麦康凯液体培养基配制灭菌程序验证方案
一、目的
验证微生物检测室购买的由广东环凯微生物科技有限公司生产的麦康凯液体培养基的配制和灭菌方法，验证该配制灭菌程序适合于检测室麦康凯液体培养基的配制和灭菌，为培养基配制和灭菌提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。
二、适用范围
麦康凯液体培养基的配制和灭菌
三、职责
1.技术负责人
1.1为验证组长，负责组织编写并审核验证方案及报告。负责组织方案及报告的执行。
2.检测室负责人
2.1负责验证方案的起草和方案的具体实施；负责验证过程的记录。
3.检测员
3.1负责验证方案的具体实施；负责验证过程的记录。
4.经理
4.1负责批准方案及报告。
四、作业标准
1.概述
培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。一般采用商品脱水培养基，临用时按使用说明或相关规定进行称量、配制、调节pH、分装、灭菌等。应按照生产商提供参数进行培养基的灭菌。
培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或pH 的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌,培养基灭菌方法和条件，应通过无菌性试验和促生长能力、抑制能力试验进行验证。灭菌器中培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。本公司现在检验用培养基的灭菌方法均为湿热灭菌方法。
2.验证实施计划
年月至年月
3.培训
报告审批后，由验证小组组长对报告实施过程中涉及人员进行培训，以保证报告顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附件1：《培训情况确认表》。
4.仪器确认
4.1确认内容：确认过程所用仪器是否经校验，并有校验合格证且在校验有效期内。确认所用试剂及菌液是否在有效期内。
4.2标准要求：仪器应已校验，有校验合格证并在校验有效期内。
4.3仪器及试剂的确认记录见附件2：《仪器确认记录》及附件3：《试剂确认记录》
5.验证内容
5.1取同一批干粉培养基配制三批进行以下验证。
5.2配制灭菌过程
5.2.1称量配制分装：称取麦康凯液体培养基干粉280g，加入纯化水8L搅拌加热煮沸至完全溶解，分装1000ml蓝盖瓶中，每瓶1000ml，配制完成后于1小时内于 121℃高压灭菌15min。
5.2.2灭菌器中装载方式（满载）：将分装好的培养基置于灭菌器内均匀分布，使灭菌器处于满载分布状态。若培养基不能满足满载分布，则用纯化水替代。
5.2.3生物指示剂的放置：将生物指示剂9支分别放置于各培养基中，均匀分布（如右图），开始灭菌。灭菌完成后按说明书要求进行培养。对照管不做灭菌处理，与试验管同时培养。结果见附件4《生物指示剂试验结果》
可接受标准：根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色为不合格。对照管由紫色变为黄色为该指示剂有效。
5.2.4灭菌前后的pH值的测定：灭菌前分装100ml冷却至
25℃测定pH，取已灭菌的培养基100ml，放冷至25℃测定pH值
可接受标准：应在7.3±0.2范围内。
5.2.5外观性状
可接受标准：灭菌后培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、蓝盖有被培养基沾染、倾泄等、均应挑出弃去。
贮存中培养基发生颜色变化、浑浊，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制和灭菌程序验证。
5.3麦康凯液体培养基质量控制试验
5.3.1本检查可与培养基的无菌检查同时进行。
5.3.2菌液制备：取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的浓菌液，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成50-100cfu/ml的菌悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用，若保存在2～8℃，可在24 小时内使用。
促生长能力：接种不大于100cfu的大肠埃希菌菌液于100ml麦康凯液体培养基和对照培养基中，于43.0℃培养不大于24小时。
抑制能力：接种不小于100cfu的金黄色葡萄球菌菌液于100ml麦康凯液体培养基和对照培养基中，于43.0℃培养不小于48小时。
无菌性检查：将已灭菌的液体培养基进行分装，取2个分装单位，每瓶100ml，置43.0℃培养箱培养不小于48h。
阴性对照：取1mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液加入100ml麦康凯液体培养基中，置置43.0℃培养箱培养不大于24h。
可接受标准：与对照培养基比较，促生长能力试验被检培养基试验菌生长良好，液体浑浊。抑制能力试验被检培养基和对照培养基均无菌落生长，液体澄清。阴性对照无菌落生长，液体澄清。无菌性检查培养基无菌落生长，液体澄清。
5.3.3结果见附件5：麦康凯液体培养基质量控制试验结果
五、偏差与变更
确认过程中出现的任何变更和偏差均应如实记录：
1.偏差
确认过程中若出现偏差，执行《偏差处理管理标准》及《偏差处理标准操作规程》。
2.变更
确认过程中若出现变更，执行《变更控制管理标准》和《变更控制标准操作规程》。
3.确认过程中出现的偏差和变更记录在附件6《方案偏差处理表》。
六、再验证周期
根据验证运行情况，拟监测程序及验证周期。下列情况应再验证：培养基的处方更换；厂家变更；在使用过程中出现严重问题时应立即进行再验证。
七、验证依据及参考文件：
1.《中华人民共和国药典》（2015年版）
2.《药品生产质量管理规范》（2010年版）
八、附件
1.附件1《培训情况确认表》
2.附件2《仪器确认记录》
3.附件3《试剂》
4.附件4《生物指示剂试验结果》
5.附件5《麦康凯液体培养基质量控制试验结果》
6.附件6：《方案偏差处理表》
附件1：培训情况确认表
附件2：仪器确认记录
附件3：试剂
