bFGF

自血球等）　ｌ。国外还报道在动脉粥样硬化斑块中发现了Ｈｐ的存　在还有观察报道指出。ＨＰ的致病性与其菌毒有关。Ｈｐ感染可　影响血管活性肽，如血管内皮素等含量升高，自身免疫炎性因子　如肿瘤坏死因子、自细胞介素、ｃ一反应蛋白等水平增加，导致　血纤维蛋白原等浓度上升，进而促发冠心病【３］。Ｈｐ可能影响脂　质代谢及血管内膜损伤；Ｈｐ引起的炎性疾病在冠心病中起一定　的作用。　有研究表明　ｈｐ感染可能是通过影响脂质代谢情况而引发冠　心病。认为ＨＰ感染跟血脂出现障碍有很大关联性，ＨＰ感染可能　导致患者血液中的总胆固醇以及三酰甘油增高，血清ＨＰ阳性患　者血脂水平明显比血清ＨＰ阴性患者高，推测可能是优于ＨＰ感染　是通过细胞因子ＩＬ～６、ＩＬ一１等导致血液脂质发生改变。在本研究中，　ＨＰ感染阳性患者血脂水平明显较高，在胫骨治疗后，其血脂水平　出现不同程度改善。　目前关于ＨＰ感染导致血脂浓度上升的机制还不清楚，但是　有研究表明　】，ＨＰ感染后，可以将炎性因子激活，并对脂蛋白酶　活性加以抑制，从而导致脂质代谢紊乱情况的出现，血脂异常后　中国继续医学教育第７卷第侣期　ＳＳ　并发动脉硬化和冠心病。　本研究证实Ｈｐ感染能够引起血脂发生异常改变，Ｈｐ治愈后　血脂趋于正常发展，因此Ｈｐ的检测及治疗对于心血管疾病的预后　至关重要。　

［２】　［３】　

参考文献　Ｍｅｎｄａｌｌ　ＭＡ，Ｇｏｇｇｉｎ　ＰＭ，Ｍｏｂｉｎｅａｕｘ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ　Ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｈｅａｎ　ｄ　ｅａｓｅⅡ】．Ｂｒ　ＨｅａｒｔＪ，　１９９４（７１）：４３７—４３９．　赵新闻，王守东，林宪如，等．现症幽门螺杆菌与冠心病及危险　因素的关系　实用心电学生理，２００４，１３（ｉ）：２４—２５．　吴宗均，先德风，杨正钦，等冠心病病人血浆氧化低密度脂蛋　白和同型半胱氨酸与循环内皮细胞和内皮素相关性研究【ｌ１ｌ中华　心血管病杂志，２００３，３１（１）：４６－４７．　陶景德，谢瑞华，王少峰，等慢性胃炎患者幽门螺旋杆菌感染　与血脂及炎症因子的关系卟中国现代医药杂志，２０１３，１５（４）：　１２－１４．　黎运西，林超群，汤红峰，等．血脂检测评估幽门螺旋杆菌感染　

的十二指肠溃疡的活动性卟黑龙江医学，２０１３，３７（８）：６６６—６６８　

ｂＦＧＦ基因转染ＭＳＣ目的基因检测　王彦生于宁　

【摘要Ｊ目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因外源性转　染到ＭＳＣ（骨髓间充质细胞）后，ｂＦＧＦ基因的表达情况。方法选　取ＳＤ大鼠，获取骨髓间充质细胞，分为对照组、阴性对照组（转染　外源性ＧＦＰ）和实验组（外源性ｂＦＧＦ转染ＭＳＣ），经过体外培养后，　应用ＲＴ—ＰＣＲ和ＥＬＩＳＥ法检测各组ＭＳＣ的ｂＦＧＦ基因阳性表达情况。　结果ＲＴ—ＰＣＲ法显示实验组ｂＦＧＦ基因表达量（Ｏ．７３±０．１５）高于　对照组和阴性对照组（Ｐ＜０．０５）。ＥＬＩＳＡ法显示ｂＦＧＦ基因表达主　要集中在胞浆，实验组ｂＦＧＦ基因表达量ｆ上清为（５　３８±０　４５）ｎｇ／Ｌ，　胞浆为（＆．２７±Ｏ．８２）ｎｇ／Ｌ１高于其他两组（Ｐ＜Ｏ　０５）。结论采用病　毒介导基因转染技术能够将外源性ｂＦＧＦ转染至ＭＳＣ，并能够成功　实现ｂＦＧＦ基因表达。　【关键词】ｂＦＧＦ基因；骨髓间充质细胞；细胞转染　【中图分类号】Ｒ３９４　３　【文献标识码】Ｂ　【文章编号】１６７４—９３０８（２０１５）１８—００５５—０２　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—９３０８　２０１５．１８．０３５　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂＦＧＦ　Ｔｒａｎｓｆ＿ｅｃｔｉＯⅡｏｎ　ＭＳＣ　Ｇｅｎｅ　

ⅣＧ　Ｙａｎｓｈｅｎｇ　ｙ【，Ｎｉｎｇ，Ｈａｎｄ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａ￣ｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１００２４，Ｃｈｉｎａ　ＩＡｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｆｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｉＳＣＵＳＳ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂＦＧＦ　ｇｅｎｅ，ａｆｔｅｒ　ｂａｓｉｃ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ（ｂＦＧＦ）ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ＭＳＣ（ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｃｅｌｌｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｃｔｏｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ．Ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ。　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏ１　ｇｒｏｕｐ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ＧＦＰ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｂＦＧＦ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ＭＳＣ），ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ，ｂＦＧＦ　ｇｅｎｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＳＣ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ＲＴ－ＰＣＲ　ａｎｄ　ＥＬｌＳＥ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ｒｅｓｕｉｔｓ　ｒ．ＰＣＲ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｂＦＧＦ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｗａｓ（Ｏ．７３￣０．１　５）ｉｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ，ｉｔ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）．　ＥＬＩＳＡ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｂＦＧＦ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ．　

作者单位：１１００２４沈阳医学院附属中心医院手外科　项目基金：辽宁省科学技术计划项目（编号：２０１２０２０１２０—２１７）　

ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ　ｂＦＧＦ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｗｅｒｅ［ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ　（５．３８￣０．４５）ｎｇ／Ｌ，ｃｙｔｏｐｌａｓｍ（８．２７￣０．８２）ｎｇ／Ｌ］，ｉｔ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ　ｒＰ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｂＦＧＦ　ｔｏ　ＭＳＣ　ｃａｎ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｂＦＧＦ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ１　ＢＦＧＦ　ｇｅｎｅ，Ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｃｅｌｌｓ，Ｃｅｌｌ　订ａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　

ｂＦＧＦ具有诸多生物学功效，是形成新生血管的特异性促进　因子，而且能够调控ＭＳＣ增殖和定向分化　】。本实验探讨将病　毒作载体，通过将外源性ｂＦＧＦ基因染入到ＭＳＣ后，通过观察　ｂＦＧＦ基因的表达，为更为深入的研究ｂＦＧＦ提供相关动物实验　基础。　１材料和方法　１．１实验动物　６只近交系ｓＤ大鼠均来源与中国医科大学，体重为（１６０±１０）ｇ。　１．２主要试剂及仪器　ｂＦＧＦ片段（武汉博士德生物）；ＤＭＥＭ液、乙二胺四乙酸、　蛋白酶（美国ＧＩＢＣＯ）；ＰＣＲ仪（美国ＡＢＩ公司）；核酸电泳仪　（北京六一厂）；凝胶成像仪（美国ＢＩＯ公司），细胞转染试剂盒、　ＥＬＩＳＡ试剂盒（美国Ｒ＆Ｄ公司）。　１．３研究方法　１．３．１细胞传代培养及转染断颈处死ｓＤ大鼠后，消毒，取股骨和　胫骨，去掉骨表面软组织，完全显现骨髓腔，用ＤＭＥＭ液冲洗髓　腔后，抽取骨髓并制成细胞悬液，离心去除上清，添加完全培养液，　细胞重悬后，用培养瓶接种细胞悬液，室温下放置到ＣＯ　培养箱　中，每７２　ｈ换液１次，至细胞融合超过８０％后，添加乙二胺四乙　５６一Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｔｉｎｕｉｎｑ　ＭｅｄｉｃａｌＥｄｕｃａＯｂｎ，Ｖｏ１．７　Ｎｏ　１８－临床病理分折　

酸、胰蛋白酶消化后，进行传代培养（１：３　ｏ取３代细胞，分　为对照组、阴性对照组和实验组，实验组细胞悬液，滴加到培养　孑Ｌ中后，加入ｂＦＧＦ纯化液和培养液转染２　ｈ后进行４８　ｈ细胞培养，　每２４　ｈ更换１次培养基。对照组仅使用培养液，阴性对照组添加　纯化ＧＦＰ液和培养液。　１．３．３检测指标及方法应用ＲＴ—ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ法检测ＭＳＣ细胞中　ｈＦＧＦ基因的表达情况。　１．４统计学方法　应用ＳＰＳＳ　１５．０软件，组间计量数据比较用单因素方差分析，　Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果　ＲＴ—ＰＣＲ检测发现对照组ｂＦＧＦ基因表达量为（０．３４．４－０．１１）　ｎｇ／Ｌ，阴性对照组表达量为（０．３３－４－Ｏ．１２）ｎｇ／Ｌ，实验组表达量为　（０．７３±０．１５）ｎｇ，Ｌ，实验组ｂＦＧＦ阳性表达量高于其两组（Ｐ＜０．０５　ｏ　ＥＬＩＳＡ法检测显示对照组上清中ｂＦＧＦ基因表达量为（０．１８±Ｏ．０７）　ｎｇ／Ｌ，胞浆表达量为（０．２１．４－０．１０）ｎｇ／Ｌ，阴性对照组ｂＦＧＦ基因　表达量为（０．２１．４－０．０９）ｎｇ／Ｌ，胞浆表达量为（０．２９±Ｏ．１０）ｎｄＬ，　实验组ｂＦＧＦ基因表达量为（５．３８．４－Ｏ．４５）ｎｇ／Ｌ，胞浆表达量为　（８．２７±０．８２）ｎｇ／Ｌ，实验组ｂＦＧＦ基因表达量高于另外两组（Ｐ　

＜０．０５）。　３讨论　ｂＦＧＦ血管形成的重要诱导因子之一，其对于血管生成的　作用备受关注　。本实验通过病毒载体将外源性ｂＦＧＦ基因成　功转入到ＭＳＣ内，通过ＲＴ—ＰＣＲ及ＥＬ１ＳＥ检测证实，转染细　胞能够ｂＦＧＦ基因阳性部位为细胞浆，ＭＳＣ转染后其细胞内外　均可出现ｂＦＧＦ蛋白阳性表达，并且其ｂＦＧＦ阳性表达量高于　对照组及阴性对照组（Ｐ＜０．０５），提示外源性ｂＦＧＦ’基因转　染大鼠ＭＳＣ后，能够得到目的基因表达，且能够保有生物学　活性，促进细胞自身增殖。综上所述，病毒载体基因转染法能　够将ｂＦＧＦ基因导人到ＭＳＣ中，使转染ＭＳＣ‘中ｂＦＧＦ基因持　续高表达。　

［２】２　参考文献　张金池，吴明祥，王玉龙，等人碱性成纤维细胞生长因子基　因转染大鼠骨髓间充质干细胞的研究卟中华实验外科杂志，　２０１０，２７（１０）：１４３６—１４３８　蔡锼艺，陈雄生，贾连顺．等碱性成纤维细胞生长因子重组　腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞的表型变化　中国组织工程研　究，２０１４，１９（２３）：３７２７—３７３１．　

探讨乳腺纤维肉瘤的病理诊断　张文红张泽雄