诸氏鲻虾虎鱼致病性创伤弧菌的分离与鉴定
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１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料
起多 种鱼 类 、 虾、 贝类 等水 生 动物 的暴 发 性 疾 病 ， 是
海水 水产 养殖 动 物 中危 害 最 大 的一 类 细菌 性 病 原 。 其 中大部 分 为人兽 共患 病病 原 ， 尤 以霍 乱 弧 菌 、 副溶 血性 弧 菌 （ Ｖ ｉ ｂ ｒ ｉ ｏ ｐ ａ ｒ ａ ｈ ａ ｅ ｍｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ｕ ｓ ） 、 创 伤 弧 菌
ｌ ＿ １ ． ２ 主要试剂和仪器
Ｔ Ｃ Ｂ Ｓ 、 ＴＳ Ａ 培 养基 ， 北
京 陆 桥技术 有 限 责 任公 司产 品 ， 用 于 弧菌 的分 离 培
对 许 多毒 物敏 感 性 强 的特 点Ｌ ２ ］ ， 作 为一 种 海 洋 水 生
实验 动物 ， 已开 展 海 洋 污 染 物 的 相关 毒 性评 价【 ３ ］ ，
关 键词 ： 诸 氏鲻 虾虎 鱼 ； 病原茵； 创伤 孤 茵 ； ＨＳ Ｐ ６ ０基 因
中图分类号 ： ￥ ９ ４ １ ． ４ ２ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ９ — ０ ０ ５ １ — ０ ４
弧菌 广泛 分 布 于 近海 及 河 口的海 洋 环 境 ， 能 引
（ 广 东 省 实 验 动 物 监 测 所 广 东 省 实 验 动 物 重 点 实验 室 ， 广东广州 ５ １ ０ ６ ６ ３ ）
摘 要 ： 从 患病 的诸 氏鲻虾 虎 鱼分 离病 原 ， 研 究 其致 病性 。通过 形 态学观 察 、 生理 生化特 性 、 ＨＳ Ｐ ６ ０序
列 扩增及 系统发 育树 分析等 方 法 系统鉴 定 ， 并进 行 了人 工感 染和毒 力基 因检 测 。结果 表 明 ， 从 患病 的诸 氏鲻 虾 虎鱼肝 脏 组织 分 离到 １株 革 兰 阴性 杆 菌 ， 编号 Ｐ ＹＭｃ １ 虾 虎 鱼的 病
的肝 脏组 织 中分 离 得 到 １ 株 优 势菌 ， 对 分 离 菌 株 的 生物 学性 状 、 ＨＳ Ｐ ６ ０基 因序列 系 统 发育 及 其 毒 力基
原茵， 毒 力基 因 ｈ ｅ ｍｏ 检 测 结 果 阳性 。 生化特 性 结果与 创伤 弧 菌类似 ， Ｐ Ｃ Ｒ扩 增获得 的 ４ ８ ６ ｂ ｐ的 ＨＳ Ｐ ６ ０基
因序 列与创 伤弧 茵 （ 登 录号 Ａ Ｆ ２ ３ ０ ９ ５ ５ ． １ ） 同源 性达 ９ ４ ； 系统 进 化 树 分析 表 明 ， Ｐ ＹＭｃ １ ４ — ２与创 伤 弧 茵 （ 登 录号 ＡＦ ２ ３ ０ ９ ５ ５ ． １ ） 聚 为一簇 ， 初 步鉴 定该 菌 为创 伤弧 菌。
１ ． １ ． １ 试验 用鱼 发 病诸 氏鲻 虾 虎 鱼 采 自番 禺 南 沙 。人 工感 染用 的试 验 鱼 ： 广 东 省 实 验 动 物 重 点 实
验 室 内繁殖 的子 ９代 封 闭 群 诸 氏鲻 虾 虎 鱼 （ ４月 龄
～
（ Ｖ ｉ ｂ ｒ ｉ ｏ ｖ ｕ ｌ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ｕ ｓ ） 最 为重 要＿ 】 ］ 。诸 氏 鲻 虾 虎 鱼
验动 物养 殖过 程 中关注 的焦 点 ， 鱼 类 实 验 动 物 病 害 在研 究 中可引 起大 量 的死亡 ， 因此 ， 开展 诸 氏鲻 虾 虎 鱼病 原 的研究 对其 质量 控制 尤为 重要 。
２ ０ １ ４年 ８月 ， 广 东省 实 验 动物 重 点 实 验 室对 诸 氏鲻 虾 虎鱼疾 病 情 况 进行 了调 查 ， 从 番 禺 南 沙 采样 的诸 氏鲻 虾 虎鱼 在 暂 养 过程 中 发生 病 害 ， 病 鱼 主要
ｈ： １ ０ ｈ （ 光照 ： 黑 暗） 。
虾 虎 鱼亚 目（ Ｇｏ ｂ ｉ ｏ ｉ ｄ ｅ ｉ ） ， 虾 虎 鱼科 （ Ｇ ｏ ｂ ｉ ｉ ｄ ａ ｅ ） ， 鲻 虾 虎鱼 属 （ Ｍｕ ｇ ｉ ｌ ｏ ｇ ｏ ｂ ｉ ｕ ｓ ） ， 为暖 水 性底 层 小 型 鱼类 ， 栖 息于河 口 、 咸淡 水水 域 中 ， 具有 体 形小 、 繁 殖 周期 短 、
（ Ｍｕ ｇ ｉ ｌ ｏ ｇ ｏ ｂ ｉ ｕ ｓ ｃ ｈ ｕ ｌ ａ ｅ ）属 于 鲈 形 目 （ Ｐ ｅ ｒ ｃ ｉ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｓ ） ，
５月龄 ） ， 半静 态 方式 养 殖 ， 体长 ２ ４ ｍｍ～３ ０ ｍｍ，
水 质条 件为 盐度 ２ ５ 士２ ， 温度 ２ ６℃ 土２℃， 光 周期 １ ４
但 对其 病 害的研 究 尚未见 报道 。疾 病 问题 一 直是 实
养 和纯化 ； 细 菌基 因组 Ｄ ＮＡ 提 取 试剂 盒 ， 天根 生 化
科 技 有 限公 司产 品 ； Ｔ ａ ｑ酶 、 Ｐ Ｃ Ｒ 反应 相关 试 剂 、 琼 脂糖 凝胶 纯化 等 相 关试 剂 ， 宝 生物 工 程 （ 大连） 有 限 公 司产 品 ； 其 余 试 剂 均 为 国产 分 析 纯 试 剂 ； Ｐ Ｃ Ｒ扩 增仪 （ Ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ ｒ ） ， Ｅ ｐ ｐ ｅ ｎ ｄ ｏ ｒ ｛ 公司产 品； 电泳 仪 、
凝胶 成像 分析 系 统 ， 美国 Ｂ Ｉ Ｏ — Ｒ ＡＤ公 司 产 品 ； ＡＴ Ｂ
系统 细菌 自动 鉴定 仪 ， 法国Ｂ ｉ ｏ ｍｅ ｒ ｉ ｅ ｕ ｘ公 司产 品 。
１ ． ２ 方 法
１ ． ２ ． １ 病原 茵 的分 离 、 纯 化与 生化 鉴 定
从 患 病 鱼
症状 为腹 部红 肿 ， 甚至 溃烂 ， 腹腔 积 液 。分别 从 病 鱼
动物 医学 进展 。 ２ ０ １ ５ ， ３ ６ （ ９ ） ： ５ １ — ５ ４
Ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
诸 氏鲻 虾虎 鱼 致病 性 创 伤 弧 菌 的分 离 与鉴 定
余 露军 ， 蔡 磊 ， 陈小曲， 叶 惠欣 ， 李建 军
