舒血宁对高氧暴露早产鼠肺损伤的影响

华中医学杂志２００８年第３２卷第３期　舒血宁对高氧暴露早产鼠肺损伤的影响　（５４１００１桂林）桂林医学院附属医院新生儿科全裕凤　张　华　郑明慈　邓　毅　

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【摘要】目的观察银杏叶提取液（舒血宁）对早产鼠高氧肺损伤的的防治作用。方法采用标准ＳＤ孕鼠获得第２１天　龄的早产鼠，随机分为：Ｉ．空气对照组，Ⅱ．高氧对照组，Ⅲ．空气＋舒血宁组，Ⅳ．高氧＋舒血宁组。于实验第３天及第７天　时，分别检测支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子一ａ（ＴＮＦ—ａ）、总蛋白、丙二醛（ＭＤＡ）浓度及肺湿／干值，光镜下观察肺组织病理　学变化。结果与Ⅱ组相比，第３天时，Ⅳ组肺湿／干值、ＴＮＦ－ａ、ＭＤＡ浓度明显降低（Ｐ分Ｎ＜ｏ．０５、＜０．０１、＜Ｏ．０５）；第７天　时，Ⅳ组肺泡灌洗液中ＴＮＦ－ａ、总蛋白、ＭＤＡ浓度均明显下降（Ｐ分Ｎ＜ｏ．０５、＜０．０５、＜０．（）１）。与Ｉ组相比，Ⅳ组第３天时　ＴＮＦ＿ａ、ＭＤＡ仍显著升高（Ｐ均＜Ｏ．【）１），第７天时ＴＮＦ－￣、总蛋白、ＭＤＡ仍显著升高（Ｐ均＜０．０１）。肺组织病理改变显示Ⅳ　组的病理损害明显比Ⅱ组减轻。结论舒血宁能减少高氧暴露早产鼠支气管肺泡灌洗液中ＴＮＦ＿ｎ、总蛋白、ＭＤＡ的形成，减　轻肺水肿，减轻早产鼠高氧肺损伤。　【关键词】早产；高浓度氧；大鼠；肺；舒血宁　

Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｉｎｇｋｇｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｎｈｙｐｅｒｏｘｉｃｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｐｒｅｔｅｒｍ　ｒａｔｓ．ＱＵＡＮＹｕｆｅｎｇ，ＺＨＡＮＧＨｕａ，ＺＨＥＮＧＭ　ｇｄ　ｅｔ　ａ１．Ｎｅｏｎａｔｅ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕｉｌｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃ－ｕｉｌｉｎ　５４１００１　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｇｉｎｇｋｇｏ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｙｐｅｒｏｘｉｃ　ｌｕｎｇ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｐｒｅｔｅｒｍ　ｒａｔｓ，ｔｈｅｒｅｆｏｒ　ｔＯ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｓｕｒｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｉｎｇｋｇｏ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｔＯ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒｏｘｉｃ　ｐｒｅｔｅｒｍ　ｌｕｎｇ　ｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｒｅｅ　ｄａｙ　ｏｌｄ　ｐｒｅｔｅｒｍ　ｒａｔｓ　ｏｆ　ＳＤ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｒｎｌｙ　ａｓｓｉｇｎｅｄ　ｔＯ：Ｉ．ｒｏｏｍ　ａｉｒ　ｇｒｏｕｐ．１１．ｈｙｐｅｒｏｘｉａ　ｇｒｏｕｐ（≥９０　ｏｘｙｇｅｎ）．Ⅲ．　ｒｏｍ　ａｉｒ　ｇｉｎｇｋｇｏ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ．Ⅳ．ｈｙｐｅｒｏｘｉａ　ｇｉｎｇｋｇｏ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ．Ａｆｔｅｒ　３　ｄａｙｓ　ａｎｄ　７　ｄａｙｓ　ｏｆ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ，ｔｈｅ　ｌｕｎｇ　ｗｅｔ　ｗｅｉｇｈｔ／ｄｒｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｒａｔｉｏ（Ｗ／Ｄ）。ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ－ａ（ＴＮＦ－ａ），ｔｏｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭｌＤＡ）ｉｎ　ｂｒｏｎ—　ｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ　ｌａｖａｇｅ　ｆｌｕｉｄ（ＢＡＬＦ）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｎｄ　ｌｕｎｇ　ｈｉｓｔｏｐｈａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｉｎ　ａｌｌ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｇｒｏｕｐ１１，Ｗ／Ｄ、ＴＮＦ＿ａ、ＭＤＡ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐⅣｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｏｎ　ｄａｙ　３（Ｐ＜０．０５，＜０．０１，＜０．０５　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）　ａｎｄ　ＴＮＦ＿ａ、ｔｏｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ、ＭＤＡ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐⅣａｌｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｏｎ　ｄａｙ　７（Ｐ＜０．０５，＜０．０５，＜０．０１　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｇｒｏｕｐ　Ｉ，ＴＮＦ＿ａ、ＭＤＡ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐⅣｓｔｉｌｌ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｏｎ　ｄａｙ　３（ｂｏｔｈ　Ｐ＜Ｏ．０１）ａｎｄ　ＴＮＦ＿ａ、ｔｏｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ、ＭＤＡ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐⅣ　ｓｔｉｌｌ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｏｎ　ｄａｙ　７（ａｌｌ　Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｌｅｖｉａｔｅｄ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐⅣｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｇｒｏｕｐ　１１．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｇｉｎｇｋｇｏ　ｉｎｉｅｃｔｉｏｎ　ｍａｙ　ｈａｖｅ　ａ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｒｏｌｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｈｙｐｅｒｏ￣ａ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ｐｒｅｔ￣ｒｔｎ　ｒａｔｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｐｒｅｔｅｒｍ；Ｈｙｐｅｒｏｘｉａ；Ｒａｔ；Ｌｕｎｇ；Ｇｉｎｇｋｇｏ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　

随着围生医学的发展，早产儿存活率明显上升，　支气管肺泡发育不良成为了婴儿时期最常见的慢性　肺疾病，它与早产、长期吸人高浓度氧等密切相关，　其所经历的急性、亚急性炎症改变及肺问质纤维化、　肺泡发育障碍使肺功能严重受损，严重威胁早产儿　的生存。近年的研究证实银杏叶制剂具有中和及清　除自由基、拮抗血小板活化因子、抑制活性氧自由基　生成等作用。本实验建立高氧肺损伤的早产大鼠模　型，观察银杏叶提取液（商品名舒血宁）对早产鼠高　氧肺损伤的影响。　材料与方法　一、动物分组和模型制备提前１天剖宫产出　生的ＳＤ新生大鼠作为早产鼠，早产鼠的获得参照　文献［　报道并结合本实验室经验。生后３天随机　分为：Ｉ．空气对照组，Ⅱ．高氧对照组，Ⅲ．空气＋　舒血宁组，Ⅳ．高氧＋舒血宁组，每组１６～１８只。　Ⅱ、Ⅳ组置于氧箱中，持续输入氧气，氧浓度≥９０　

，ＣＹＳ　２１数字式测氧仪每天监测３次，每天开箱　１　ｈ，添加水及饲料，更换垫料，并与Ｉ组互换母鼠　以避免母鼠因氧中毒致护理能力下降；钠石灰吸收　二氧化碳。Ｉ、Ⅲ组置同一室内空气中。温度２５℃　

～２６℃，湿度６０　～７０　。Ⅲ、Ⅳ组每天接受用生　理盐水２０倍稀释的舒血宁，按０．１５　ｍｌ／１０套鼠重腹　腔注入，Ｉ、Ⅱ组接受等量生理盐水。　二、灌洗液中ＴＮＦ＿ａ、总蛋白、丙二醛（ＭＤＡ）　浓度测定第３天及第７天时，分别取早产鼠麻醉　处死，气管插管，向肺内缓缓注入０．５～１　ｍｌ冷生理　盐水至出现阻力，轻轻回抽，将回收液注入冷试管　内。重复操作３次，将３次灌洗液汇集、离心，取上　清液一７０℃保存待测。ＴＮＦ－ａ测定用双抗体夹心　ＥｌｉｓＡ法，按试剂盒说明书操作。总蛋白测定用　

维普资讯 http://www.cqvip.com ・　１６４・　Ｌｏｗｒｙ法。ＭＤＡ测定用硫代巴比妥酸法。　二三、肺组织病理学检查第３天及第７天时，另　取未灌洗的动物处死后打开胸腔，结扎右支气管；气　管插管，经导管向左肺缓缓注入１　０％福尔马林至肺　尖膨胀，结扎左支气管，固定１５　ｒａｉｎ后取下左肺浸　泡于福尔马林液中，２４　ｈ内石蜡包埋。５Ⅱｍ切片，　ＨＥ染色，光镜下观察肺组织病变。　四、肺湿／干值从结扎的右支气管取下右肺，　轻轻擦干表面，立即称重，记为肺湿重，然后置于　６（）℃烤箱内，每天称重至重量恒定２天，记为肺干　重，计算肺湿／干值（反映肺水肿程度）。　五、统计学处理经ＳＡＳ统计软件进行统计分　析。组问两两比较用ｑ检验。　结　果　、灌洗液中ＴＮＦ—ａ、总蛋白、ＭＤＡ浓度测定　及肺湿／干值ＴＮＦ—ａ浓度：第３天、第７天时，Ⅱ　组均明显高于Ｉ组和Ⅲ组（Ｐ均＜（）．０１）；Ⅳ组明显　低于Ⅱ组（Ｐ分Ｎ＜ｏ．０１、０．０５），但仍明显高于工组　（Ｐ分Ｎ＜ｏ．０１、０．０５）。总蛋白浓度：第３天、第７　天时，Ⅱ组均明显高于Ｉ组和Ⅲ组（Ｐ均＜（）．０１）；第　７天时，Ⅳ组明显低于Ⅱ组（Ｐ（０．０５），但仍明显高　于Ｉ组（Ｐ＜０．０５）。ＭＤＡ浓度：第３天及第７天　时，Ⅱ组均明显高于Ｉ组和Ⅲ组（Ｐ均＜０．０１）；Ⅳ组　明显低于Ⅱ组（Ｐ分Ｎ＜ｏ．０５、０．０１），但仍明显高于　Ｉ组（Ｐ均＜（）．０１）。肺湿／干值：仅在３天时，Ⅱ组　明显高于工组、Ⅲ组、Ⅳ组（Ｐ分别＜０．０１、０．０１、　０．０５），见表１及表２。　表２　第７天肺湿／干值及灌洗液中三项浓度比较（　±ｓ）　伽　干值　（　Ａ／Ｌ）　Ｉ　８　５．００±０．１５　２２．４±４．５　０．２４±０．０６　０．３１±０．１８　『Ｉ　８　５．５７±０．４８　５３．５±１５．３　０．５３±０．１６　１．６５±０．４４￣　Ⅲ８　４．６８±０．４５　１６．３±４．２　０．２７±０．１０　（）．３４±０．１４　Ⅳ　８　５．２１±（）．４４　３３．３±１３．０◆△０．４２±０．１３◆△１．２２±０．５５　△　注：与ｊ组比较　Ｐ＜（）．（）１；与Ⅱ组比较　Ｐ＜（）．０１，◆Ｐ（０．０５　二、肺组织病理改变第３天时，Ｉ组和Ⅲ组肺泡　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２００８，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．３　结构无破坏，肺泡间质只有很少的炎症细胞浸润；Ⅱ组　小血管扩张、充血，肺泡腔内出现大量红细胞及以中　性粒细胞为主的细胞，间质内细胞增多；Ⅳ组肺组织　炎症反应明显减轻，仅见少量红细胞及以中性粒细胞　为主的炎症细胞。第７天时，Ｉ组和Ⅲ组肺泡数量明显　增加，Ⅱ组肺泡结构破坏严重，有的表现为肺间隔增　宽，细胞及胶原纤维增生，有些表现为肺组织结构紊　乱，小肺泡数量减少，提示肺的分化发育受阻；肺泡内　仍可见较多炎症细胞，以巨噬细胞为主，肺间隔增宽，　其中细胞及胶原样物质增生，肺结构紊乱；Ⅳ组肺组　织结构紊乱减轻，巨噬细胞较Ⅱ组减少，肺间隔增宽、　细胞及胶原纤维增生均明显减轻。　

讨　论　建立合适的早产动物模型是研究早产高氧肺损　伤的前提。本实验中Ⅱ组肺组织在高氧３天时即表　现为充血、出血及炎性渗出，７天时肺水肿更明显，　提示高氧暴露诱导了早产鼠急性肺损伤，且急性炎　症反应是其早期表现，与国外报道相符ｌ２ｌｌ　，肺组织　病理改变表明本实验已成功建立早产鼠高氧急性肺　损伤模型。　与健康成年动物相比，早产哺乳动物组织氧化　应激敏感性高，抗氧化能力及自由基的清除能力低　下，持续吸人高浓度氧可产生大量活性氧、自由基。　自由基具有极强的氧化活性，能在体内引起脂质过　氧化反应，并分解出ＭＤＡ，导致氧化应激损伤。目　前ＭＤＡ仍然是反映脂质过氧化程度的最重要的指　标之一。本研究中，持续吸人高浓度氧导致了早产　鼠肺泡灌洗液中ＭＤＡ、总蛋白含量明显上升，肺　湿／干值明显增高，说明持续吸人高浓度氧导致了肺　组织脂质过氧化反应、多种炎症介质的产生、毛细血　管中蛋白的渗出。　ＴＮＦ＿ａ作为强烈的炎性介质，在急性呼吸窘迫　综合征（ＡＲＤＳ）中的作用已受到重视，但与高氧肺　损伤的关系少见报道。ＴＮＦ－ａ主要由单核巨噬细　胞系统产生。炎症早期，巨噬细胞（ＡＭ）激活、　ＴＮＦ－ａ产生增加，并促使粒细胞（ＰＭＮ）聚集、迁移　至肺内，使ＰＭＮ成为分布最广、数量最多的炎性　细胞，同时又是更大的ＴＮＦ—ａ来源。本研究结果　亦显示，Ⅱ组持续吸人高浓度氧后肺组织炎症细胞　浸润明显，且早期主要由ＰＭＮ增加所致，同时支　气管肺泡灌洗液（ＢＡＩ　Ｆ）中ＴＮＦ—ａ水平明显升高，　其变化趋势与ＷＢＣ、ＰＭＮ一致，这些均证实高氧肺　（下转第１７０页）