金黄色葡萄球菌检验与计数

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此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
检测与诊断
标本采集
采自不同感染部位的各种标本，包括血液、脑脊液、穿刺液；痰液、脓液、创伤分 泌物、尿液、粪便和呕吐物等。
直接涂片镜检
直接涂片检查在正常情况下呈无菌状态的体液标本如血液、脑脊液、穿刺液等，若有 检出革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列、无芽胞、荚膜，直径0.5-1μm的球菌。即具有 重要的临床价值。
显色培养基A计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h， 按说明书判读，可疑菌落做补充实验（血浆凝固酶试验，目标菌落血浆凝固酶试验为阳 性）。 显色培养基B计数法：稀释好的菌液0.2 mL涂布接种培养基平板上，36℃±1℃培养24 h， 按说明书判读，可疑菌落做补充实验（滴加1 mol/L盐酸，目标菌落有透明圈）。
鉴别实验
一、血浆凝固酶试验
血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的，与其致病力有关的一种侵袭性酶，其作用 是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。 血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上，能直接作用于血浆中的 纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产 生后被分泌到菌体外，不能直接作用于纤维蛋白原，但可以激活血浆凝血酶原，使之转 化成凝血酶，后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。 具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺 血和坏死 b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌 体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关

免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
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样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
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方法
◆ 致病菌的纯培养 ◆ 致病菌的鉴定: 致病菌的鉴定: 镜检 体外抑菌： ◆ 体外抑菌： 茜草、乳香、牛蒡子、青蒿、姜黄、大黄、丹参、 茜草、乳香、牛蒡子、青蒿、姜黄、大黄、丹参、 枸杞等8 枸杞等8种草药 采用牛津杯法
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生化试验
动物试验
PCR鉴定 PCR鉴定
结果
◆ 分离细菌培养特性及形态学特性
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小结
石灰氮主要靠分解为尿素过程中所产生的中间产物氰 氨和双氰氨来杀灭病原微生物， 氨和双氰氨来杀灭病原微生物，其杀菌成分氰氨和双氰氨 的分解速度受温度和水分的影响。37℃和50℃ 的分解速度受温度和水分的影响。37℃和50℃时石灰氮的 杀菌成分分解速度快、杀菌效果不能持续，另外37℃也适 杀菌成分分解速度快、杀菌效果不能持续，另外37℃也适 37℃ 合金黄色葡萄球菌的繁殖。而50℃的高温堆肥条件在实际 合金黄色葡萄球菌的繁殖。 50℃的高温堆肥条件在实际 中很难控制，且在同一堆肥时间30℃金葡菌数明显低于 中很难控制，且在同一堆肥时间30℃金葡菌数明显低于 30℃ 20℃和37℃的金葡菌数。因此，30℃是最佳培养温度， 20℃和37℃的金葡菌数。因此，30℃是最佳培养温度，有 的金葡菌数 是最佳培养温度 助于发挥石灰氮的抑菌作用。 助于发挥石灰氮的抑菌作用。 在30℃温度下要达到彻底杀灭金黄色葡萄球菌的目的， 30℃温度下要达到彻底杀灭金黄色葡萄球菌的目的， 温度下要达到彻底杀灭金黄色葡萄球菌的目的 在牛粪堆肥中至少添加2.5%的石灰氮。 在牛粪堆肥中至少添加2.5%的石灰氮。 2.5%的石灰氮
生化型 A 葡萄糖 乳糖 木糖 麦芽糖 甘露糖 + + + +
B + + +
C + + +

金黄色葡萄球菌检测方法一．材料与方法1、材料①培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作）②试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4），③器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器，④实验动物：健康的小白鼠2、方法待检样品25g+225ml灭菌生理盐水│┌─────┴─────┐直接计数法增菌培养方法↓↓Baird-Parker琼脂平板7.5%NaCl肉汤培养基↓↓血平板血平板└─────┰─────┘↓┌─────┰─────┰──────┐↓↓↓↓涂片染色镜溶血观察动物接种试验血浆凝固试验└─────┴──┯──┴──────┘↓报告1、样品的采集称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于250ml锥形瓶中，加入225ml灭菌生理盐水，制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随机取10ml离心。

2、增菌及分离培养①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。

②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。

用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h。

之后分别对3个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。

转接入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。

3、涂片、染色与镜检将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。

4、生化实验①触酶试验在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。