一、培养基配制
1.培养基是指人工配制的、含有六大营养要素（C 、H 、O 、N 、S 、P ）、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。
2.设计培养基的原则和方法： （1）原则： ①目的明确
②营养协调：C/N 比是培养基设计中重要的原则，主要是指微生物培养基中所含的碳源中碳原子摩尔数与氮源中的氮原子摩尔数之比。
③理化适宜：指培养基中的pH 、渗透压、水活度、氧化还原电势 pH ：
pH 的内源调节：借磷酸缓冲液进行调节，例 K 2HPO 4和KH 2PO 4
借
CaCO 3作为“备用碱”进行调节
pH 的外源调节：按照实际需要不断从外界流加酸或碱液 水活度：各种微生物生长的水活度a w 值在0.998-0.60之间
氧化还原电势：一般好氧菌生长的E h 在+0.3~+0.4V ，兼性厌氧菌在+0.1V 以上进行好氧呼吸产能，在+0.1V 以下进行发酵产能，而厌氧菌只生长在+0.1V 以下的环境中。
为了培养严格厌氧菌，在培养基中加入适量还原剂，包括巯基乙酸、抗环血酸、硫化钠、半胱氨酸、铁屑、谷胱甘肽、瘦牛肉粒等。还需要加入化学指示剂，例如刃天青，在无氧条件下无色，有氧条件下与pH 有关，中性呈紫色，碱性呈蓝色，酸性为红色。 ④经济节约
（2）方法：生态模拟、借鉴文献、精心设计、试验比较 3.培养基种类 根据培养基成分分为
微生物 最低pH 最适pH 最高pH 细菌 2-5 6.5-7.5 8-11 酵母菌 2-3 3.8-6.0 7-8 霉菌
1-2
4.0-
5.8
7-8
(1)合成培养基：合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。
(2)天然培养基：由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。
(3)半合成培养基：在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
根据培养基外观分为
（1）液体培养基：适用于大规模培养微生物
（2）固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂，例如加入1%-2%的琼脂或5%-12%的明胶
（3）半固体培养基：在液体培养基中加入少量凝固剂而配制成的半固体状态培养基，例如加入0.5%-0.7%的琼脂。
根据培养基对微生物的功能分类
（1）选择性培养基：具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于筛菌领域
（2）鉴别性培养基：在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只需肉眼辨别颜色就能方便从近似菌落中找出目的菌落的培养基。
4.海洋细菌适宜生长的培养基环境：
一般可以在2.0-4.0%的盐分浓度中生存。
大多数海洋细菌具有在低温下生长的特性。中温细菌，虽然其最适生长温度在20℃左右，但是在0-5℃下缓慢生长。
5.海洋细菌常用的培养基
（1）2216E培养基：酵母膏0.1％，蛋白胨0.5％，琼脂1.8％，FeSO4 0.0025%，海水，PH7.2-7.4 。
（2）GYP培养基：酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，G 1％，海水，PH7.2-7.4 。（3）YP培养基：蛋白胨2％，酵母膏0.5％，海水，PH7.2-7.4 。
（4）高盐LB培养基：NaCl：3％，蛋白胨：1 ％，酵母粉：0.5％，pH：7.0 注：
试剂公司批号状态
蛋白胨OXOID 110211 粉末状
酵母膏OXOID 1189041 粉末状
琼脂MDBio，Inc. 0390401 粉末状
NaCl 国药集团化学试剂有限公司10019318 颗粒状FeSO4国药集团化学试剂有限公司1001218 颗粒状
6.具体步骤
（1）器皿准备
培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，烧杯、锥形瓶等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。
（2）溶解培养基配料
先在烧杯中放适量水，在天平上放上称量纸，调零，用双蒸水清洗药匙并用卫生纸擦干，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素（微量元素经常容易与培养基中的组分形成沉淀，一般建议单独配制和灭菌，在接种前加入培养基中）、维生素(不能高温高压灭菌，应当用0.22 μm滤膜过滤)等材料加入水中溶解，最后定容，搅拌均匀。
（3）调pH值
配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1 mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部
过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。将配好的培养基倒入锥形瓶中。
（4）加凝固剂
配制固体培养基时需加琼脂（根据现有的琼脂固化能力确定浓度）。
（5）包扎标记
将锥形瓶加封瓶膜，注明培养基名称、配制日期及配制人。
（6）灭菌
根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。
7.配制培养基的注意问题
（1）注意浓度配比不要搞错。
（2）很多培养基的加料顺序有讲究，否则会有沉淀产生。
（3）有些培养基会有不溶物质，分装前应摇匀。
（4）不要忘了调节pH值（一般细菌都需要）。
（5）加热溶解时尽量不要煮沸，会损失营养物质。
（6）如果是抗生素、维生素等不耐热物质，应该先过滤除菌，再加入灭好菌的培养基中。
（7）如果是金属离子等耐热盐类（在培养基中含量微少，称量困难），可以配制成母液，配制培养基时加入。
（8）培养基配制好后应立即高压灭菌，如果等待时间比较长，应当用水浴加热到90℃以上，以免在配制过程中引入的杂菌在等待期间长起来。
（9）对于液体培养基调过pH值后高压灭菌，pH值变化（培养基中物质不分解）有两种情况：
①如果高压前pH>7.0，灭菌后pH降低0.2左右；
②如果高压前pH<7.0,灭菌后后pH升高0.2左右。
当然如果高压的过程中，如果一些物质如氨基酸等分解，那么pH变化则无法确定。所以，不同的培养基配置的过程中，一定要注意培养基的成分是否在高压下分解，从而选择不同的灭菌温度。
因此，为有效避免pH灭菌前后的偏差，可以将灭菌前测定pH值的温度尽量降至pH计标准温度（培养基在配制时要加热溶解，在调节其pH值时不能太
