当前位置：文档之家 › 利福平胶囊的微生物限度检查方法的研究

利福平胶囊的微生物限度检查方法的研究

  • 格式：pdf
  • 大小：2.43 MB
  • 文档页数：4
中国Leabharlann 生素杂志2019年2月第44卷第2期
.233 . 文章编号：1001 -8689(2019)02-0233-04
利福平胶囊的微生物限度检查方法的研究
董自艳I易大为2，张亚杰2 （1辽宁省抚顺市药品检验检测中心，抚顺113006； 2辽宁省药品检验检测院，沈阳110035）
摘要：目的 建立利福平胶囊的微生物限度检查法，并对方法进行验证。方法 取供试品10g,用100mL十四烷酸异丙酯 分散制成油性供试品混悬液，取50mL油性供试品混悬液（相当于利福平胶囊5g）,用pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液100mL萃取，取 水层作为1:20供试液，稀释至1:200供试液，需氧菌按薄膜过滤法，用44°C水浴保温的含0.1%吐温80的pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲 液lOOOmL冲洗，霉菌和酵母菌按常规法计数，控制菌按薄膜过滤法，用pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液500mL冲洗，可消除利福平 胶囊的抑菌活性。结果 釆用上述方法进行验证，5种菌的回收比值均达到0.5~2,控制菌生长良好。结论 本方法可用于利福 平胶囊的微生物限度的检查。
Key words Rifampicin capsules; Microbial limit test; Extraction; Membrane filtration
利福平（rifampicin）是利福霉素B的一种衍生物， 其抗菌力强、抗菌谱广、能低浓度抑菌和高浓度杀 菌。它对结核杆菌、多数革兰阳性菌有强大快速的抗 菌作用，对麻风杆菌、某些革兰阴性菌有抑菌作用⑴。 利福平为红色或暗红色的结晶状粉末 ，不溶于水。
.234.
利福平胶囊的微生物限度检查方法的研究董自艳等
方法去除抑菌活性，才有可能检岀药品中污染的微 生物，避免检验结果假阴性，从而保证微生物限度检 查方法的科学性，以有效控制药品质量〔叽而文献中 虽有滴眼用利福平的微生物限度检查方法的报道，却 未见利福平胶囊微生物限度检查方法的报道3）,而 且滴眼用利福平的微生物限度检查方法与本文所建 立的利福平胶囊微生物限度检查方法的差异很大。 基于此，本文按照2015版中国药典四部非无菌产品 微生物限度检查方法的要求，对利福平胶囊进行方 法学适用性试验，建立的微生物限度检查方法，对 同类药品的微生物学检验具有一定的指导意义 ，具 体研究如下。 1材料 1.1供试样品
Abstract Objective To establish a microbial limit test method of rifampicin capsules, and carry on the verification of methodology. Methods The oil sample was dispersed with lOg of sample and lOOmL of isopropyl myristate. 50mL of oil sample (equivalent to 5g of rifampicin capsules) was extracted with lOOmL of pH 7.0 NaClpeptone buffer. The water layer was used as 1:20 test solution, and diluted to 1:200 test solution. The aerobic bacteria were counted by the membrane filtration method. The filter was washed with lOOOmL 0.1% polysorbate 80 NaClpeptone buffer (at 44°C and pH7.0). Mold and yeast were counted by a routine method. The controlled bacteria were tested with the membrane filtration method, which was washed with 500mL PH7.0 NaCl-peptone buffer. This method can eliminate the bacteriostasis of rifampicin capsules. Results Using the above method, the recovery of five kinds of bacteria was between 0.5 and 2, and the controlled bacteria grew well. Conclusion This method can be used as the microbial limit test of rifampicin capsules.
一般制成胶囊或片剂的口服药，与其他抗结核药合 用起协同作用。主要用于治疗结核病、脑膜炎和金 黄色葡萄球菌感染，外用可治疗沙眼等〔2】。
利福平的抑菌活性很强，2015年版中国药典强 调的方法学适用性试验更显重要性，只有采用适宜
收稿日期：2018-02-09 作者简介：董自艳，女，生于1985年，主管药师，从事药品检验工作，E-mail: dzywell@ *通讯作者，E-mail: Detin@
利福平胶囊，规格：0.3g,批号：1708031、 1708032和1708033,某药厂生产。 1.2仪器
关键词：利福平胶囊；微生物限度；萃取；薄膜过滤 中图分类号：R978 文献标志码：A
Study on the microbial limit test method of rifampicin capsules
Dong Zi-yan1, Yi Da-wei2 and Zhang Ya-jie2
(1 Fushun Institute for Drug Control, Fushun 113006; 2 Liaoning Institute for Drug Control, Shenyang 110035)

合集下载

微生物限度检查概述及方法

微生物限度检查概述及方法

微⽣物限度检查概述及⽅法微⽣物限度检查概述及⽅法第⼀部分药品微⽣物限度检查原理；⼀微⽣物学基本原理（⼀）、微⽣物的概念和类别；所谓微⽣物（microorgamisms）是⼀群个体微⼩结构简单⾁眼不能直接看到，必须借助显微镜以及其它⼿段才能辨别微⼩⽣物。

1、结构类型按微⽣物细胞结构和组成不同可分原核细胞型微⽣物：代表（细菌）真核细胞型微⽣物：代表（真菌）⾮细胞型微⽣物：代表（病毒）2、营养类型根据微⽣物的不同营养要求，可分为⾃养型和异养型两类，⼜以所利⽤能源的来源不同，分为化能营养型和光能营养型。

药品中所污染的微⽣物，从营养型⾓度看，他⼤多数异养型，且以腐⽣性和兼性寄⽣性化能异养型为主，容易⽤⼈⼯培养繁殖，是药品进⾏⽆菌及限度检查的最基本原理。

3、影响微⽣物⽣长繁殖的因素1）物理因素：温度、湿度、渗逶压、辐射2）化学因素：营养物质、酸碱度、氧、有毒物质：其影响微⽣物⽣长的机制主要有a 使菌体蛋⽩变性或沉淀b ⼲扰微⽣物酶系统各的影响其代谢c 损伤微⽣物细胞膜，使内容物逸出。

3）⽣物因素。

在微⽣物之间，微⽣物与寄主动植物之间均存在着各种互相作⽤的关系，主要为寄⽣、共⽣、拮抗关系等。

噬菌体与寄主菌、细菌素对某些细菌的抗菌作⽤，就是⽣物因素的具体表现。

四、微⽣物代谢及其在⽣长检定中的意义微⽣物⽣化鉴定试验，所使⽤的基本原理，就是利⽤微⽣物所物有的代谢反应，其中⼤部分波及到酶的反应1）微⽣物主要代谢内容A、呼吸作⽤-根据微⽣物呼吸作⽤最终电⼦受体性质分为呼吸作⽤，⽆氧呼吸作⽤及发酵作⽤三种，⽆本质区别，都是物质被氧化，同时另⼀物质被还原只是物质被氧化分解程度和释放⽔平不同。

相关的⽣化鉴反应如过氧化氢酶试验，硝酸盐还原试验，氰化钾试验等。

B、糖的分解有关的⽣化鉴定反应如糖（醇、苷）类发酵试验，葡萄糖的氧化/发酵试验，甲基试验，甲基红试验，VP试验C、蛋⽩质和氨基酸的分解相关⽣化鉴定试验如吲哚试验、明胶液化试验、硫化氢试验等。

微生物限度检查

微生物限度检查

19
此时您正浏览在第19页，共80页。
（2）控制菌检查：测定单位重量（体积或面 积）药品中的粪便污染指示菌和某些特定 菌，如大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄 球菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌、 螨等在规定量的样品中不得检出或不超过 某限度。 对于大肠菌群，采用系列稀释级供试 液，分别定量加置规定数量的试管中，经 培养后记录出现产酸或产气的管数，按最 近似数（MPN）对染菌量做出定量估计。
4
此时您正浏览在第4页，共80页。
二、药品微生物限度检查的特殊性和基 本条件
1、药品微生物限度检查的特殊性
（1） 活体细胞 （2）分布不匀 （3）多数处于受损状态 （4）生境复杂
5
此时您正浏览在第5页，共80页。
（1） 活体细胞 药品微生物限度检查以活体菌细胞为
对象，污染菌在药品中处于不稳定状态， 可随存放时间延长而死亡，也可在适宜条 件下大量繁殖。药品还可因为本身性质， 存放温、湿度，暴露空气等状态不一，污 染菌发生变化导致检出结果的差异.
对于非规定灭菌药品，包括常用的口服制剂与局 部外用制剂。对这一部分制剂一般不要求绝对无 菌，允许在规定量的样品中，检出一定限量的微 生物，但不得检出某些控制菌。通常药品微生物 限度检查的检验对象多为此类药物。
此外，与药品质量密切相关的还有辅料、包装材料以 及生产环境的检测和医用材料、器械等也都制定了相 应的微生物学限度指标。
应进行复试。 我国药典规定，对菌落数测定当一
次检查不合格时，应从同一批样品中随 机抽样，独立复试两次，以三次检查结 果的平均值报告菌数，这是对染菌处在 合格边缘数的产品，避免由此引起可能 的争议采取的一种界定方法。
23
此时您正浏览在第23页，共80页。
2.控制菌报告及复试
微生物限度检查法

微生物限度检查法


无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内 ，室内光照应分布均匀，光照度不低 于300勒克斯。缓冲间和操作间均应 设置紫外线杀菌灯（２～２.5W/m3 ），紫外杀菌灯应距实验台面高度不 超过1M，并应定期检查辐射强度， 不得低于70μW.cm-2（１M距离） 。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更 换。
2.1.1.2温度、湿度 无菌室内温度 和相对湿度直接影响紫外杀菌灯杀 菌效果，故温度应控制在18～ 26℃，相对湿度40～60％。操作 间或净化工作台的洁净空气应保持 对环境形成正压、不低于4.9Pa。
6.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和空 气过滤装置，并使其工作不低于 30min。
6.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭 紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作 鞋。再用0.1%苯扎溴铵溶液或其 他消毒液洗手或用乙醇棉擦手，穿 戴无菌衣、帽、口罩、手套。
6.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手， 再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球 ）擦拭供试品瓶、盒、袋等的开 口处周围，待干后用灭菌的手术 镊或剪将供试品启封。
一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可 由一个或多个菌细胞形成。因此供 试品中所测的菌落数实际为菌落形 成单位数（colony forming unit ，CFU），而不应理解为细菌、霉 菌、酵母菌的个数。
微生物检验项目：细菌总数测定、 霉菌与酵母菌总数测定、控制菌检验（ 包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙门 菌、金黄葡萄球菌、破伤风梭菌）以及 活螨的检验。
2.1.2其他设备、净化工作台、恒温 培养箱（30～35℃）、生化培养箱 （25～28℃），微波炉（或其他适 宜加热装置）、康氏振荡器、匀浆 仪（3000～8000r/min）、恒温 水浴、电热干燥箱（250～300℃） 、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器 （使用时要进行灭菌效果检查并应 定期请有关部门检定）。
异福片中利福平有关杂质研究

异福片中利福平有关杂质研究

异福片中利福平有关杂质研究摘要】目的：对异福片中利福平有关物质进行研究，建立异福片的杂质谱，为更好的保证产品质量提供参考。

方法：采用国际药典中异福片有关物质的检测方法，经过分析方法验证后，对3批异福片进行检测分析。

依照ICH Q1进行杂质的稳定性研究，又依照ICH Q3的原则进行未知杂质的研究。

结果：本方法不受辅料和异烟肼的干扰，异烟肼利福霉素腙、醌式利福平等杂质之间以及醌和利福平的分离度达到要求。

利福平检测限为0.1261μg•mL-1。

对醌、腙等六个杂质进行了研究，建立了异福片杂质谱。

结论：异福片有关物质的分析方法专属性强、灵敏度高、耐用性好，有关物质符合国际药典要求，建立了杂质谱后可以更有效地进行杂质控制。

【关键词】抗结核；异福片；杂质【中图分类号】R95 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）14-0396-02异福片是利福平和异烟肼组成的固定剂量复方制剂（Fixed Dose Combination,FDC），由赛诺菲-安万特公司于上世纪研发。

该品种现收载于国际药典、英国药典、中国药典等，已列入预认证（Prequalification Program, PQ）品种目录。

本课题是中国卫生部-盖茨基金会结核病防治项目中“中国抗结核FDC药品的质量保证”子项目的一部分。

本课题参照ICH指导原则开展了分析方法验证和降解杂质研究，为制药企业开展高端仿制药杂质研究提供参考依据。

1.仪器与材料1.1 仪器和设备Agilent1200型高效液相色谱仪（配有在线脱气机、四元泵、自动进样器、UV检测器和Chemstation工作站，美国Agilent公司），高纯水机，微孔滤膜及过滤装置。

1.2 试剂和试药利福平对照品（批号：L0J351，USP），异烟肼对照品（批号：10G205，USP），卫非宁Rifinah（规格：福平300mg/异烟肼150mg；批号：A1462；诺菲-安万特公司意大利工厂生产），利福平原料药（漯河南街村药业集团制药有限公司生产），异福片（规格：利福平300mg/异烟肼150mg；批号：130501YF、130502YF和130601YF；华北制药股份有限公司生产，高密度聚乙烯瓶、铝塑铝封口签），醌式利福平对照品（批号：130413-201104，纯度94.6%，中国食品药品检定研究院），甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾和乙酸为分析纯，水为超纯水。