巧克力培养基配制标准操作规程
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巧克力培养基配制标准操作规程
1.目的
规范巧克力培养基配制标准操作规程,保证培养基质量。
2.原理
流感嗜血杆菌生长依耐血液中的X及V因子,当培养基加热至80~90℃时,可使血液中的红细胞破裂释放出X及V 因子,以利用嗜血杆菌的生长培养。
3.用途
主要用于嗜血杆菌的分离培养,亦可用于奈瑟菌的增值培养。
4.配方
牛肉浸出液1000ml、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂5g、无菌脱纤维羊血100ml,pH7.2~7.4。
5.操作步骤
将前4项成分混合,加热溶化,校正pH,121℃高压灭菌15分钟,冷却至80~85℃,以无菌技术加入羊血,摇匀
后置80~85℃水浴中,维持15分钟,使之成巧克力色取出,倾注平板,待凝固后冷藏备用。
6.储存条件
2~8℃冰箱。
7.有效期
实验室自行规定,确保培养基质量。
8. 质量控制
8.1 质控频度每次新配制时做质控
8.2 质控方法及结果见表5-19.
表5-18 配制巧克力琼脂培养基质量控制方法及结果
试验方法结果
无菌试验生长试验<100块抽检5%,>100块
随机取10块,35℃,CO2
培养24~48小时
流感嗜血杆菌
ATCC10211,35℃,CO2
无细菌生长
生长
生长
平行试验培养18~24
小时
奈瑟氏菌ATCC43069,
35℃,CO2培养18~24小
时
做质控时,取新旧批号的
培养基同时做
9.注意事项
水浴温度不宜过高,时间不宜过长,否则X和V因子消耗殆尽;水浴温度也不宜过低,时间也不宜过短,否则X和V因子不能充分释放出来,应控制在80~85℃。
参考文献
[1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,2007
[2] 王钦升,周正明,高屹主编.实用医学培养基手册.北京:人民军医出版社,1999
(周庭银)
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