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Th17细胞相关细胞因子与急性移植物抗宿主病关系的探讨凌艳英;周铭;王阿慧;江雪杰;李庆山【摘要】Objective To explore the relationship of cytokones associated with Th17 cells in serum and acute graft-versus-host disease from patients with hematologic diseases who were undergone al-logeneic hematopoietic stem cell transplantation. Methods In this study,78 patients with haemato-logical diseases were undergone allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Th17 cell-associ-ated cytokines in serum were examined by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)from pa-tients with acute graft-versus-host disease(aGVHD)(n=12),without aGVHD(n=14),and patients with aGVHD who were effectively treated(n=10). Healthy volunteers (n=10) were severed as control. Results ①The serum cytokine levels(pg/mL)of patients with aGVHD(n=12)were signifi-cantly higher compared with healthy control group(n=10)and non-aGVHDgroup(n=14)(P<0. 05). On contrary,The TGF-β1 level(pg/mL)(1 156. 61 ± 458. 04) was significantly lower than the healthy control group(2 978. 34 ± 1 647. 71)and non-aGVHD group(2 541. 62 ± 1 805. 16)(P<0. 05). IL-22:non-aGVHD group was significantly higher than healthy controlgroup(22. 14±2. 49, 19. 18±1. 24)(P<0. 05);IL-21,IL-22,IL-23 were higher than healthy control group(P<0. 05), there was no statistical difference about other cytokines between healthy control group and non-aGVHD group(P>0. 05).②After treatment,the cytokine levels above in 10 cases of effective treatment decreased to considerable extent ,and there wassignificant difference between before and after effective treatment(P <0. 05),but the IL-22 showed no significant difference between before and after effective treatment (P>0. 05). Conclusion Th17 cell-associated cytokines(IL-17, IL-23,IL-21,IFN-γ,TGF-β1)in serum are assocoated with pathogenesis,development and treat-ment efficacy of aGVHD,whereas acute GVHD is no relationship with IL-22 cencentration in serum.%目的：探讨异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病后，血清中Th17细胞相关的细胞因子与急性移植物抗宿主病的关系。
EBV-CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EB病毒感染的分析缪晓娟;李业成;易海;苏毅;杨慧;孙浩平;付利;范方毅;王译;何光翠;赖思含;侯严堂【摘要】目的：研究EB病毒特异性细胞毒 T 淋巴细胞（EBV‐CTL）治疗异基因造血干细胞移植后难治性 EBV感染的疗效。
方法报道4例EBV‐CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EBV感染病例并结合文献分析。
结果3例取得了较好疗效，分别于治疗后1、2、3个月转阴，分别随访8、12、6个月未复发，仅有1例在EBV‐DNA转阴后第6个月复发，再次EBV‐CTL治疗后，迅速进展为移植后淋巴细胞增殖性疾病（PTLD），治疗无效死亡。
结论EBV‐CTL是治疗难治性EBV感染的一种有效手段，但仍有部分病例治疗无效，值得进一步探讨和研究。
【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2015(000)029【总页数】3页(P4051-4053)【关键词】疱疹病毒4型 ,人;特异性细胞毒T淋巴细胞;异基因造血干细胞移植【作者】缪晓娟;李业成;易海;苏毅;杨慧;孙浩平;付利;范方毅;王译;何光翠;赖思含;侯严堂【作者单位】成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083【正文语种】中文【中图分类】R457.7EB病毒(EBV)感染是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后常见并发症，通常采用减停免疫抑制剂、抗病毒药物和CD20单克隆抗体(利妥昔单抗)治疗，部分病例病情可以得到有效控制，但仍有部分病例病情进展，成为难治性EBV感染，甚至可发展成移植后淋巴细胞增殖性疾病(post-transplantlymphoproliferativedisease，PTLD)[1]。
造血干细胞研究进展摘要：造血干细胞是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,在人体造血系统中起着至关重要的作用。
本文介绍了造血干细胞的生物学特征、表面标志以血干细胞在干细胞移植、细胞治疗和基因治疗等方面的临床应用和前景。
造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)又称多能干细胞,是存在于造血组织中的一群原始造血细胞。
也可以说它是一切血细胞的原始细胞,即由造血干细胞定向分化、增殖为不同的血细胞系,并进一步生成血细胞。
人类造血干细胞首先出现于胚龄第2～3周的卵黄囊,在胚胎早期(第2～3月)迁至肝、脾,第5个月又从肝、脾迁至骨髓。
在胚胎末期一直到出生后,骨髓成为造血干细胞的主要来源。
造血干细胞是干细胞中研究最早、最多、最深入的一种,近年来在造血干细胞的多个研究领域均取得了重要进展。
1 造血干细胞的发现造血干细胞的发现源于第二次世界大战后放射医学的研究，Jacobson 等[1-3]发现小鼠与豚鼠的脾脏与骨髓中存在有一类细胞，即造血干细胞，能够重建经致死剂量射线照射过的小鼠与豚鼠的造血系统。
随着单克隆抗体技术与流式细胞分选技术的出现，人们利用多种针对细胞表面抗原的抗体组合，分离到相对较纯的小鼠与人骨髓与胚胎组织中的造血干细胞与造血前体细胞群(hematopoietic progenitorcell)。
其中，美国斯坦福大学Weissman 实验室在分离与鉴定小鼠与人的造干细胞方面所做的工作最为杰出[4-9]。
长期以来，对于造血干细胞是由多种不同的、可以分化成不同种类成熟细胞所组成，还是由一类可以分化成所有造血系统成熟细胞所组成，人们存有争论。
直到1996 年，Osawa 等[10]通过单个细胞移植的方法，验证了一个造血干细胞就可以重建机体整个的造血系统，才结束了对于这一问题的争论。
2 对小鼠造血干细胞的早期发生的研究造血干细胞的发生到目前为止，人们对于小鼠造血干细胞的早期发生研究得相对较多。
慢性粒细胞白血病患者胸腺输出功能与bcr abl mRNA水平的关系作者：耿素霞作者单位：广东省人民医院血液科，广州510080【摘要】本研究了解慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）患者体内T细胞受体重排删除环（T cell receptor rearrangement excision circles，TREC）的含量与bcr abl mRNA水平的关系，进而明确CML患者的胸腺近期输出功能测定对疾病预后判断的意义。
实时定量PCR检测15例CML CP患者外周血TREC含量及bcr abl融合基因转录本的水平，并追踪检测6例患者bcr abl水平的变化。
结果发现：在CML初发时患者外周血TREC含量与bcr abl融合基因水平无明显的相关性；随访2年后，TREC含量高的患者bcr abl水平下降幅度更大, 而在接受造血干细胞移植的2例患者中，移植前TREC含量相对较高者，移植1年后连续3次均检测不到bcr abl，另1例则检测到低水平的bcr abl。
结论：CML患者胸腺输出功能较高者，可能对机体抵抗残留CML细胞有一定的帮助。
【关键词】慢性粒细胞白血病胸腺输出功能bcr abl融合基因TREC Relationship Between Thymus Output Function in CML Patients and Their bcr abl mRNA Levels GENG Su Xia, DU Xin, WENG Jian Yu, CHEN Shao Hua1, Y ANG Li Jian1, LI Yang Qiu1 Department of Hemotology, Guangdong Provincial People Hospital, Guangzhou 510080, China；1Institute of Hematology, Medical College, Jinan University，Guangzhou 510632, ChinaAbstract The study was purposed to analyze the relationship between the content of T cell receptor excision DNA circles (TREC) and bcr abl mRNA levels in CML patients and to evaluate the prognostic significance of recent thymic output function detection in patients with chronic myelogenous leukemia (CML). Quantitative detection of TREC and bcr abl fusion gene transcripts in peripheral blood from 15 CML patients were preformed by real time PCR. The change of bcr abl levels in 6 patients was followed up for two years. The results showed that there was no significant correlation between TREC and bcr abl mRNA levels in peripheral blood from CML patients for the first attack. Patients who had higher TREC at diagnosis had a larger reduction of bcr abl after 2 years of follow up. While out of 2 patients who underwent haemopoietic stem cell transplantation(HSCT), one patient with higher level of TREC before transplantation was confirmed to express undetectable level of TREC by three consecutive detections after transplartation, other one patient was identified to express low level of bcr abl. It is concluded that high thymic output function in CML patients can be beneficial for killing the residual CML cells.Key words chronic myelogenous leukemia; thymus output function; bcr abl fusion gene; TRECJ Exp Hematol 2007; 15(1):138-141肿瘤的发生与机体免疫功能障碍有很大关系，患病机体的免疫状况可影响肿瘤的进展、演化以及预后。
胸腺老化和再生的研究进展李江;尹帆;李玉谷【摘要】The thymus progressively involutes with age, particularly from puberty when sex steroids increase in production, with the gradual loss of newly produced naive T cells resulting in a restricted T cell receptor repertoire, skewed towards memory cells. This translates to a striking reduction in immune responsiveness and an obvious delay in immune reconstitution. Regeneration of the thymus is fundamental to developing new strategies for the clinical treatment of many diseases of immuno-logical origin. Currently the use of sex steroid inhibitors, GH, KGF and IL-7 represent the first candidates in thymus-based therapies, as well as the function of Ghrelin for thymic regeneration is coming to attention.%随着年龄的增长,胸腺逐渐萎缩退化,尤其从青春期开始,当性激素产生增加时,这种变化更为明显,从而导致新生的处女型T细胞逐渐减少,T细胞受体库的多样性受到限制,T细胞的成分偏向于以记忆性细胞为主,临床上表现为免疫应答的显著减弱和免疫重建的明显延迟.对于多种免疫源性疾病的临床治疗,胸腺再生是正在开发的新策略的基础,其中使用性激素抑制剂、生长激素(GH)、角质细胞生长因子(KGF)和白细胞介素-7(IL-7),是当前胸腺治疗的首选.此外,Ghrelin的胸腺再生作用,亦受到关注.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)007【总页数】7页(P43-49)【关键词】胸腺;老化;再生;性激素;角质细胞生长因子;白细胞介素-7【作者】李江;尹帆;李玉谷【作者单位】华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642【正文语种】中文【中图分类】R392.11随着年龄的增长,胸腺逐渐萎缩退化和功能减退,表现为各种胸腺细胞和上皮细胞的丧失,新生的处女型T细胞的输出量逐渐减少,尤其从青春期开始,当性激素产生增加时这种变化最为显著,这是免疫系统年龄性变化的关键事件。
急性髓性白血病患者异基因造血干细胞移植后早期T细胞免疫重建的研究（作者：_________ 单位：___________ 邮编：___________ ）作者：吴秀丽李扬秋朱康儿，杨力建陈少华，卢育洪陈洁，刘启发【摘要】目的：监测急性髓性白血病（AML）患者接受异基因造血干细胞移植⑻Io HSCT后外周血中的T细胞受体重排删除环（TRECs）水平，了解移植后早期的T细胞免疫重建情况。
方法：AML患者15例分别在allo，HSCT前以及allo HSCT后每隔2周收集外周血，采用实时定量PCR法检测外周血单个核细胞（PBMNCs中的TRECs水平; 7 例年龄相近的正常人外周血样本作为对照。
流式检测CD45RA B胞亚群和CD45RO+胞亚群的阳性率。
结果：allo HSCTfi移植前的TRECs 平均拷贝数为（1.42 士 1.51）拷贝/1000 PBMNCs,明显低于正常组的（3.03 士0.45）拷贝/1000 PBMNCs水平;移植后第12 周的TRECs平均拷贝数为（1.67 士 1.93）拷贝/1000 PBMNCs与正常相比仍然较低。
移植后8周内以CD45RO+/CD4+胞的扩增为主，而外周血TRECs水平在allo HSCT后4周左右出现短暂地升高趋势，随后又下降，至allo HSCT 8周后才开始稳步上升。
有急性移植物抗宿主病（aGVHD）病史的移植患者的外周血TREC水平显著降低，明显低于无aGVH病史移植患者的外周血TRECs水平。
3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs水平降至基线水平或检测不到。
结论：不同个体T细胞免疫重建时间存在差异；AML患者在allo | HSCT后早期（90 d内）的胸腺输出功能仍处于恢复阶段，移植后4周内的免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主；夕卜周血TRECs水平可能与AML患者allo HSCT后病情的发展、转归有关。
【关键词】造血干细胞移植，异基因；T细胞受体重排删除环；免疫重建异基因造血干细胞移植（alloge neic hematopoietic stem cell transplantation, allo I HSCT是目前治疗急性髓性白血病（acute myelogenous leukemia, AML等恶性血液病的有效方法之一，已广泛应用于临床。
造血干细胞移植后造血功能的全面重建主要包括两个方面，即造血细胞数量和功能的恢复，后者主要是指免疫功能重建。
临床上往往将中性粒细胞和血小板的恢复作为造血恢复的指标，容易忽视免疫功能的恢复。
免疫功能重建现在被认为是评价移植疗效的重要因素之一，allo HSCT后重建T细胞特异性免疫功能，需要来源于胸腺依赖途径所产生的初始T细胞，即经胸腺发育而输出的na ve细胞，而目前能够作为na鹘ve T细胞的标志的是T细胞受体删除DNA环（T cell receptor excision DNAcircles, TRECs）［1-3］。
为了解AML患者接受allo HSCT后早期的T细胞免疫重建情况，我们对其胸腺近期输出功能（外周血TRECs水平）进行了监测，并对外周血CD45RA+/CD4+CD45RO+/CD4及CD45RA+/CD细胞亚群进行了流式细胞术分析。
1对象和方法1.1对象接受allo • HSCT台疗的AML患者15（男13,女2）例，年龄18〜56（中位年龄35.7）岁，其中M25例，M32例，M45例，M5 3例；供者为HLA位点完全相合同胞或无关供者；采用联合氟达拉宾的减量清髓预处理方案；移植后受者全部植活（中性粒细胞连续3d > 0.5 X 109/L为粒细胞植活，血小板连续7 d >20X 109/L为血小板植活）,所有受者移植后均为完全供受者嵌合体；所有患者allo HSCT后临床上未采用改变细胞亚群数量的特殊治疗方案，并均告知同意及医院伦理委员会同意。
分别于移植前、移植后每间隔2周收集患者外周血样本；同时收集7例与移植组年龄相近的正常人（均为男性）外周血样本作为对照，年龄17〜48（中位年龄31.6）岁。
1.2方法1.2.1流式细胞术检测CD45分子表达和DNA提取按常规方法收集各样本的外周血单个核细胞（PBMNCs）,计数后一部分细胞用于免疫荧光标记（鼠抗人CD4+ CD8+、CD45RA CD45ROmAb, Fermentas）, 利用流式细胞术进行CD45RA+/CD4+CD45RO+/CD4及CD45RA+/CD8+ 细胞亚群阳性率的检测；剩余细胞提取DNA（QIAprep Spin Miniprep Kit, QIAge n）, 并用紫外分光光度计检测DNA勺浓度及纯度。
1.2.2引物设计从T细胞受体（TCR）5基因组序列（ACCESSION AE000661冲于5 Rec基因片段的下游设计一下游引物（T1）和在® J a的上游设计一上游引物（T2）[2],引物的方向恰好与一般的PCR引物相反（所检测的是3 Rec和® J a的两个基因片段删除后重组形成的环形DNA,即TRECs）,并在该扩增片段中间设一荧光素标记探针（T3）; 选择RAG2基因作为细胞定量对照：分别在RAG2基因组序列（ACCESSION M9463中设计一对引物（R1和R2）及一荧光素标记探针（R3）。
弓I物和探针由德国柏林TIB生物公司合成。
1.2.3 RAG2 TREC标准品的构建利用两对引物分别扩增所需的RAG2和TREC啲基因片段，经序列分析证实后分别将其连接到TA载体上（TOPOTA Cloning Kit, Invitrogen）, 转入感受态细菌扩增，抽提、纯化质粒后再经酶切、PCR和测序证实目的基因片段的准确性；用凝胶电泳和紫外分光光度计检测质粒的浓度及纯度，根据质粒分子量换算为拷贝数，稀释标准质粒，将其调整为梯度浓度：107、106、105、104、103、102 和10 拷贝/2 卩L。
1.2.4 实时定量PCR每一标本分别检测2次RAG告口2次TRECs, 总反应体积为25卩L,其中含标准品2卩L或约100 ng基因组DNA, 0.5 卩moL/L引物，0.2 mmoL/LdNTP, 1.5 UAmpli TaqGold（ABI, USA）, 0.1 □ moL/L 的6 FAMTAMR探针和PCF缓冲液（含4mmoL/LMgCI2）。
在95C 10 min变性后，共进行45个循环扩增，每一循环包括95C 30 s 和64 C 1 min。
反应在MJ Optic on Mo nitor（BIO RAD）中进行。
反应分别设标准组（7个浓度）、阳性对照组（两个平行反应）、阴性对照（两个平行反应）及样品组。
1.3统计学分析根据所检测样本中RAG2的实测数值来确定所检测样本中所含的细胞数(每个细胞含2个RAG2拷贝),然后计算每1000个PBMNC中所含的TRECS拷贝数，计算公式为：n=2 x 1000X [TRECs(1)+TRECs(2)]/[RAG2(1)+RAG2(2)]; 使用SPSS 13.0 软件包进行统计学处理，采用非参数检验的Mann ■ Whitney U检验进行组间比较；各组样本中的平均TRECs水平以x士s表示。
2结果2.1 allo ■ HSCT后CD45RA细胞亚群及CD45RO细胞亚群阳性率的变化allo HSCT后各时间组的CD45RA细胞亚群和CD45RO细胞亚群的平均阳性率显示出一定的变化趋势(图1)。
CD45RO+/CD4+CD45RA+/CD8细胞亚群的阳性率在移植后第4周时均明显较低，随后逐步上升，8〜12周又出现下降趋势；CD45RA+/CD4鈿胞亚群的阳性率在移植后12周内均维持在较低水平；移植后8周内以CD45RO+/CD 4+胞的扩增为主。
图1 allo HSCT后90 d内CD45RA细胞亚群及CD45RO细胞亚群阳性率变化2.2实时定量PCR的敏感性、重复性和特异性最大敏感性可达到10个拷贝/卩L,且1X 107〜1X 102拷贝/卩L的重复性良好；模板在10个拷贝数以下时结果不稳定，故将检出限为10拷贝数以上；经电泳可见到符合目的片段大小的条带(RAG2为245 bp, TRECs为390 bp)。
标准曲线的斜率(slope)均为-0.28,系列稀释的标准品浓度与循环阈值具有较好的相关关系(r=0.996, 0.998)。
无模板对照未见任何扩增。
2.3 allo ■ HSCT后外周血TRECs水平的变化PBMNC中的TRECs 水平有着较大的个体差异。
正常对照组外周血中的TREC平均拷贝数为（3.03 士0.45 拷贝/1000 PBMNCs）; allo HSCT组移植前的TRECs 平均拷贝数为（1.42 士 1.51拷贝/1000 PBMNCs）,明显低于正常组（Mann Whitney U检验，P0.05）。
移植后TRECs水平的变化也有较大个体差异，移植后各时间组的平均TRECs水平存在着一定的变化趋势，其中7例allo HSCT后90 d内未发生GVH啲患者的TRECs 水平变化见图2。
在allo HSCT后4周左右，外周血TRECs水平出现短暂的升高趋势，但维持时间不长，随后又复下降；在allo HSCT后第8周时，夕卜周血TRECs水平降低最为明显，接近或达到基线水平；之后TRECs水平开始缓慢平稳上升，移植后第12周的TRECs平均拷贝数为（1.67 士1.93拷贝/1000 PBMNCs）,虽然稍高于移植前水平，且有1例患者的TREC水平已经达到甚至超过正常人平均水平，但总体与正常对照组相比仍然较低（Mann. Whitney U检验,P0.05）。
allo I HSCT后有急性移植物抗宿主病（acute graft vs host disease, aGVHD）病史的移植患者（3例发生肠道aGVHD, 2例发生皮肤aGVHD 外周血TRECs水平显著降低（0.07 士0.14拷贝/1000 PBMNCs）,明显低于同时期无急性GVH病史的移植患者外周血TRECs 水平（0.82 士1.12 拷贝/1000 PBMNCs）,甚至趋于基线水平（Mann Whitney U检验，P0.05）。
此外，还观察到3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs 水平降至基线水平或检测不到。
3例AML（M5的患者移植前外周血TRECs水平分别为1.03、4.03、3.12 拷贝/1000 PBMNCs,移植后2个月时其外周血TRECs水平均降至基线水平或检测不到，随后临床发现AML复发。
图2 allo HSCT后90 d内的外周血TRECs水平变化3讨论TRECs是T细胞受体a基因重排形成过程中需删除TCRS基因而产生的环形DNA,它的含量代表了TCR基因初始重排形成有功能TCR 基因时的na ve T细胞的含量。
