不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶和细胞外调节蛋白激酶表达的影响
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艾灸加强药液穴位皮肤吸收法阻抑大鼠肺纤维化疗效观察常全颖,李戎,乔丽霞,戴文娟成都中医药大学,成都(610075)E-mail:cqy19790415@摘要:目的:研究艾灸加强化纤方药液穴位皮肤吸收治疗方法对肺纤维化模型大鼠的治疗情况的观察。
方法:选用SD大鼠以博莱霉素A5(BLM A5)气管内注入制作大鼠肺纤维化模型,造模成功48只,随机分成4组:模型组﹑激素治疗组﹑药灸结合治疗组﹑艾灸治疗组,每组12只,另设空白对照组12只。
造模7天后开始治疗:药灸结合组根据“以补为通”的治疗原则,采用在“膏肓俞”和“肺俞”穴滴加化纤方药液再加以艾灸的方法,每次滴加5滴化纤方药液,艾灸至穴位皮肤上的药液干掉为止(约10分钟),每日一次,连续治疗一个月;艾灸组只灸其“膏肓俞”和“肺俞”穴,每日一次,连续治疗一个月;激素治疗组每只腹腔注射5mg/kg波尼松,每日一次,连续治疗一个月。
观察治疗后大鼠的一般情况、肺系数及肺纤维化的变化。
结果:药灸结合治疗组﹑艾灸组﹑激素治疗组大鼠肺组织的损害程度均有减轻,肺纤维化的程度均有减轻,尤以药灸结合治疗组为优。
结论:药灸结合治疗能在一定程度上更加有效地抑制大鼠肺纤维化的形成,提高肺纤维化大鼠的生存质量。
关键词:博莱霉素,肺间质纤维化,药灸结合治疗肺纤维化是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局。
目前对肺纤维化疾病的治疗,仅限于非特异性抗炎、免疫抑制剂及糖皮质激素等,而作为首选治疗的糖皮质激素疗效不是特别满意,禁忌症较多,且长期使用会严重影响机体免疫功能及增加继发感染等副作用,中药疗效也不够特别理想。
近几年,随着本病发生率、死亡率的不断上升,防治肺纤维化的研究已成为肺科学界的热点,需要寻找其他更为有效的治疗方法。
针灸是中国传统医学中的一项独特的治疗方法,近年来大量的针灸疗法和穴位吸收法的临床研究及实验研究的结果表明,这些方法不仅作用于神经内分泌系统,还可以影响免疫系统,通过对炎性介质或细胞因子的调节来实现其治疗作用[1]。
上海中医药大学硕士学位论文论文题目从肠道菌群和N L R P3炎症小体调控角度探讨艾灸治疗化疗致肠黏膜炎大鼠的作用机制作者姓名李冰融类别统招生(中医学1005) 指导教师姓名张必萌教授专业名称及授予学位类型针灸推拿学(学术学位)论文答辩日期2019年5月9日学位授予单位上海中医药大学2019年6 月13 日学位论文答辩委员会成员名单*备注栏内请注明答辩委员会主任或委员。
目录中文摘要英文摘要引言正文第一部分 5-Fu致肠黏膜炎模型建立和评价1材料与方法1.1材料1.2 实验方法2结果2.1 各组一般状况评分比较2.2 各组体重变化比较2.3 各组摄食量变化比较2.4 各组腹泻率比较2.5 各组回肠HE染色比较2.6 各组结肠透射电镜结果比较2.7 各组血清TNF-α、IL-10表达比较3小结第二部分艾灸对模型大鼠肠黏膜结构和功能的调节作用1 材料与方法1.1 材料1.2 实验方法2 结果2.1 各组结肠长度比较2.2 各组一般状况评分比较2.3 各组体重变化比较2.4 各组摄食量变化比较2.5 各组腹泻率比较2.6 各组回肠HE染色比较2.7 各组结肠透射电镜结果比较2.8 各组肠黏膜组织紧密连接蛋白表达比较3小结第三部分艾灸对化疗所致肠黏膜炎大鼠细胞焦亡的9 13 13 13 14 15 16 17 17 1819 19 19 19 23 23 23 24 25 26 27 27 28 29 1 3 6 8 8 8 81 1.1 1.2 2 结果2.1 2.2 2.3 2.4 3 小结1 2 3 讨论1 2 3 4 5结论致谢附录从肠道菌群和NLRP3炎症小体调控角度探讨艾灸治疗化疗致肠黏膜炎大鼠的作用机制摘要目的:本课题旨在通过分析不同治疗手段对肠黏膜炎动物模型相关指标的干预情况,明确艾灸对肠黏膜损伤结构和功能的修复作用,并从肠道菌群数量、构成和免疫因子调控等角度,阐明艾灸对化疗所致肠黏膜炎的作用机制,从而为艾灸治疗本病的临床应用提供实验理论依据。
艾灸对实验性炎症大鼠抗炎作用和红细胞免疫功能的影响宋小鸽;唐照亮
【期刊名称】《中国中医药信息杂志》
【年(卷),期】1999(006)012
【摘要】为探讨艾灸抗炎免疫的作用机理,本文观察了艾灸对佐剂性关节炎(AA)大鼠炎性反应,免疫器官及红细胞免疫功能的影响。
结果表明,艾灸组跖围减小明显,胸腺指数趋于正常,RBC-C3b增加,RBC-IC减少,与对照组相比差异显著。
提示艾灸肾俞鹤可减轻炎性肿胀、抑制炎性反应,保护免疫脏器,增强红细胞免疫功能。
通过对整体水平的良性调节达到抗炎免疫的作用。
【总页数】2页(P31-32)
【作者】宋小鸽;唐照亮
【作者单位】安徽中医学院;安徽中医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R245.81
【相关文献】
1.艾灸抗炎作用及对炎症介质影响的实验研究 [J], 唐照亮;宋小鸽
2.艾灸对实验性炎症大鼠血清SOD活性和MDA含量的影响 [J], 唐照亮
3.化痔灵片对大鼠实验性炎症模型的抗炎作用 [J], 景志杰;牛拴成;张轩萍;张明升;张晋旺
4.艾灸对实验性类风湿关节炎大鼠外周血炎症因子及滑膜组织膜型程序性细胞死亡配体1表达的影响 [J], 任继刚;雷枭;王大雪;周海燕
5.“益视片”对实验性“肾阳虚”大鼠红细胞免疫功能的影响 [J], 李瑞荃;王明芳;潘学会;邓亚平;骆永珍
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艾灸对脾虚大鼠血浆β-内啡肽、胃动素、生长抑素的影响谭静;常小荣;严洁;易受乡;林亚平;岳增辉;刘密;彭艳【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2011(19)34【摘要】目的:探讨艾灸对大黄所致脾虚大鼠一般症状、血清D-木糖(D-xylose)、血浆β-内啡肽(β-EP)、胃动素(MTL)、生长抑素(SS)的影响.方法:将40只健康SD 大鼠随机分为4组,即空白组、模型组、温和灸组、隔姜灸组.大黄水煎剂灌胃制作脾虚模型,观察大鼠一般状况,放射免疫法测定血浆β-EP、MTL、SS的水平,比色分析法测定血清D-木糖水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠血清D-木糖、血浆β-EP、MTL含量明显降低,一般症状积分、SS含量明显增高(P<0.01);艾灸后,大鼠一般症状积分较艾灸前(4.50±1.08vs7.30±1.16,3.30±0.94vs7.60±0.84,P<0.01)、模型组(4.50±1.08vs10.70±1.25,3.30±0.94vs10.70±1.25,P<0.01)明显降低,差异极显著;大鼠血清D-木糖增高,与模型组比较差异显著(18.816±2.7981vs14.009±1.7188,21.370±1.6750vs14.009±1.7188,P<0.01);以上变化均以隔姜灸更明显(P<0.05).与模型组比较,艾灸后血浆β-EP含量增加(223.38±50.20vs150.06±35.97,199.52±52.88vs150.06±35.97,P<0.01,P<0.05 )、MTL含量增加(379.64±68.06vs305.16±51.99,366.47±41.81vs305.16±51.99,P<0.01,P<0.05 ),SS含量降低(44.20±4.06vs64.03±19.12,36.78±8.34vs64.03±19.12,P<0.05,P<0.01),但两种灸法之间未体现差异.结论:温和灸、隔姜灸足三里、中脘等穴均能明显改善实验性脾虚大鼠的一般症状,提高血清D-木糖含量,并以隔姜灸作用更佳;均能纠正脾虚时紊乱的血浆β-EP、MTL、SS的水平,这可能是治疗脾虚证的作用机制之一.【总页数】5页(P3498-3502)【关键词】灸法;脾虚;β-内啡肽;胃动素;生长抑素【作者】谭静;常小荣;严洁;易受乡;林亚平;岳增辉;刘密;彭艳【作者单位】湖南中医药大学针灸推拿学院湖南省经穴脏腑相关重点研究室【正文语种】中文【中图分类】R163【相关文献】1.运脾温阳颗粒对脾虚泄泻大鼠血浆中胃动素、生长抑素和血管活性肠肽的影响[J], 邵南齐;马霄;朱萱萱;王海丹;高青2.顺气通腑合剂对胃肠动力障碍大鼠血浆胃动素、乙酰胆碱和生长抑素的影响 [J], 周绍荣;焦兰农;姚建根;何国华;袁成业;包卿兵;毛跃3.柴枳夏及汤对胆汁反流性胃炎大鼠血清及血浆中胃动素、血管活性肠肽、生长抑素表达的影响 [J], 冀渤海;梁靓靓4.半夏泻心汤对肝郁脾虚大鼠生长抑素和胃动素的影响 [J], 陈德兴;王雨秾;沈芸;文小平;郑晓洁;陈少丽;卫洪昌5.壮医药线点灸对脾虚大鼠垂体、下丘脑、胃、肠生长抑素和β-内啡肽的影响[J], 吕琳;陈永红;庞声航;吕泽平;肖国有;陈红因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
不同灸量疗效作用的研究进展作者:王璇曾秀珍李盛绿韦金明来源:《健康必读·下旬刊》2020年第03期【摘要】灸量是灸法疗效作用的重要因素,各种疾病在不同灸量下激发的治疗效应有一定差异,现基于阅读大量参考文献基础上,对部分相关疾病在不同灸量下的最佳疗效作用展开综述。
【关键词】灸量;疗效作用;综述【中图分类号】R473.74 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2020)03-09--01“针之不及,灸之所宜”,灸法是中医特色治疗手段之一,因其特殊的治疗作用,广泛运用于临床。
艾灸法主要是以艾绒作为材料,通过温热等刺激来达到灸治目的[1]。
灸量指施灸过程产生的刺激量,通过改变艾炷大小、施灸的壮数或灸治时间的长短控制的灸治刺激量[2]。
在临床治疗中,灸量的控制和灸法治疗疾病的疗效密切相关,因此需要加强相关研究[3]。
现总结分析部分相关不同疾病在不同灸量的临床疗效作用,以期在未来临床治疗中为达到灸治最佳疗效提供依据,观察结论陈诉如下:1 不同灸量对免疫细胞作用有学者建立小鼠免疫力低下的模型,对其进行5分钟、15分钟、25分钟时程艾灸,研究结果显示15分钟艾灸后期小鼠体内T淋巴细胞酯酸阳性率明显提高,而其他时程艾灸没有明显变化[4]。
等对溃疡性结肠炎大鼠模型进行不同灸量,发现9壮组与6壮组小鼠体内IL-8下降程度高于3壮组,IL-10提升程度也明显高于3壮组[5]。
2 不同灸量对血脂疗效作用刘涛[6]等从中医角度论述灸疗在动脉粥样硬化患者治疗中有积极作用——可保护高脂血症患者的血管内皮细胞。
刘未艾[7]等通过研究不同灸量隔药饼灸治疗高脂血症患者发现,5壮组比三壮组对患者血浆粘度、血沉、红细胞压积等改善明显更明显,且5壮组患者额血清中TCH、LDL-C、TG等指标低于3壮组。
丁凤[8]等以温度为灸量进行15min、30min、45min的分组研究,发现30min是治疗血脂异常的最佳灸量。
-研#报告-艾灸足三里穴对功能性消化不良模型大鼠肠神经胶质细胞的影响1金恒1徐派的2张红星2凌家艳12(1.湖北省武汉市第一医院,湖北武汉430022;2.湖北中医药大学,湖北武汉430061)中图分类号:R285.5文献标志码:A文章编号:1004-745X(2022)01-0018-04doi:10.3969/j.issn」004-745X.2020.01.005【摘要】目的探讨艾灸足三里穴对功能性消化不良模型大鼠肠神经胶质细胞的影响。
方法将50只大鼠随机分为正常组(10只)及造模组(40只),将造模成功的30只大鼠再随机分为模型组、艾灸组及束缚组海组10只。
造模结束后,艾灸组大鼠用自制鼠衣束缚后艾灸足三里穴,束缚组只进行束缚。
干预结束后取大鼠胃窦组织,用HE染色观察大鼠胃窦组织病理形态变化,免疫荧光染色观察S1OO0、GFAP蛋白表达量,PCR观察大鼠胃窦组织slOO0、GFAP mRNA水平。
结果大鼠腹部解剖显示:各组大鼠胃组织未发现器质性改变。
slOO0、GFAP蛋白免疫荧光染色阳性为红色荧光,半定量分析结果显示,模型组胃窦组织slOO0、GFAP蛋白相对表达量显著高于正常组(!<0.01);与模型组比较,艾灸组大鼠胃窦组织中slOO0、GFAP蛋白相对表达量明显降低(!<0.01);束缚组与模型组之间没有统计学差异;与束缚组相比,艾灸组大鼠胃窦组织中slOOp,GFAP蛋白相对表达量明显降低(!<0.01)。
与正常组相比,模型组大鼠胃窦组织S100P mRNA,GFAP mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,艾灸组大鼠胃窦组织S1OO0mRNA,GFAP mRNA表达明显降低(!<0.01),而束缚组与模型组差异无统计学意义;与束缚组相比,艾灸组S1OO0mRNA,GFAP mRNA表达明显下降(均!<0.01)。
结论在功能性消化不良模型大鼠中,存在着EGCs的异常增生及活化,而艾灸足三里穴可以通过调节EGCs的异常增生及活化来改善功能消化不良相关症状。
〔J 〕.南京师大学报(自然科学版),2002;25(4):86-9.5胡建燃,李平,秦路鹏,等.恒山黄芪和宁夏枸杞的多糖体外抗氧化活性比较研究〔J 〕.西北植物学报,2016;36(8):1648-53.6肖朝江,邱琳,徐伟,等.长果颈黄芪化学成分和抗氧化活性研究〔J 〕.中草药,2015;46(1):22-7.7冯毅翀,许金叶,赵自明,等.黄芪总皂苷对运动性疲劳大鼠海马功能和形态的影响〔J 〕.中医杂志,2014;55(50):420-3.8高德富,刘晓蕙,樊剑鸣,等.黄芪提取物对小鼠生长性能、抗氧化及免疫功能的影响〔J 〕.航空航天医学杂志,2011;22(2):144-7.9夏源,邹志方,罗敏,等.原花青素对镉染毒大鼠血清和肝脏中SOD 活性、MDA 含量的影响〔J 〕.基础研究,2010;48(23):8-10.10付静波,付丽红,潘飞,等.大黄酸对镉染毒大鼠急性氧化损伤的保护作用〔J 〕.中国煤炭工业医学杂志,2013;16(1):980-2.11彭婷,胡庭俊,陈忠,等.黄芪多糖脂质体对罗非鱼免疫功能和抗氧化能力的影响〔J 〕.南方农业学报,2012;43(12):2087-91.12陈玉娇,俞佳,马晓丹,等.口服人参茎叶皂苷和黄芪多糖对鸡抗氧化功能的影响〔J 〕.中兽医医药杂志,2016;23(1):37-40.13邓书鸿,宋丽,段小菊,等.黄芪提取物HPLC 指纹图谱与抗疲劳作用的相关分析〔J 〕.中药材,2013;36(2):260-4.14朱尚文,魏佳,许勇镇,等.不同产地黄芪中黄芪多糖的含量及其抗疲劳、耐常压缺氧作用〔J 〕.陕西中医药大学学报,2016;39(1):86-9.15明海霞,陈彦文,张帆,等.黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis 肺癌细胞肺转移的影响〔J 〕.解剖学报,2016;47(4):493-500.16赵迎虎,张明军,刘进辉,等.中药制剂对小鼠耐力及免疫器官指数影响〔J 〕.中兽医医药杂志,2010;17(1):14-7.17安方玉,刘永琦,骆亚莉,等.当归不同有效部位对高原低氧模型小鼠免疫功能的影响〔J 〕.中兽医医药杂志,2015;22(2):51-4.18费东亮,肖银霞,苏禹刚,等.铅镉联合染毒对鸡血液中细胞因子水平的影响〔J 〕.畜牧与兽医,2012;44(8):59-61.19龚非力.医学免疫学〔M 〕.北京:科学出版社,2003:307-8.〔2018-01-22修回〕(编辑曹梦园)不同针灸疗法对急性痛风性关节炎模型大鼠炎症因子的影响陈新华王洪峰李慧璟(长春中医药大学,吉林长春130117)〔摘要〕目的探讨不同针灸疗法对急性痛风性关节炎(AGA )模型大鼠炎症因子的影响。
直接灸和隔姜灸“肝俞”穴对原发性肝癌模型大鼠癌前病变期肝功能的影响王宁;谭丽;闫亚楠;成宇镇;侯中伟;熊博文;冯双双;董珍【摘要】目的:观察直接灸和隔姜灸大鼠“肝俞”穴对原发性肝癌模型大鼠癌前病变期肝功能及肝脏组织形态的影响.方法:将55只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(10只)、模型组(15只)、直接灸组(15只)、隔姜灸组(15只).采用腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)法制备HCC模型;直接灸组、隔姜灸组在造模的同时分别用小艾炷灸、小艾炷隔姜灸“肝俞”穴,3壮/穴,隔日1次,为期10周.在造模结束后,用Elisa法对各组大鼠血清中谷氨酰转肽酶(GGT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、甲胎蛋白(AFP)进行检测,用HE染色观察大鼠肝脏组织形态学变化.结果:造模结束后,与模型组相比,直接灸组GGT、AFP含量显著降低(P<0.05),隔姜灸组GGT、AST、ALP、AFP含量均显著降低(均P<0.05).肝脏组织切片HE染色光镜下观察,模型组出现肿瘤灶,小叶结构完全破坏,异型性增加;直接灸组,癌细胞数量较少,细胞核异型性低,有少量结节形成;隔姜灸组,细胞核深染、未发现结节.结论:直接灸和隔姜灸都能够降低HCC模型大鼠血清中GGT、AST、ALP、AFP的含量,改善肝功能,减轻肝细胞的损伤,且隔姜灸的效果要优于直接灸组.%Objective:To observe the effect of Direct moxibustion and Ginger moxibustion on liver function and liver tissue morphology of primary liver cancer in rats with precancerous lesion.Methods:A total of 55 male Wistar rats were randomly divided into a normal group (10 rats),a model group (15 rats),a Direct moxibustion group (15 rats) and a Ginger moxibustion group (15 rats).HCC models were prepared by intraperitoneal injection of diethylnitrosamine(DEN).Direct moxibustion group and Gingermoxibustion group were treated by moxa cone at Ganshu point,3cones/acupoint,once a day,for a period of 10 weeks.At the end of modeling,glutamyltranspeptidase,aspartatetransaminase and alkaline phosphatase were checked by Elisa.HE staining was used to observe the morphological changes of liver tissues in rats.Results:Aftermodeling,compared with those of the model group,the contents of serum GGT and AFP of the Direct moxibustion group were significantly reduced(P < 0.05),and the contents of serum GGT,AST,ALP and AFP of the Ginger moxibustion group were significantly lower (P < 0.05).Under the light microscopic observation of liver tissue stained with HE,the model group had tumor formation;lobular structure was completely destroyed;atypia of hyperchromatic nuclei was increased;Direct moxibustion group had a small amount of liver plate,and atypia of liver cell nuclear was low;Ginger moxibustion group had hyperchromatic nuclei deeply stained,without finding nodules.Conclusion:Direct moxibustion and Ginger moxibustion can reduce the contents of GGT,AST and ALP in serum of HCC model rats and can improve the liver function.The effect of Ginger moxibustion is superior to that of Direct moxibustion.【期刊名称】《针灸临床杂志》【年(卷),期】2017(033)002【总页数】5页(P45-48,封3)【关键词】直接灸;隔姜灸;大鼠;原发性肝癌;肝功能;甲胎蛋白【作者】王宁;谭丽;闫亚楠;成宇镇;侯中伟;熊博文;冯双双;董珍【作者单位】北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R246.5原发性肝癌(HepatocellularCarcinoma,HCC)是一种常见的肿瘤,在世界范围内多发。
不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶和细胞外调节蛋白激酶表达的影响
目的 观察不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶(MEK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2表达的影响,探讨隔姜灸治疗脾虚证的可能作用机制及量效特征。方法 将75只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、隔姜灸3壮组、隔姜灸6壮组、隔姜灸9壮组,每组15只。200%大黄浓缩液4 ℃灌胃制作脾虚证大鼠模型。造模成功后,隔姜灸组选取“足三里”“中脘”予不同灸量治疗,连续8 d。HE染色镜下观察大鼠胃组织病理学改变,免疫组化检测大鼠胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达。结果 与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤明显,可见较大的破损、脱落;与模型组比较,隔姜灸3壮组大鼠胃黏膜表面有部分脱落、破损情况改善,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组大鼠胃黏膜表面较完整、脱落及破损明显改善。与空白对照组比较,模型组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,隔姜灸各组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白明显表达升高(P<0.01);与隔姜灸3壮组比较,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01),但二者作用效果相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 隔姜灸通过提高胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达,激活MEK/ERK信号转导通路,进而促进脾虚证大鼠胃黏膜的修复。
Abstract: Objective To observe effects of different dosages of moxibustion with ginger-separated moxibustion on expressions of mitogen extracellular kinase (MEK) 1/2 and extracellular regulated protein kinase (ERK) 1/2 of gastric tissue in rats with spleen deficiency; To explore the possible mechanism and the dose-effect relationship. Methods Seventy-five SD rats were randomly divided into blank control group, model group, ginger-separated moxibustion for three zhuang group, six zhuang group and nine zhuang group according to random digits table method, with fifteen rats in each group. The rat model of spleen deficiency was established by intragastric administration with 200% Rhei Radix et Rhizoma infusion at 4 ℃. Ginger-separated moxibustion groups were treated with different dosage of moxibustion at “Zusanli”, “Zhongwan” for eight days after the modeling. Pathological changes of gastric tissue by HE staining were observed under light microscope, and immunohistochemistry was used to detect the expressions of MEK1/2 and ERK1/2 protein in gastric tissue of rats. Results Compared with the blank
control group rats, the gastric mucosa injury in the model group was obvious, which showed that the damage and abscission was more serious; compared with the model group, the gastric mucosa of rats was partly exfoliated and the damage was improved in three zhuang group, and the surface of gastric mucosa of rats was more complete and damage was improved obviously in six zhuang group and nine zhuang group; compared with the blank control group, the expressions of MEK1/2 and ERK1/2 protein in gastric tissue increased obviously in other groups (P<0.01); compared with three zhuang group, the expressions of MEK1/2 and ERK1/2 protein in gastric tissue increased in six zhuang group and nine zhuang group (P<0.01), but the effects of the two group were similar, without statistical significance (P>0.05). Conclusion Ginger-separated moxibustion can repair gastric mucosa in rats with spleen deficiency, which may be closely associated with its effect in increasing the expressions of MEK1/2 and ERK1/2 protein in gastric tissue and activating the MEK/ERK signal transduction pathway.Keywords: dosage of moxibustion; ginger-separated moxibustion; spleen deficiency; proliferation and restoring of gastric mucosa; mitogen activated protein kinase; extracellular regulated protein kinase; rats
脾虚证是指脾气虚弱导致脾失运化的病证,是消化性溃疡、慢性胃炎等消化系统疾病的常见中医证型。有研究发现,脾虚大鼠胃底部黏膜缺损、炎细胞浸润、血管扩张充血、黏膜下层水肿[1]。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号传导通路作用于核转录因子,与细胞增殖和凋亡关系密切,并参与胃黏膜炎症及损伤过程,其中丝裂原细胞外激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)是MAPK信号传导通路中的关键环节[2-3]。临床研究显示,针灸治疗脾胃虚寒证胃炎疗效确切,尤其是艾灸疗法的作用更加明显[4]。前期研究表明,隔姜灸不仅能改善脾胃虚寒证患者的临床症状,还具有抗氧化等良性调节作用[5]。本实验在前期研究的基础上,观察不同灸量隔姜灸对MEK1/2及ERK1/2蛋白表达的影响,从MEK/ERK信号通路角度探讨不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃黏膜的保护作用及量效特征,以期为隔姜灸治疗脾虚证的临床运用提供依据。
1 材料与方法 1.1 动物及分组 雌性健康SD大鼠75只,SPF级,月龄2~3月,体质量200~250 g,湖南斯莱克景达实验动物有限公司,动物许可证号SCXK(湘)2011-0003。饲养于温度20~25 ℃、相对湿度50%~70%环境。75只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、隔姜灸3壮组、隔姜灸6壮组、隔姜灸9壮组,每组15只。
1.2 主要试剂与仪器 艾条,南阳市卧龙汉医艾绒厂;生姜片,厚2~3 mm,直径1.8 cm;ERK1/2试剂盒(美国Proteintech Group公司),MEK1/2试剂盒(英国Abcam公司),石蜡、中性树胶(美国Sigma公司),苏木素、PBS、枸橼酸盐缓冲液、二步法试剂盒(Wellbio公司),DAB试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司),常规化学试剂(国药控股上海生物医药有限公司)。摇床(其林贝尔仪器制造有限公司),恒温箱(北京六一仪器厂),微波炉(美的集团),切片刀(德国莱卡),包埋机(常州中威电子仪器有限公司),精密pH计(雷磁上海仪电科学仪器股份有限 公司),显微镜(Motic实业集团有限公司)。 1.3 造模 参考文献[6]方法造模。每只大鼠200%大黄浓缩液(1 mL/100 g)4 ℃灌胃,每日2次,连续14 d。观察大鼠体质量、饮食饮水量、皮肤毛色、大便情况、精神状态、行为活动等变化。200%大黄浓缩液制备方法:生大黄购自湖南中医药大学第一附属医院中药房,10 g/包,加入100 ℃蒸馏水煮沸5 min,然后用4层纱布过滤3~4次,再用100 ℃水浴浓缩至200%(相当于2 mg原药材/mL),4 ℃保存备用。参照文獻[6]制定脾虚证动物模型评价标准。主症:①泄泻,严重时脱肛;②食少纳呆。兼症:①形体消瘦,体质量减轻;②神态萎靡不振,四肢不收,毛色枯槁无华;③蜷缩聚堆;④容易疲劳。具备2项主症和2项兼症可认为脾虚证模型造模成功。
1.4 取穴 参照《实验针灸学》[7]中常用动物穴位定位法及拟人对照法,以胸锁联合和耻骨联合连线下1/4与上3/4交点为肚脐。足三里:膝关节后外侧,腓骨小头下约5 mm处;中脘:脐与胸骨剑突连线中点,约脐上20 mm处。
1.5 干预及取材 造模成功后,剪除大鼠穴位区2 cm×2 cm鼠毛,暴露局部皮肤组织,酒精消毒。用自制大鼠固定夹将大鼠仰卧位固定,待大鼠安静后进行艾灸治疗。隔姜灸治疗组:将放有艾炷(7 mm×9 mm)的姜片固定于穴位区,点燃施灸,待艾炷燃尽后换下一壮,各隔姜灸治疗组分别按每穴每日3壮、6壮、9壮的灸量,连续治疗8 d。空白对照组与模型组大鼠只固定不作处理。治疗完成后,大鼠禁食24 h,禁水6 h,用10%乌拉坦(1 mL/100 g)麻醉后剖腹,将胃幽门部和贲门部用止血钳结扎,在两结扎线两端切断食道及十二指肠,摘下全胃。沿胃大弯剖开,用冰生理盐水冲洗胃内残留物。在超净工作台下,于胃黏膜损伤明显处,取1 cm×0.5 cm大小的组织块,生理盐水冲洗干净,置于4%多聚甲醛中4 ℃固定24 h,切片(厚度5 ?m),备检。