实验五细胞融合
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实验一胞间连丝的观察一、实验目的:观察植物细胞间的胞间连丝,进一步认识细胞并不是“独立王国”,胞间连丝为细胞间的物质运输与信号传递起桥梁作用。
二、实验用具:1、器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子等2、材料:红辣椒、玉米三、实验内容:1、红辣椒表皮细胞临时装片制作:观察胞间连丝,剪取一小块红辣椒,用小刀小心刮除果肉,留下一层极薄的表皮,置于载玻片上,滴一滴清水,盖盖片,吸水后即可。
2、玉米籽粒糊粉层临时装片制作:玉米籽粒用镊子剥去表皮后,露出糊粉层,制作徒手切片,制作时刀口与糊粉层平行,把切好的薄片置于载玻片上,加一滴清水后盖片,即可观察。
3、柿子胚乳细胞永久装片的观察。
四、注意事项:光线不要太亮五、作业:1、完成实验报告,并绘胞间连丝图。
2、胞间连丝属于哪种细胞连接,有何生物学功能?实验二植物细胞原生质流动的观察一、实验目的在活细胞中,原生质流动是细胞活力强弱的重要指标。
通常认为,原生质流动是原生质中微丝肌动蛋白与肌球蛋白相互滑动的结果,这个过程要消耗能量,也受光照、温度、渗透压、机械损伤等的影响。
通过实验认识细胞原生质流动的现象,并了解其影响因素。
二、实验用品:1、材料:黑藻2、器材:显微镜、载玻片、盖玻片等三、实验内容:1、黑藻叶片细胞质流动的观察取黑藻叶片制作临时装片并观察,注意流速,并记录。
2、用温水浸泡,再观察其流动速度有无改变,并记录。
3、用照明灯照射一段时间后再观察其流动速度有无改变,并记录。
四、作业:1、如何理解细胞原生质流动的原理?2、细胞质环流有何特点?3、图示细胞质环流。
实验三动物细胞线粒体的超活染色与观察一、实验原理:活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所。
詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化状态(即有色状态)呈现蓝悬浮绿色,而线粒体周围的细胞质中,这些染料被还原为无色的色基。
不同浓度PEG诱导的细胞融合效果比较一、实验目的1.了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术;2.学会鉴别融合细胞;3.探讨聚乙二醇的浓度与其诱导细胞融合的效果之间的关系。
二、实验原理细胞融合又称细胞杂交(cell hybridization),即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合,在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合,也能产生种间细胞的融合,因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有生物法用灭活的仙台病毒(Sendai virus),化学法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如电脉冲。
目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。
PEG的促融机制尚不完全清楚,它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。
动植物细胞融合方法不同,病毒诱导主要应用于动物细胞的融合,电融合主要应用于植物细胞,而聚乙二醇由于其操作方法简单、效果稳定,可以用于诱导植物原生质体融合和多种动物细胞融合基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体(homokaryon);来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体(heterokaryon)。
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
由于PEG的作用原理是破坏细胞膜的结构,因此PEG诱导细胞融台的效果,同其相对分子质量大小及浓度高低、作用时间、PH值密切相关。
PEG相对分子质量、浓度增大,促进细胞融台的能力提高了、但它对细胞的毒性也随之增大,从而降低得到的融合细胞的数目。
因此,本实验探讨PEG的浓度与细胞融合效果之间的关系三、实验器材实验材料鸡红细胞实验器材普通离心机、水浴锅(50ºC,37ºC)、细胞计数板实验试剂肝素钠溶液、Hanks溶液、50%PEG、25%PEG、37.5%PEG、0.2%次甲基蓝生理盐水染液四、方法与步骤1.配2%鸡红细胞悬液:肝素抗凝鸡血1000rpm离心5min,去血浆;按红细胞压积用Hanks液配成2%悬液。
单克隆抗体制备之细胞融合细胞融合:⼴义上的细胞融合指两个或者多个细胞的原⽣质体融合形成⼀个杂种细胞的过程。
⼴义上的细胞融合可以是同种属的细胞发⽣,也可以是不同种属的细胞发⽣。
在单抗制备过程中的细胞融合专指瘤细胞与脾细胞的融合。
在介绍融合技术之前,有必要先了解⼀下⾻髓瘤细胞。
⾻髓瘤细胞的选择在前⾯概述部份就讲到,为了便于筛选出成功融合的杂交瘤细胞,需要选择DNA合成主要途径缺陷型的⾻髓瘤细胞(HGPRT-或TK-)与脾细胞融合,通常是HGPRT-的⾻髓瘤细胞。
要得到这种细胞需要做两件事,第⼀是得到⾻髓瘤细胞,第⼆步是诱导和筛选出HGPRT-的⾻髓瘤细胞。
⼀般可以通过向⼩⿏腹腔内注射碳氢化合物、⽯蜡或者油类物质⽽诱发其产⽣⾻髓瘤细胞,通常的做法是注射降植烷(Pristane,⼜称姥鲛烷)。
诱导出⾻髓瘤后,在⽆菌条件下取出此⾻髓瘤,⽤完全培养基培养⼀段时间后,再⽤8-氮杂鸟嘌呤或者5-溴脱氧尿嘧啶核苷酸进⾏筛选即可得到HGPRT-的⾻髓瘤细胞。
对于第⼀步的诱导过程,⽬前只有BALB/C和N2B品系的⼩⿏才具有⾼度的敏感性。
⽬前最常⽤的⾻髓瘤是来⾃BALB/C⼩⿏的,为了减⼩远亲属种系之间的排斥反应,单抗制备中⽤来免疫的动物品系应该与⾻髓瘤来源的品系相同。
1972年,Potter第⼀次从Balb/C⼩⿏中分离⾻髓瘤细胞株MOPC,第⼀次⽤于脾细胞融合的⾻髓瘤细胞株为P3-X63-Ag8,简称X63或P3,它由Milstain 实验室将P3K(源⾃MOPC)细胞系经8-Aza筛选得到。
X63⾃⾝不能分泌完整的免疫球蛋⽩,但是可以合成并分泌γ1重链和κ轻链,因此如果⽤X63⾻髓瘤细胞与脾脏融合,得到的融合细胞除分泌脾细胞的抗体外,还可以分泌X63的γ1链和κ链。
后来⼜从P3K细胞系选育出另⼀变种P3-NS1-Ag4-1,简称NS-1,它不能合成γ1重链,能合成κ轻链,但是合成之后在细胞内降解⽽不能被分泌出来。