蛋白质含量测定表

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蛋白质含量测定
1.考马斯亮兰微量法:
(1) 取10ml浓度为0.1mg/ml的标准蛋白。

(2) 取17支试管,分别编号后按表上剂量依次加入标准蛋白(或未知蛋白)、去离子水和考马斯亮兰染料。

每支试管加完后,立即在漩涡混合器上混合。

(3) 加完染料5-20min内,用UNIC7202B可见分光光度计,塑料常量可见比色杯,在595nm处测量吸光度A595值。

空白对照为1号试管。

(4) 数据处理:标准蛋白浓度(mg/ml)为横坐标,A595为纵坐标,进行直线拟合,得到标准曲线。

根据测得的未知样品的A595,查表即可求得未知样品的蛋白质含量。

考马斯亮兰微量法实验数据表
2.紫外吸收法:
(1) 取15ml浓度为1.0mg/ml的标准蛋白。

(2) 取14支试管,分别编号后按表上剂量依次加入标准蛋白(或未知蛋白)、去离子水, 每支试管加完后,立即在漩涡混合器上混合。

(3) 使用SPECORD200紫外可见分光光度计,微量塑料紫外比色皿,在280nm处测量吸光度A280。

空白对照为1号试管。

(4) 用标准蛋白浓度(mg/ml)为横坐标,用A280为纵坐标,进行直线拟合,得到标准曲线。

根据测得的未知样品的A280,查表即可求得未知样品的蛋白质含量。

紫外吸收法实验数据表
做出标准曲线得到未知蛋白浓度,计算出该蛋白质的百分吸光度值
A1%1cm= (280nm)
注意事项:
1.标准曲线上每个实验点要做两个平行实验,最后取平均值作图,若差别太大.需要重做。

2.配的标准蛋白浓度为1.0mg/ml.取1.0ml浓度为1.0mg/ml的标准蛋白,加入9.0ml去离子水。

配成考马斯亮蓝法中的标准蛋白(0.1mg/ml)。

3.每组取标准蛋白-15ml备用。

取考马斯亮蓝溶液60ml备用。

未知蛋白取6ml备用。

4.比较两种方法测定的未知蛋白数值,並进行讨论。