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大肠癌及其肝转移组织骨桥蛋白mRNA的表达_丁凌

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© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net・论著・作者单位:310009杭州,浙江大学肿瘤研究所通讯作者:郑树(zhengshu@mail1hz1zj1cn

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大肠癌及其肝转移组织骨桥蛋白mRNA的表达

丁凌　郑树　曹江【摘要】　目的　检测骨桥蛋白mRNA在大肠癌及其肝转移灶中的表达差异和蛋白定位,并探讨其在大肠癌肝转移发生发展中的意义。方法　提取44例大肠癌及癌旁正常组织及20例大肠癌肝转移组织RNA,采用实时荧光定量PCR(FQ2PCR)法检测其中骨桥蛋白mRNA的表达。用免疫组织化学法行骨桥蛋白的组织学检测。根据FQ2PCR以CT值为标准,所得数值与实际表达量对数值呈反比的原理,以骨桥蛋白CTΠGAPDHCT的比值来评价不同组织骨桥蛋白的表达。结果　骨桥蛋白mRNA表达在大肠癌肝转移灶中表达最高(1107±0110),在原发大肠癌组织中次之(1115±0114),而在癌旁正常大肠组织中表达最低(1132±0118);统计分析差异有显著意义(t=5181,P=01000及t=2.12,P=

0.038)。免疫组织化学结果表明,骨桥蛋白定位于大肠癌细胞及肝转移灶旁正常肝细胞的细胞质。结论　骨桥蛋白mRNA在大肠癌中的表达高于正常组织,而在大肠癌肝转移组织中表达更高,骨桥蛋白定位于大肠癌细胞质。这提示骨桥蛋白与大肠癌的浸润转移有关,可作为大肠癌肝转移的预测指标之一。【关键词】　大肠癌;　肿瘤转移;　骨桥蛋白;　FQ2PCR

ExpressionofosteopontinmRNAanditsproteinincolorectalcancerandlivermetastatictissues

DING

Ling,ZHENGShu,CAOJiang.CancerInstitute,ZhejiangUniversity,Hangzhou310009,China【Abstract】　Objective　Toinvestigatetheexpressionofosteopontine(OPN)incolorectalcancerandliver

metastatictissuesandthesignificanceofOPNintumorigenesisandlivermetastasisofcolorectalcancer.Methods

TheespressionofOPNmRNAin44samplesofcolorectalcancertissuesandadjacentnormaltissuesand20

samplesoflivermetastatictissueswasexaminedbyFQ2PCR,usingglyceraldehyde232phophatedehydrogenase(GAPDH)asinternalstandard.S2PimmunohistochemicalmethodwasutilizedtodetecttheOPNproteinin

colorectalcancerandlivermetastasistissues.OntheprinciplethattheCTvalueisininverseproportiontothelogvalueoforiginalcopynumberoftargetsequence,OPNCTΠGAPDHCTwasusedtoevaluatethemRNAexpressionlevelindifferenttissues.Results　TheOPNmRNAlevelsincolorectalcancertissueswere0.85～1.47(󰁡x±

s=1.15±0.14),significantlyhigherthanthoseinadjacentnormaltissues(0.94～1.47,󰁡x±s=1.32±0.18)andlowerthanthoseinlivermetastatictissues(0.92～1.30,󰁡x±s=1.07±0.10)(t=5.81,P=0.00andt=2.12,P=0.038),ImmunohistochemistryshowedthatOPNproteinwaslocalizedinthecytoplasmofcolorectalcancercells,matastaticcancercells,andnormalhepatocytesaroundmetastatictissue,butnotinthenormalcolorectaltissuesaroundtheprimarycancerandnormalhepatocytesinpersonswithoutcolorectalcancer.Conclusion　TheexpressionofOPNmRNAisthehighestinlivermetastatictissues,moderateinprimarycolorectalcancertissues,andlowestinadjacentnormaltissuesofthemetastaticlivercancer.OPNproteinislocatedincytoplasmofcolorectalcancercells.OPNisapotentialmarkerforlivermetastasisofcolorectalcancer.【Keywords】　Colorectalcancer;　Neoplasmmetastasis;　Osteopontin

大肠癌是临床常见的恶性肿瘤之一,其发病率近年呈明显的上升趋势,但其治疗效果,目前仍停留在20世纪70年代水平。影响大肠癌疗效的因素很多,其中大肠癌肝转移仍属急需解决的重要问题。美国每年新发现的大肠癌约15万人,其中1Π4～1Π3病例属于晚期。在这些晚期大肠癌的病例中,发生肝转移者占50%～70%。据文献报道,当临床上确诊为大肠癌时,即已经有20%～40%的病例发生了肝转移。而在原发癌灶手术切除后5年内,还可以有50%病人发生肝转移[1]。如何从分子生物学角度进行大肠癌肝转移机制的研究,为干预阻断大肠癌肝转移提供理论基础,是目前研究的热点之一。本研究通过设计特异引物和探针,应用实时荧

・079・中华医学杂志2002年7月25日第82卷第14期　NatlMedJChina,July25,2002,Vol82,No.14© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net光定量PCR(FQ2PCR)方法,检测了在大肠癌及其肝转移组织中大肠癌肝转移相关的基因—骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达,同时应用免疫组化

方法对骨桥蛋白进行蛋白水平的组织学检测,以探索其在大肠癌肝转移发生发展中的作用。

图2　大肠癌组织骨桥蛋白免疫组化.信号为棕褐色,绝大多数位于癌细胞胞浆,几乎全部大肠癌细胞均为阳性　×200　图3　癌旁正常大肠组织骨桥蛋白免疫组化,正常大肠上皮细胞未见明显阳性信号　×200　图4　大肠癌肝转移组织骨桥蛋白免疫组化,大肠癌细胞及周围正常肝细胞胞浆内均见阳性信号　×200　图5　无瘤正常肝组织骨桥蛋白免疫组化,正常肝细胞未见明显阳性信号　×200

对象与方法一、对象1.临床资料:44例大肠癌及癌旁相对正常组织标本取自浙江大学附属第二医院手术患者,均经病理证实。年龄25～84岁,平均57岁,男24例,女20

例。根据Newland(1981)Duke分期法,A期7例,B

期17例,C期18例,D期2例。另取20例大肠癌肝转移组织。21试剂与仪器:美国PerkinElmer公司7700型实时荧光定量PCR仪。骨桥蛋白单抗(RatAnti2HumanOsteopontinMonoclonalAntibody)购自美国

CHEMICON公司,单抗工作浓度1∶200。免疫组织化学S2P染色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。二、方法1.RNA的提取:分别取新鲜大肠癌及癌旁相对正常组织(距癌变边界15cm外)、大肠癌肝转移组织各100mg,在液氮存在下研成粉末,加入1ml

Trizol溶液(GIBCO公司)匀浆,进行RNA提取。所得RNA溶于DEPC水中,用紫外分光光度仪对其定量后分别行cDNA的合成和RNA电泳,后者用以判断RNA的质量。2.cDNA的合成:取RNA2μg,寡脱氧胸苷酸

15

015μg,10nmolΠLdNTP混合液1μl,65℃加热5min后,加入011molΠLDTT2

μl,Rnasin40μ

l,SUPER

SCRIPTII1μl(GIBCO公司),42℃,孵育50min,70℃

加热15min终止反应。所得cDNA用于PCR扩增。3.PCR扩增条件确定及骨桥蛋白序列测定:以PrimerExpressTM110软件设计引物及探针(骨桥蛋上下游引物及探针序列正在申请专利),扩增片段为201bp。内参照GAPDH上游引物:5′CTTAGCACCCCTCCCCAAG3′,下游引物:5′GATGTTCTGGAGAGCCCCG3′,探针:5′CATGCCATCACTGCCACCCAGAAGA3′,扩增片段为150bp。首先进行普通RT2PCR扩增,寻找最佳扩增条件。最终条件为94℃变性2min,94℃20s,60℃20s,72℃15s,30个循环,循环结束后72℃延伸5min。对骨桥蛋白电泳阳性的cDNA进行克隆和序列测定。用T4DNA连接酶将回收纯化的cDNA片段连于载体pGEM2T

EasyVector(美国Promega公司),在Escherichiacoli

菌株内扩增,经EcoRI(Promega公司)

酶切鉴定,所

得阳性载体经测序(ABI377,Perkin2Elmer)证实(图1)。

M:标准分子量DL2000;1:大肠癌组织OPN(201bp);3:癌旁正常大肠组织OPN(201bp);2,4:内参照GAPDH(150bp

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图1　RT2PCR检测OPNmRNA在配对大肠癌组织中的表达

・179・中华医学杂志2002年7月25日第82卷第14期　NatlMedJChina,July25,2002,Vol82,No.14

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大肠癌组织β-连环蛋白的表达及其临床意义

大肠癌组织β-连环蛋白的表达及其临床意义

大肠癌组织β-连环蛋白的表达及其临床意义
张明金;王强;王元和;许洪卫
【期刊名称】《第二军医大学学报》
【年(卷),期】2000(21)3
【摘要】目的 :探讨大肠癌组织中β-连环蛋白(β- catenin)的表达是否与浸润、转移相关。

方法 :应用免疫组化方法检测 44例大肠癌患者原发灶、临近非肿瘤大肠粘膜组织中的β-连环蛋白的表达情况。

结果 :正常大肠粘膜中β-连环蛋白强烈表达 ,而其在大肠癌原发灶中的染色特征发生改变 ,表达程度明显弱于临近非肿瘤大肠粘膜 ,且与大肠癌的生长方式、分化程度、淋巴结转移、Dukes分期等临床病理因素密切相关。

结论:β-连环蛋白的表达水平可以作为预测大肠癌转移潜能的一个参考指标。

【总页数】3页(P239-241)
【关键词】细胞粘附分子;β-连环蛋白;大肠肿瘤;肿瘤转移
【作者】张明金;王强;王元和;许洪卫
【作者单位】第二军医大学长征医院普通外科
【正文语种】中文
【中图分类】R735.340.2
【相关文献】
1.β-连环蛋白和核转录因子-κB在大肠癌中的表达及临床意义 [J], 东星;周卫东;于万军;祝伟;解放军第
2.分泌型卷曲相关蛋白1和β-连环蛋白在肺腺癌组织的表达及临床意义 [J], 李小杰;殷桂林;董永强;朱水波;张晓明;纪涛;徐家行
3.上皮钙黏蛋白和γ-连环蛋白在大肠癌的表达及临床意义 [J], 胡长梅;霍继荣;周世权;任剑珍
4.TBX3和β-连环蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 李海英; 史淼
5.β-连环蛋白和CD146在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 谢军;周磊
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结直肠癌肝转移患者癌细胞白细胞介素-13受体α2的表达及其与骨髓源性抑制细胞的关系

结直肠癌肝转移患者癌细胞白细胞介素-13受体α2的表达及其与骨髓源性抑制细胞的关系

2020,24(23):65-69.实用临床医药杂志Journal of Clinical Medicine in Practice・65・论著结直肠癌肝转移患者癌细胞白细胞介素-13受体a 的表达及其与骨髓源性抑制细胞的关系余姝彦-杨逸-胡',曹艳佩2（复旦大学附属华山医院，1.普外科，2.护理部，上海，200041）摘要：目的探讨白细胞介素-13受体a2（（L-13Ra2）在结直肠癌肝转移患者细胞中的表达及其与骨髓源性抑制细胞（MDSC）的关系。

方法回顾性分析2200-2013年复旦大学附属华山医院手术的68例结直肠癌肿瘤患者石蜡切片,使用常规免疫染色方案，切片观察IL-13Ra2表达。

采用抗CD11B抗体和抗CD33抗体进行双重染色，采用荧光抗体、山羊抗兔免疫球蛋白（H+L）抗体和山羊抗鼠免疫球蛋白（H+L）抗体对CD33进行显示。

3位病理进行双 IL-13Ra2染色片。

结果结直肠癌肝转移患者IL-13Ra2阳性（90.8%），其次为脑转移（65.0%）、原发病灶（60.0%）、其他转移（53.0%），差异有统计学（P<0.05）。

在肝转移病例中，IL-13Ra2表达与MDSC）性相关（=0.740,P<0.05）。

41例远处转移病例的平均生存期为（12.0±5.2）个月。

结论IL-13Ra2水平升高提示结直肠癌远处转移患者的预后较差，推测IL-13R o22结直肠癌细胞来诱导MDSC增殖并促进肿瘤肝转移。

关键词：白细胞介素13受体；骨髓源性抑制细胞；结直肠癌；肝转移；脑转移中图分类号：R735.3；R329.2文献标志码：A文章编号：1674-2353（2。

20）23-065-15D0I：10.7619/jcmp.Expression of interleukin-13receptor a in cancer cellsof calorectaS canccr patients with liver metastasis andits relationshin with myeloiO-derived suppresssr cellsYU Shuyan1，YANG Yi1，HU Ting1，CAO Yanpei2(1.Department of'General Surgery，2.Nursing Department，Huashan Hospital Affiliatedto Fudan University，Shanghnt，200041)Abstrach:Objective To iavestinaid thd expressiou of interledrin-15naptun a2(IL23Ra2) in calit of calorectai cavern patieris with liven metastasis ant iit nitionship with myeloin-leaved suppnsson cell)(MDSCs).Methods Paraffin sectiout of68patiecit with colorectal cavern shrnen in Hrashva Hospitdi Affiliated to FuPaa Uniynsity from2200to2213were aetroshccavely analyzed.The expressioo of IL23Ra2was observed aVea rootive immunostainina-Anti-2D11B antinooy ant anti-2D33antinooy were used foa aouUie staininn-Fluorescedi antinooy，goat anti-raVbit immuno­globulin(H+L)antinoOy ant gont anti-moosc immunooloUulin(H+L)antinoOy were used to ais-ply CD33.Three patholooists mnppnptly evaluated IL23Ra2stained s PP cs in n aouble-21mn manneo.Results The positive raie of IL23Ra2in colorectal canceo pyUdts witii liar metastasis wns th highet(99.0%)，followed by brain metastasis(65.0%)，primary lesions(66.0%)，ant otaer metastases(53.0%)，v-taere were sianificant dimeredees(P<0.05 ).There was a Unpo caa■elatiou betweer tae expressioo of IL23Rct2ant tae nnmbeo of MDSCs in cases wii liyer metastar sis(s二0.740，P<0.05).The average shrviea time of44p VW i V s withi aistant metastasis was(12.6±5.0)mooths.Conclusion The increpsed levd of IL-13Ra2suggests that the prootosis ofcaloectW canceo patients with disWait metastasis is pooe，ant it is specalated that IL23Ra2cm in-duca proliferatioo of MDSCs ant promote liyer metastasis by revulatino calorectal canceo ceDs.Key words:interledUin-12recedtoo;myeloip-2erived suppassor cDls;coloactW catcao;lier ea metastasis;brain metastasis收稿日期：2020-12-15基金项目：科学基金面上项目（81472676）通信作者：肝脏是结直肠癌血行转移最常见的部位,发生肝转移后的治疗效果是非常有限的⑴。

结直肠癌有无肝转移血清差异蛋白质表达的研究

结直肠癌有无肝转移血清差异蛋白质表达的研究

结直肠癌有无肝转移血清差异蛋白质表达的研究目的：利用蛋白质组学技术分离、鉴定结直肠癌有无肝转移患者血清中差异蛋白质，筛选诊断肝转移的血清蛋白标志物。

方法：根据入组条件，收集结直肠癌无肝转移病例、有肝转移病例，在两组中随机抽取12例血清样本，同组血清等量混合进行双向凝胶电泳，建立两组血清蛋白质双向电泳图谱，用Image-Master V5.0软件寻找两组差异蛋白质点，MALDI-TOF-MS对差异蛋白质进行鉴定，查询生物信息数据库对差异蛋白质进行初步分析。

结果：两组比较差异在2倍以上蛋白质有8种，其中5个蛋白质表达上调，3个蛋白质表达下调；两组每个差异蛋白灰度体平均值比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。

通过数据库搜索鉴定出7种蛋白质，上调的5个蛋白质分别是Transferrin、Complement component C9、RNA directed DNA polymerase（RNA指导的DNA合成酶）、Conserved hypothetical-protein（假定蛋白质）、SEC14L1 7 kDa protein；下调的2个蛋白质分别是Haptoglobin和Isoform 1 of Serum albumin。

结论：结直肠癌有无肝转移患者血清中的蛋白质表达谱有一定的差异性，这些差异蛋白质可能成为诊断肝转移的血清标志物。

标签：结直肠癌；肝转移；差异蛋白质近年来大量统计资料表明，在我国结直肠癌肠癌发病率和死亡率逐年升高尽管诊疗新技术不断改进和化疗药物的更新，其整体治疗水平仍不尽人意，主要原因是在行根治性手术前出现了肝脏的转移。

因此，早期有效地诊断结直肠癌肝转移具有重要的临床意义，是彻底改变结直肠癌预后的关键措施。

本研究利用蛋白质组学技术筛选及鉴定结直肠癌肝转移关键血清蛋白标志物，进一步了解结直肠癌肝转移机制。

1 资料与方法1.1 一般资料选取2010年5月-2011年11月本院经病理明确诊断为结直肠癌的患者88例，并且患者既往无其他肿瘤，术前未接受过放疗、化疗等治疗；无姑息性手术者；无肝炎、肝硬化、原发性肝癌以及急慢性炎症性疾病等影响血清蛋白含量的相关疾病患者。

2024结直肠癌肝转移的转化治疗

2024结直肠癌肝转移的转化治疗

2024结直肠癌肝转移的转化治疗结直肠癌肝转移具有极其特殊的生物学特性，肝转移灶的手术切除可以给患者带来明显的生存获益，20%左右手术切除的患者可以获得治愈。

近年,随着结直肠癌肝转移外科治疗研究的深入和经验的积累，肝转移灶的手术切除越来越积极，肝转移灶的数目、大小、发生的时间，甚至合并肝外转移，这些因素已经不是肝转移灶手术切除的禁忌。

对于不可手术切除的肝转移灶，应该积极地选择强效的转化治疗进行转化，对于转化治疗有效的患者应该在合适的时机进行手术切除或者手术切除联合射频消融术/立体定向放射治疗。

关键词：结直肠癌；肝转移；转化治疗1.转化治疗与肝转移灶的数目分析北京大学肿瘤医院截至2022年治疗的1000多例结直肠癌肝转移患者的资料，结果显示，肝转移灶越多，肝切除术后患者生存越差。

其中单发肝转移的患者5年总生存率为52.6%,5年无病生存率为39.9%;肝转移灶≥5个的患者5年总生存率为30.4%,5年无病生存率为14.2%o1.1肝转移灶的数目是手术的绝对禁忌证吗？欧洲肿瘤学会(EUroPean SocietyforMedicalOncology,ESMO)2016年指南指出，肝转移灶≥5个的结直肠癌肝转移患者不适合手术切除。

2013年美国一项研究显示，相较于肿瘤数目，肿瘤对化学药物治疗的反应性对预后的影响更大。

2017年BritiShJournalofCanCer发表的一项欧洲多中心研究分别统计肝转移灶1~3个、4~9个、≥10个的结直肠癌肝转移患者预后情况，结果显示肝转移灶≥10个的患者5年总生存率为30%o该研究中的总生存期是从诊断后开始计算，包括了转化治疗阶段。

近年，对于肝转移灶数目很多的结直肠癌肝转移患者，手术治疗越来越积极。

2019年Adam等的一篇综述显示对于结直肠癌肝转移患者的治疗，外科切除的指征范围越来越大，包括年龄、肿瘤负荷、肿瘤数目、肝外转移、R1切除等都不是禁忌，可以进行手术治疗。