放线菌的形态观察
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实验2
放线菌的形态观察
一、目的要求
1. 掌握配制合成培养基的一般方法。
2.学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。
3 .初步了解放线菌的形态特征。
二、基本原理——培养基
高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征
的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多
种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作
用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般
是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要
将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。
此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏
I号培养基中的FeSO
4·7H2
O的量只有0.00l％，因此
在配制培养基时需预先配成高浓度的FeSO4·H
2
O贮
备液，然后再按需加入一定的量到培养基中。
二、基本原理——放线菌
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细
菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入
培养基内生长的叫基内菌丝( 简称“基丝”) ，基丝生长到一
定阶段还能向空气中生长出气生菌丝( 简称“气丝”) ，并进
一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气
丝。
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色
暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种
螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、
杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形
态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
为了观察放线菌的形态特征，入们设计了各种培养和观察方
法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长
状态下的形态特征。本实验介绍扦片法。
二、基本原理——扦片法
•扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，扦
上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着
培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着
在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置
于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到
放线菌自然生长状态下的特征，而且便于
观察不同生长期的形态。
三、实验器材
1 菌种：青色链霉菌( S glaucus ) ，弗氏链霉
菌( S. fradiae ) 。
2 培养基：高氏1 号琼脂。
3 仪器或其他用具：平皿、玻璃纸、盖玻片、
玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，
镊子，石炭酸复红染液，显微镜等。
四、操作步骤——培养基制备
高氏I 号培养基配方如下：
可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO 3 1g K2HPO4· 3H2O 0.5g MgSO4 ·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂15~ 25g 水1000ml pH 7.4~7.6 1. 称量和溶化按配方先称取可溶性溶粉、放入小烧
杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，
再加入少于所需水量的沸水中，继续
加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后
再称取其他各成分依次逐一溶化。对
微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓
度的贮备液按比例换算后再加入，方
法是先在100ml 水中加入lg 的
FeSO4·7H2O配成0.01 g /ml ，再在1
000ml 培养基中加1m 1 的0.01 g ／ml
的贮备液即可。待所有药品完全溶解
后，补充水分到所需的总体积。
2. pH 调节、分装、包扎、灭菌及无菌检
验
四、操作步骤——扦片法
(1) 倒平板取融化并冷至大约50 ℃的高氏1 号琼脂约20ml
倒平板，凝固待用。
(2) 接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板
上划线接种。
(3) 扦片以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45 o 角扦
入琼脂内( 扦在接种线上)( 图IV —7) ，扦片数量可根据
需要而定。
(4) 培养将扦片平板倒置，28 o C 培养，培养时间根据观察
的目的而定，通常3~5d 。
(5) 镜检用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将
有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。观察时，宜用
略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。
如果用0.1% 美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效
果会更好。
四、操作步骤——关键步骤及注意事项
•1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。
•2.插片时要有一定角度并与划线垂直。
•3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到
适当视野，更换高倍镜观察。
•4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染
色后观察，效果会更好。
五、实验报告
1 结果
绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。
2 思考题
(1) 试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。
(2) 玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他类群微生物
的培养和观察，为什么？
(3) 镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝
