巨噬细胞吞噬功能检测
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巨噬细胞吞噬功能测定
【实验原理】
巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时,会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色,在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞噬百分率和吞噬指数,可判断吞噬细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】
1.动物体重20-25g的健康小鼠。
2. 1%鸡红细胞(CRBC)悬液自鸡液静脉或心脏采血,放Alsever液中保存(鸡血与Alsever液1:5混合),置4℃可有效保存1个月,临用前用生理盐水将CRBC洗3次,按红细胞压积配成1%CRBC悬液。
3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g,混匀,置100℃水浴煮沸消毒。
4.其他试剂瑞氏(Wright)染液、生理盐水等。
5.器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。
【步骤和方法】
1.试验前3天,于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。
2.于试验当天,小鼠腹腔注入1%CRBC悬液
0.5ml,并轻轻揉腹。
3.30min后小鼠颈椎脱臼处死,取腹腔液涂片,自然干燥后瑞氏染色,用油镜观察。
【结果判定】
镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
呈油镜下随机观察100个巨噬细胞,计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。
吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%
吞噬指数=吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100
【注意事项】
1.涂片的薄厚要适当,否则影响计数。
2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
3.如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水。
4.剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。
5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间。
xx液配方:
葡萄糖
2.05xx柠檬酸钠
0.8xx柠檬酸
0.055xx氯化钠
0.42克加蒸馏水至100毫升,加热溶解后将pH值调到
6.1,经过69千帕,15分钟的高压灭菌,放置在4℃的环境内,保存备用。