实验设计

实验设计临床病例 1、某女性患者，40岁。尿频、尿急、尿痛、小腹不适。临床诊断为尿路感染？（尿道炎？）。采集患者清洁中段尿标本。请进行尿标本细菌学检查、鉴定及药敏实验。 2、5岁患儿，食用某种不洁食物后，发热39℃，伴有恶心、呕吐、腹痛、腹泻、里急后重，稀便转成脓血粘液便，每日数十次，量少，失水不显著。临床初步诊断为急性细菌性痢疾。请你设计实验进行细菌的分离培养、鉴定及药敏实验。 3、患儿，男，3岁。三天前开始发热，最高38.8℃。伴有咽痛，头痛，呕吐等全身症状。一天前全身皮肤发红，出现皮疹。查体见咽部充血及点状出血，全身典型皮疹，体温38.5℃。近二周幼儿园有多个相似病例出现。临床初步诊断为猩红热。采集患儿咽拭子标本，请设计实验进行病原菌分离、鉴定、致病力分析及药敏实验。 4、某女性患者，32岁，已婚。外阴骚痒、灼痛，伴有尿频、尿痛及性交痛，白带增多，稠厚呈豆渣样。临床诊断：真菌性阴道炎。采集阴道分泌物标本。请进行阴道分泌物病原性真菌分离、鉴定、致病力分析及药敏试验。 5、患者，男性，35岁。近一周常感乏力、体温升高38.0℃+、厌食、恶心、呕吐等，小便深黄，大便灰白，皮肤巩膜黄染，肝脾肿大，肝区扣痛，肝功检测转氨酶升高，临床诊断为甲型肝炎。请设计实验进行病原学诊断。 6、某2岁患儿，突然发热38.5℃，伴有咳嗽、流鼻涕等感冒症状，手掌、脚掌部出现斑丘疹和疱疹，临床初步诊断为手足口病。请你设计实验进行病毒的分离培养和鉴定，以确定该病原体为何种病毒？ 附件： 病原生物学实验设计论文 论文题目：（一般20字以内，加粗3号宋体字 ）

指导老师： 小组成员：（学号： ）

班 级： 2014年4月18日 研究内容摘要（200字以内） 关键词 （3-5个）： 一、 选题的目的和意义（主要说明：进行研究的必要性、预期达到的目的、 实际应用价值和学术意义）（600字以内） 二、国内研究现状：（综述：相关研究进展与现况、今后发展动态、待解决问题、

主要参考文献 ）（1000字以内，附主要参考文献）

三、拟采取的技术路线及实验方案 （1000字以内） 四、预期结果（600字以内）

五、项目组成员分工 小四号字体，1.25倍行距 示例1： 尿路感染的常见病原菌分布及耐药性分析

研究内容摘要（200字以内） 目的 了解尿路感染病原菌的分布及耐药性特征，为临床选用抗生素、控制医院感染提供依据。 研究内容 收集300例尿路感染患者的中段尿标本，常规分离培养，并对分离的病原菌通过图片染色、生化试验等进行鉴定,运用纸片扩散法进行耐药性的检测。 预期结果及意义 可鉴定出尿路感染的致病菌。掌握尿路感染常见病原菌的分布及耐尿情况，对指导临床合理规范使用抗菌药物、控制耐药菌株的播散和院内感染具有重要意义。 关键词（3-5个） ：尿路感染；病原菌；耐药性

一、选题的目的和意义（主要说明：进行研究的必要性、预期达到的目的、实际应用价值和学术意义）（600字以内） 尿路感染是临床常见的感染性疾病之一，抗生素是治疗下尿路感染的主要方法，但是并非所有病例都能取得很好效果。有些病例反复感染，令患者痛苦。近年来由于抗菌药物的广泛使用和用药合理性存在问题，导致临床病原菌耐药谱的变迁，耐药水平越来越严重，多重耐药情况比较突出，因此对泌尿系统感染病原菌的研究很有必要。通过本实验可以了解泌尿系统感染的常见病原菌的种类及其在不同人群的分布情况以及耐药性的情况。我们研究尿路感染的常见病原菌分布及耐药性分析，有以下意义： 1.从预防角度，根据细菌对酸碱环境抵抗力的不同，选择不同的清洁剂，来清洗外阴。如对碱敏感，可以选用碱性的肥皂水。也可根据细菌对高温和紫外线的敏感，通过高温加热和紫外线的照射来对贴身衣物进行灭菌消毒。 2.从治疗方面，根据细菌对药物的敏感性以及耐药程度选择合适的抗生素来进行临床治疗，并且可减少医院内的感染，延缓细菌耐药的产生，控制耐药菌株的播散和流行。 3．在学术研究方面，可以进一步加强对尿路感染常见病原菌形态结构、培养特性、生化反应、致病性以及耐药性等的认识。指导临床经济且有效地用药，延缓细菌耐药性的产生，并且帮助于寻找新的非抗生素治疗方法。

二、国内研究现状（综述：相关研究进展与现况、今后发展动态、待解决问题、 主要参考文献 ） （1000字以内，5篇以上参考文献） 目前国内的大多数研究表明：大多数单纯UTI由致病性大肠埃希菌引起，约占90%，其他如肠杆菌、克雷伯杆菌、变形杆菌以及假单胞杆菌等也很常见。革兰阳性球菌如腐生葡萄球菌和肠球菌在某些条件下也可成为病原菌[1]。在年轻女性UTI，腐生葡萄球菌感染约占10%，尤其在夏秋两季[4]。在留置导尿管或因其他感染应用广谱抗生素的患者，肠球菌常是致病菌。从尿中分离出肠球菌常提示有混合感染或有其他泌尿道疾患存在。金黄色葡萄球菌则通过血行感染[2]。 复杂性UTI 常由一些不常见的或耐药的病原菌引起。各种细菌、分枝杆菌、病毒和真菌 等均可成为致病菌。偶尔在免疫抑制或有隐匿性结构异常的患者，一些肠道病原菌如非伤寒 沙门菌也可引起UTI。 源于尿路感染菌血症的病原菌谱与其原发尿路感染的病原菌谱一致。在一组180例成人UTI 合并菌血症的研究中，80%的病原菌是革兰阴性菌，主要是大肠杆菌。长期留置导尿管的患 者，革兰阳性菌的比例增加（32%比14%）[5]。 来源于泌尿道的白色念珠菌菌血症近来也有报道。1993年报告的一组源于泌尿道的白色念珠 菌血症患者，19%由耐氟康唑（大扶康）的菌属光滑球拟酵母菌引起。鉴于氟康唑的应用越来越多，可以预见耐氟康唑的念珠菌属感染会越来越重要[6]。 从以上来看，导致尿路感染的病原菌多种多样，目前临床上主要用抗生素来治疗，但是由于它的滥用，又导致细菌耐药越来越严重，出现了最新抗生素都无能为力的“超级细菌”。今后需研究细菌耐药机制，开发新的抗生素以及新的非抗生素治疗尿路感染的方法。 针对这一医学难题，科学家们决定尝试一种新的方法，即开发针对细菌毒力因子这个靶点的物质，抑制细菌粘附在膀胱内部。这样以来，微生物就不能造成感染了。另外，这一类新的抗微生物物质有望降低耐药微生物的出现。 另外，研究表明在绝经后妇女中，雌激素可帮助保护其尿路免受感染。雌激素可增加身体自制的被称作抗菌肽的抗生素的产生。雌激素会作用于基因表达，以帮助激活在膀胱中的某些抗菌肽的产生。该激素还会通过将膀胱内衬细胞之间的间隙黏合在一起而在结构上加强尿路组织，使得细菌更难通过膀胱内衬细胞而进入膀胱壁的较深层组织。因此，我们认为也可以从雌激素的角度来治疗尿路感染[1]。 为了让病人摆脱尿路感染给其带来的痛苦，我们需要探索更好的治疗方法。

三、拟采取的技术路线及实验方案 （1000字以内） 1 采集标本 标本来源是2012年——2013年间来青医附院就诊的尿路感染患者，均符合尿路感染诊断标准的16——50岁患者标本500例，其中男女患者各250例。标本 留取送检方法是嘱患者在使用抗菌药物前，晨起以肥皂水清洗女性外阴或男性尿道口，留取中段尿置无菌容器内并立即送检。 2 浓缩集菌 无菌操作取尿液5ML，放入无菌试管内经3000rpm,离心15分钟，弃去上清液，取沉渣涂片，干燥固定。 3 直接镜检 干燥固定后的标本进行革兰染色，油镜下观察，根据革兰染色阳性或阴性，球菌或杆菌，排列方式等进行初步报告。 4 分离培养以及药敏实验 将尿液标本画线接种在血平板及肠道弱选择培养基伊红美蓝上，以及常见抗生素的药敏纸片左氧氟沙星，头孢曲松，呋喃妥因，青霉素，氯霉素等粘贴在培养基上，然后在35度孵育箱内培养24小时。 5 生化实验 经过直接镜检发现有革兰阳性球菌，革兰阴性杆菌 （1）选择革兰阳性球菌进行触酶实验，首先触酶阳性的再进行O/F实验，发现是F型，确定为葡萄球菌属，再进行血浆凝固酶实验，阳性为金黄色葡萄球菌，阴性为表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。触酶实验阴性则为链球菌科，然后观察溶血情况，属于甲型溶血，进行Optochin实验，结果为阴性再进行胆汁七叶苷实验，结果为阳性，再加入6.5%NaCl，经培养后继续生长，则确实为肠球菌属。 （2）革兰阴性杆菌进行葡萄糖氧化、发酵实验结果为发酵型，氧化酶实验阴性确定该类细菌为肠杆菌科，再进行苯丙氨酸脱氨酶实验和葡萄糖酸盐氧化实验，结果均阴性的进行以下实验：硫化氢实验阴性，动力实验阳性，赖氨酸阳性，枸橼酸盐阴性，吲哚实验阳性，乳糖实验阳性，尿素酶阴性，可确定为埃希菌属。苯丙氨酸脱氨酶实验阳性且葡萄糖酸盐氧化实验阴性的进行以下实验：硫化氢阳性，鸟氨酸阳性，枸橼酸盐阳性，则确定为变形杆菌属。

四、预期结果（600字以内） 通过对中段尿的标本进行浓缩集菌，然后革兰染色直接镜检，首先区分出革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌等。再通过分离培养、药敏试验以及生化试验如氧化酶、触酶试验、血浆凝固酶试验、胆汁七叶苷、Optochin、苯丙氨酸脱氨酶、葡萄糖酸盐氧化酶试验等等鉴定出大肠埃希菌属、金黄色葡萄球菌属等。 通过耐药试验可以掌握致病菌的药物敏感性及耐药情况，从而指导临床合理用药。 摘要示例2： EB病毒EBERs和BARF1基因变异型参与鼻咽癌癌变的分子机制研究 EB病毒（EBV）编码基因EBERs和BARF1具有致癌作用，但其致癌机制尚不明了。我们前期对EBV基因多态性研究中发现了与鼻咽癌（NPC）相关的EBERs和BARF1变异型。为探讨EBERs和BARF1变异对其生物学功能的影响及在NPC发生中的作用，将EBERs和BARF1原型和变异型基因分别转染EBV阴性NPC细胞系，比较它们对细胞增生、抗凋亡、锚着非依赖生长及致瘤性等生物学行为的影响，观察EBERs变异型对PKR蛋白激酶磷酸化抑制作用。同时采用基因芯片技术筛选EBERs或BARF1基因转染前后细胞差异表达基因及转染变异型和原型基因细胞中差异表达基因，对差异表达基因进行功能分类和生物反应通路分析，选择与细胞增生、凋亡相关通路在NPC细胞和组织中验证，以期寻找与EBERs或BARF1及其变异型相关的细胞基因及调节通路，探讨其参与NPC的分子机制，为阐明NPC发生机制提供实验依据。

参考文献录入格式： 1． 宣世英，李宁，施永新，孙樱，张健，姜文杰，强新. 螺杆菌感染与原发性肝癌的相关性研究. 中华医学杂志，2005，85（6）：391-395. 2． Xuan SY, Li N, Qiang X, Zhou RR, Shi YX, Jiang WJ. Helicobacter infection in hepatocellular carcinoma tissue. World J Gastroenterol, 2006, 12(15): 2335-2340. 3． 刘少奇. 论共产党员的修养. 修订2版. 北京：人民出版社，1962. 4． 注意在正文相应位置中的标注