Sebia电泳仪SOP文件

检验方法名称
流动液体毛细管高压液相电泳 三. 方法学原理
CAPILLARYS 2系统运用毛细管中液相电泳的原理，带电分子在具有特殊 PH 值
的碱性缓冲液中通过其电泳迁移率而被分离开，这个分离也要依赖于电解质的 PH 和
电渗流。

CAPILLARYS 2系统可同时进行8个标本的血红蛋白量化分析，标本的溶血 稀释和注入通过在毛细管阳极末端吸入完成，接着在咼电压下蛋白质进行分离，并在 毛细管的阴极端于415nm 吸光率下直接检测血红蛋白。

四. 方法学溯源
自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳(moving boundary eectrophoresis )， 而后，这
种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳(zone elecrrophoresis )所克服， CAPILLARYS 系统已经发展到将该项技术完全自动化，并具有快速分离和良好的分辩 性。

目前该方法已被大多数人认为是介于传统的区带电泳和液相色谱之间的技术方法。

五. 仪器
5.1. 型号：SEBIA CAPILLARYS (PN1220或 PN1222)
5.2. 分析和计算参数：
5.2.1. 处理量：80-100个样本/小时
5.2.2. 所需样本量：100ul
5.2.3. 检验时间：20分钟
5.2.4. 重复性：有良好的重复性
5.2.5. 电泳参数：电压3.5 — 9000V
电流 3.5 — 200mA 功率0— 90W
六. 准备
6.1. 蒸馏水或去离子水
在SEBIA CAPILLARYS 的全自动系统中进行毛细管电泳时冲洗毛细管用。

建议 在使用前先
用0.45 pm 的过滤器将蒸馏水或去离子水过滤一次。

为了防止微生物 的繁殖，请每天更
换蒸馏水或去离子水。

如需要长期保存，可加入 3.5 pdl 的
ProCl in300。

注意：当充填水罐时，建议先用大量的蒸馏水或去离子水冲洗罐。

6.2. 缓冲液(含碱性缓冲液PH9.4)
若缓冲液是储藏在2至8C,建议在使用前将试剂放置于室温下，一旦缓冲液瓶 打开并安
置在CAPILLARYS 系统上时，缓冲液可保持稳定状态最多 2个月。

6.3. 浓缩的冲洗液必须用蒸馏水或去离子水稀释成 700ml 。

在做血红蛋白电泳之前
蛋白毛细管电泳(SEBIA CAPILLARYS 2) 血红
和之后冲洗毛细管。

64 分别将一个过滤器转动固定到缓冲液、冲洗液、蒸馏水或去离子水瓶的管子末端的连接器
上，用蒸馏水或去离子水冲洗连接器和管子。

使用过的过滤器必须用清水冲洗过后才能丢弃。

七. 样本的采集和保存
7.1.使用抗凝血的新鲜标本来进行分析，采血应按照临床实验检测要求进行。

72 将红细胞在2〜8C下静置沉淀数小时或将血标本离心5000转/分，5分钟。

7.3.小心尽可能地弃去血浆。

不要使用覆盖在红细胞上厚度超过3mn血浆的标本，
若试管中的血浆厚度超过3mn将会影响到分析结果。

7.4.注意：
探标本置于冰箱内（2〜8C）可保存一周。

若需要长时间保存，则依照以下程序在米集8小时内清洗红细胞，并将标本冷冻在-80 C环境中，可保持稳定最长3个月时间。

具体程序：抗凝血离心5000转/分，5分钟，弃去血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞两次（每次洗涤后均要离心处理），冰冻前去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。

探血红蛋白（Hb在2〜8C下可发生降解反应。

当在2〜8C下保存超过7天，在电泳图谱将会出现一个比HbA更阳极端的被称之为HbA3的额外片段，在靠近HbS带附近会出现一个微弱的片段，并且如果出现HbC则在HbA2更阳极端可出现不会干扰到A2的一个
片段。

当保存超过10天，可在红细胞中观察到聚集的粘状物，在分析前必须弃去这
些粘状物。

八. 操作步骤
8.1.开机，启动CAPILLARY仪器和电脑。

8.2.启动“ PHORESYS软件，输入用户名（ADM和密码（SEBIA）后，按确定（电脑自动向其
加载和交换信息，并运行自检，初始化程序。

）联机成功，进入待工作状态，显示
“ READ”。

可开始电泳操作。

8.3.在仪器提示，按其要求填写试剂有效期、代码（冲洗液的有关信息在70 ml浓
缩试剂瓶标签上可以查到），并调整图象中液位高度。

CAPILLARY系统具有试剂自动监控功能，当需要更换某种试剂时，系统将有信息提示。

更换试剂时要注意罐和接口的色码相符。

请仔细阅读CAPILLARY仪器操作手册。

8.4.选择好“ HEMOGLOBIN（E）分析程序，然后将CAPILLARYS HEMOGLOBIN（E）缓冲液瓶放置
在仪器上。

8.5.每天更换完试剂，在开始样品检测前必须使用NO.O标本架来进行质控血标本的分析。

8.6.按照样本架上1-8编号，按顺序将标本从301开始编号，并且从NO.1样本架的1号位置放入
编号301号标本，标本条形码向外。

8.7.在每个标本架上放一排新的绿色样品稀释杯，注意样品稀释杯有凸起一边向外。

若忘记放稀释杯，系统将会有信
息提示。

8.8.将准备好的标木架从仪器中部的敞口处滑入CAP I LLARY系统中，可连续送入
13个标本架。

89 设置仪器开始运转。

8.10.自动化步骤的描述：
8.10.1.条形码阅读器对每个标本管及标本架进行阅读。

8.10.2.标本在溶血液中稀释，每完成一个标本的溶血稀释，都会对稀释针进行清洗。

8.10.3.冲洗毛细管。

8.10.4.稀释好的标本被注入到毛细管中。

8.10.5.在恒定的电压下电泳8分钟，帕尔贴软件控制温度。

8.10.6.血红蛋白在415mm吸光率下直接检测，同时在系统屏幕上显示出电泳剖象。

注：上述描述的这些自动步骤适用于第一次传入的标本架。

从分析程序开始大约20分钟后可出现电泳图谱。

接下来分析的标本架，在上一个标本架进行分析的同时都会进行头两个步骤（条形码阅读和标本稀释）。

九. 结果分析
9.1.在程序分析的最后，每个血红蛋白片段的相对值自动显示出来，并对剖象进行分析。

可自动识别血红蛋白A （HbA片段，同时在回顾窗口的中间对其进行调整。

9.2.可直观的在视觉上对电泳图谱的异常图像进行评估。

9.3.CAPILLARY系统可忽略降解产物而计算出每个血红蛋白片段的浓度。

9.4.图谱可自动校正HbA片段以便分析解释：
9.4.1.当缺乏HbA（黄色警示），将通过之前相同毛细管电泳获得的电泳剖象中HbA的
位置对其进行修正。

9.4.2.当无法进行调整进，将出现红色的警示。

9.4.3.当血标本中出现血红蛋白C时可能会导致血红蛋白A2低于参考值。

9.4.5.当每个分析循环结束，操作者必须启动CAPILLARY系统的“待命”或“关
闭”程序，以便保存当前状态的毛细管电泳结果。

十. 关机
10.1.电泳全部结束，在状态窗口显示“ READY下，执行关机程序“ SHUTDOWN
INSTRUMENT，仪器自行冲洗，排气，复位等。

10.2.约15分钟屏幕显示“ Offline ”，此时可关闭毛细管电泳仪电源，然后关闭电脑。

10.3.打开电泳仪左盖，取出全部试剂架。

10.4.关闭仪器总电源开关，按每日保养要求对仪器进行保养。

10.5.用仪器防尘罩盖好仪器。

10.6.如果仪器如较长期（超过一周）停用，请用蒸馏水代替试剂，使用特别关机程序。

Capillarys —Special cycles —Shutdown with rinsing of the hydraulics with H2O 10.7.仪器如须更址，运输，一定要进行特殊打包运输关机程序处理。

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Capillarys f Special cycles f shutdown and preparation for shipment
10.8.如果运用特别关机或打包运输关机程序后再次开机，一定要在开机输入密码后选择
First-wash only然后“确定”。

进入待机状态后，激活毛细管，然后可正常进行工
作。

十一. 参考范围
HbA > 96.8 %
HbF: v 0.5 %( *)
HbA2 2.2 〜3.2 %之间
十二. 临床意义
使用CAPILLARYSHEMOGLOBIN试剂可鉴别血红蛋白病和地中海贫血等遗传性疾病。

十三.电泳阳性结果处理：
产妇夫妻双方同型地贫患者须通知其作基因诊断。