点巨检：3例肿瘤组织均为隆起溃疡型。

肿瘤长径2.5～4.8cm，切面灰白、灰褐色，质脆，边界较清楚。

免疫组化在临床诊断中的应用在临床病理诊断中，免疫组织化学（IHe）是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。

但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。

深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。

在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。

由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床治疗中的作用。

1.免疫组化技术观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂（酶、荧光素、同位素、金属离子等等）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。

IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本最常用、最基本的方法是石蜡切片。

石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存；石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。

2.免疫组化技术在临床诊断中的作用目前免疫组化技术应用于临床主要有以下几个方面：2.1肿瘤良恶性的判断对于反应性增生还是肿瘤性增生，可用免疫球蛋白（Ig）的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。

在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白（bc1-2）,be1-2阴性；而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上肿瘤性滤泡细胞有bc1-2的高表达，bc1-2阳性。

人工智能在形态学检验中的研究进展2024（全文）摘要形态学检验是医学检验的重要组成部分，在临床诊断、治疗和预后评估中发挥着重要作用。

传统的形态学检验主要依靠人工镜检，受限千人眼的局限性，存在漏检、误检等问题。

人工智能技术的快速发展为形态学检验提供了新的解决方案。

该文阐述人工智能在图像识别领域的应用以及形态学检验相关的临床研究进展，以期为人工智能在医学检验中的拓展提供参考。

人工智能(artificial intelligence, AI)具有优化学习和预测的能力，自1956年首次被提出以来，其始终作为研究热点活跃千各个行业[1 ]。

近年来随着计算机芯片的迭代、数学算法的发展以及数据库质量的提升，AI历经神经网络、机器学习、深度学习、生成式AI,其与医学融合，已广泛涉及医疗影像、辅助诊断、药物研发、健康管理、疾病预测等领域[ 2 ] 。

AI技术辅助传统医疗模式已在多方面对医学产生影响，医疗模式正经历巨大革新[ 3 ]，其中以图像识别相关的研究最为成熟[ 4 ]。

图像分析作为计算机视觉的重要分支，在医学领域中迅速发展，相应算法利用像素模式作为图像分析的关键特征，已被广泛应用千生物医学成像[ 5 ] '如肿瘤放疗靶区勾画[ 6 ] 、心血管造影[ 7] 等。

与此同时，相关技术也拓展至检验医学领域。

作为医学检验的重要组成部分，形态学检验依据细胞计数、分类、形态学异常分析等结果进行疾病类型的诊断和鉴定。

传统的形态学检验主要依靠人工镜检，需专业知识和经验积累，对操作者有较高要求，受限千人眼的局限性，存在漏检、误检等问题[ 8 ] 。

AI通过提取显微图像中的大晕细胞形态特征与轮廓，结合全玻片成像(whole slide ima驴ng,WS I)技术，使用AI分析代替肉眼判断，提供相应鉴定诊断信息，为形态学检验提供了新的解决方案。

形态学检验在AI技术的参与下，正处千技术变革的前沿。

本文梳理了国内外相关领域中AI技术在形态学检验中的研究方向和研究内容，从数据训练模型、临床应用实践、挑战与展望等角度全面介绍AI 图像识别技术对形态学检验的影响与推动，旨在为广大临床检验人员、相关研究人员了解和拓展AI在医学检验中的实践提供参考，以期推动AI技术在形态学检验领域中的新发展。