复星长征血清5'-核苷酸酶试剂在生化检验中的应用

第４期　华夏　医　学　第３０卷　本研究结果显示，实验组的临床总有效率明显　高于对照组，晨僵时间较对照组短，疼痛评分也比对　照组要低，说明采用南蛇藤酒配合中药熏蒸对缓解　痹症患者关节疼痛和肿胀，改善关节功能有着较高　的疗效，可在临床上加以推广。　参考文献：　［１］徐鹏刚，刘焕．王素芝治疗风湿寒性关节痛的经验［Ｊ］．陕　西中医，２０１５，３６（７）：９０１－９０２．　［２］田雪梅，王海东．针刀温阳通督法治疗风湿寒性关节痛疗　效观察［Ｊ］．西部中医药，２０１４，２７（３）：１２０－１２２．　［３］陈祖明，田鹏，张国军．自拟通痹汤治疗风湿性关节病　１１８例疗效观察［Ｊ］．中国现代药物应用，２０１５，９（２０）：　２５８－２５９．　［４］徐凡．身痛逐瘀汤配合针灸治疗风湿关节痛临床效果分　析［Ｊ］．医学信息，２０１５，２８（２３）：３６４－３６５．　［５］林海，黄雪琪，杨惠卿，等．国医大师路志正治疗风湿关节　ＤＯＩ：１０．１９２９６／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８—２４０９．２０１７—０４—０２４　痛类疾病的常用罕见药物［Ｊ］．世界中西医结合杂志，　２０１５，ｌＯ（１１）：１４９９－１５Ｏ０．　［６］王以兵．风湿关节痛应用身痛逐瘀汤配合针灸治疗的效　果研究［Ｊ］．世界最新医学信息文摘，２０１６，１６（４８）：１２１．　［７］苗立成，巫朝伦，刘珊．风湿寒性关节痛外治疗法浅析　［Ｊ］．光明中医，２０１４，２９（３）：５５５－５５６．　［８］王海申．穴位贴敷治疗风湿寒性膝关节痛１２８例［Ｊ］．中　医外治杂志，２０１４，２３（４）：５２．　［９］刘字杰，肖飞宇．针灸联合身痛逐瘀汤治疗风湿关节痛　４０例临床观察［Ｊ］．中国民族民间医药，２０１５，２４（２２）：　１１２－ｌ１３．　［１０］林华，王科澎，张艳媚．中药薰药联合穴位敷贴治疗风湿　寒性关节痛的临床研究［Ｊ］．黑龙江中医药，２０１５，４４　（２）：４９—５Ｏ．　［收稿日期：２０１７－０２－２４］　［责任编辑：邓德灵英文编辑：梁雪清］　复星长征血清５　一核苷酸酶试剂在生化检验中的应用　刘镇宏　（阳朔县妇幼保健院，广西阳朔５４１９９９）　摘要：目的：评价５　一核苷酸酶试剂（速率法）在自动化检测血清或血浆中５　．核苷酸酶活性的应用。　方法：采用日立７１８０全自动生化分析仪，通过重复性、线性试验测定血清或血浆中５　一核苷酸酶活　性，进行方法学评价并与美国Ｄｉａｚｙｍｅ　５　－核苷酸酶试剂（速率法）比较。结果：两个水平质控中酶活　性的变异系数（ＣＶ）分别为２．８３％和１．９６％，在５～２００　Ｕ／Ｌ酶活性范围内，线性良好。两种试剂测定　血清５　－核苷酸酶活性的相关系数较好，相关系数ｒ为０．９９５。结论：自主研发的５　．核苷酸酶试剂盒　操作简便、快速、准确、稳定，结果准确，可满足大批量临床样本的常规和自动化分析，是一种值得推　广的方法。　关键词：５　一核苷酸酶；诊断试剂；自动化分析　中图分类号：Ｒ９８１；Ｒ４４６．１１２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００８－２４０９（２０１７）０４—００８２—０４　・８２・

　第４期　刘镇宏：复星长征血清５　一核苷酸酶试剂在生化检验中的应用　第３０卷　ＡｐｐＨｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｏｓｕｎ　Ｌｏｎｇ　Ｍａｒｃｈ　ｓｅｒｕｍ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ／ＬＩＵ　Ｚｈｅｎｈｏｎｇ／／　Ｙａｎｇｓｈｕｏ　５４１９９９，Ｃｈｉｎａ　５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ　ｒｅａｇｅｎｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｙａｎｇｓｈｕｏ　Ｍａｔｅｒｎａｌ　ａｎｄ　Ｃｈｉｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｅａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ　ｒｅａｇｅｎｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　ａｕｔｏｍａｔｉｃ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ（５’一ＮＴ）ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｅｒｕｍ　５’一ＮＴ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ＨＩＴＡＣＨＩ　７　１　８０　ａｕｔｏｍａｔｉｃ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎａｌｙｚｅｒ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｔｅｓｔｓ，　ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｄｉａｚｙｍｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ．Ｒｅｓｕｈｓ：Ｔｈｅ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ（ＣＶ）ｏＴ　ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｔ　ｔｗｏ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｑｕａｌｉ￣ｃｏｎｔｒｏｌ　ｗｅｒｅ　２．８３％ａｎｄ　１．９６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　５　ｔｏ　２００　Ｕ／Ｌ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｗｏ　ｒｅａｇｅｎｔｓ（ｒ＝０．９９５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　５’一ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ　ｒｅａｇｅｎｔ　ｍａｄｅ　ｂｙ　ｏｕｒ　ｃｏｍｐａｎｙ　Ｃａｎ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｓｉｍｐｌｅ，ｑｕｉｃｋ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　５’ＮＴ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｍｅｅｔ　ｔｈｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍａｓｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｒｌ　ｂｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：５’一ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ；ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｒｅａｇｅｎｔ；ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　１９３４年Ｒｅｉｓ第一次描述了心脏和骨骼肌中５　．　核苷酸酶（ＥＣ３．１．３．５）的活性ｌ１　Ｊ。它的主要功能是　将核苷酸５＇－Ｃ上连接的磷酸催化水解生成核苷和正　磷酸，其在细胞生长发育、运动、纤维蛋白合成、神经　传递、淋巴细胞的黏附、再循环、免疫应答等方面发　挥重要作用及在缺血性心脏病、缺血性肾脏病、白血　病、肿瘤等疾病的发生和发展过程中的作用越来越　受到人们的重视＿２　ｊ。目前测定５　．核苷酸酶活性的　方法有很多，包括钼蓝显色法　５ｌ、Ｋａｌｃｋａｒ氏法【６Ｊ、改　进的Ｋａｌｃｋａｒ氏法　、酶法－８　和速率法。其中钼蓝显　色法和速率法是最常用的方法，但是钼蓝显色法所　需试剂种类多，操作烦琐、费时，不适宜自动化分析；　速率法通常须采用昂贵的进口试剂，而大部分国产　５　一ＮＴ试剂只能用于血清样本的检测。本研究采用　复星长征试剂测定血清或血浆中５　．核苷酸酶的活　性，并对其进行方法学评价。　１材料与方法　１．１　仪器　日立７１８０全自动生化分析仪。　１．２试剂、校准品和质控品　复星长征自主研发５’一ＮＴ试剂（批号为　Ｄ２０１５０７０３，简称复星长征试剂）；对照试剂（批号为　８７４６）、校准品（批号为ＮＴＳ００１１２０）、配套质控品１　（批号为ＮＴＣ１０１５１０）和配套质控品２（批号为　ＮＴＣ２０１５１０）均购自美国Ｄｉａｚｙｍｅ公司。　１．３标本　本研究收集的标本为广西阳朔县妇幼保健院住院　患者１００例，静脉采血，样本新鲜无溶血、无黄疸。同一　份样本各采２管血，１份，血清样本１份，肝素血浆样本。　１．４测定方法及条件　按照以下参数来设置日立７１８０全自动生化分　析仪。速率法：温度３７℃，主波长５４６　ａｍ，副波长　８００　ａｍ，吸光度范围０—２　Ａ，比色杯光径１．０　ｃｍ，反　应方向为吸光度上升的反应，样本用量６　，复星长　征试剂和Ｄｉａｚｙｍｅ试剂均为液体双试剂，分别由试　剂１（Ｒ１）和试剂２（Ｒ２）组成。Ｒｌ用量２２５　ｌ，孵育　时间５　ｍｉｎ；Ｒ２用量７５　，延迟肘间１２０　Ｓ，测定时间　１２０　Ｓ，校准模式为两点定标。　１．５空白吸光度　用试剂（盒）测试生理盐水，记录试剂（盒）参数　规定读数点５４６　ｎｍ下的吸光度值（Ａ），重复２次。　１．６重复性　在重复条件下，测试５＇－ＮＴ活性标示值分别为　２８．３　Ｕ／Ｌ和１４１．２　Ｕ／Ｌ的控制血清，将这两水平控　制血清分别测试１０次，计算测量值的平均值（　）、标　准差（ｓ）和变异系数（ｃｖ）。　・８３・

　第４期　华夏　医　学　第３０卷　１．７线性试验　用接近线性范围下限的低活性样品与接近线性　范围上限的高活性样品混合配制成５．０，１２．５，２５．０，　５０．０，１００．０，２００．０　Ｕ／Ｌ的６个样品（ｘｉ），分别用测试　试剂（盒）对各样品进行测试，每个样品测试３次，分　别求出每个活性浓度样品检测结果的均值（ｙｉ）。以　６个浓度（ｘｉ）为自变量，以检测结果均值（ｙｉ）为因变　量作线性回归。　１．８血清和血浆测定结果比较　１００例份的血浆和血清样本同时检测５　．ＮＴ活　性，并比较测定结果。　１．９复星长征试剂与Ｄｉａｚｙｍｅ试剂的对比试验　随机选择５０份样本，每份样本作双份测定，取　均值，按ＮＣＣＬＳ　ＥＰ９文件的评价方案统计结果。　２　结果　２．１　空白吸光度　３次试剂空白的检测结果分为０，０１６７，０．０１７２，　０．０１５９，试剂的空白变化率的检测结果分别为　０．００１０，０．０００８，０．０００９，结果表明试剂空白小于０．５，　试剂的空白变化率小于０．００５，检测结果符合产品注　册标准，试剂性能可控。　２．２重复性　低、高活性两个水平质控中酶活性的平均值分　别为２７．８　Ｕ／Ｌ和１３９．６　Ｕ／Ｌ，变异系数（ＣＶ）分别为　２．８３％和１．９６％，均小于５％。试剂的重复性检测结　果符合产品注册标准，试剂性能可控。　２．３线性试验理论值（　）与测定值《ｙ）之间的线性　回归　所得数据的线性回归方程为Ｙ＝０．９８７６Ｘ一　０．７４６２，Ｒ＝０．９９９９，５　一ＮＴ酶活浓度在５～２００　Ｕ／Ｌ范　围内线性关系良好。　２．４血清与血浆标本５＇－ＮＴ测定结果比较　复星长征公司试剂对血清和血浆中５　一ＮＴ活性　的检测结果的均值为３．８５　Ｕ／Ｌ和３．８１　Ｕ／Ｌ，两者比　较差异无统计学意义（　＝０．２３，Ｐ＞０．０５），血清和血浆　测定结果之间具有良好的相关性（ｒ＝０．９９９，图１）。　Ｖ血清　Ｏ　１Ｏ　２０　３Ｏ　５０　６０　７Ｏ　８Ｏ　９０　１ＯＯ　样本　图１复星长征试剂测定血清和血浆中５＇－核苷酸酶活性　２．５复星长征试剂（速率法）与Ｄｉａｚｙｍｅ试剂的比　对以及偏倚评估　Ｄｉａｚｙｍｅ公司试剂和复星长征试剂对１００例血　清５　．ＮＴ活性检测的均值分别为３．９７　Ｕ／Ｌ和　３．８５　Ｕ／Ｌ，两者比较差异无统计学意义（ｔ＝０．２３，Ｐ＞　０．０５），所测５　一ＮＴ活性具有良好的相关性（ｒ＝　０．９９５，图２）。两方法均值相对偏差的偏置曲线图可　・８４・　以看出２种试剂检测同一样本的相对偏差结果良　好，部分样本的相对偏差绝对值虽然超过１５％，但都　集中在４　Ｕ／Ｌ以下，可能是由于样本浓度极低、试剂　以及机器的系统偏差所致；另一方面，参考值为０—　１１　Ｕ／Ｌ，低于该值的样本不影响结果的判断。显示２　种试剂测定单个样本偏差较小，分布较合理。　６　４　２　０　８　６　４　２　Ｏ　一　ｎ）　矮滥毹杠３绊　”