实验七 染色体核仁组成区的银染色法

实验五 染色体Ag-染色法
❖ 1、实验原理 ❖ 应用银染色技术，哺乳动物的核仁组织者
(NOR)特异性染为黑色， ❖ 这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR ❖ 即18S+28S核糖体基因的分布区，
图15-1
❖ 银染色的是与rDNA转录有关的一种酸性蛋白。 因此，银染的是有转录活性的NOR。
❖ 一般NOR位于次缢痕的位置。
❖ (3)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50 %AgNO3溶液和2滴明胶显影液，
复以盖片(或擦镜纸)直到玻片标本呈金褐色为 快速漂洗，晾干。
❖ (5)用Giemsa染色液(磷酸缓冲液：Giemsa原 液=10：1)染色8～10 min，用自来水冲洗。
2、实验材料
❖ 水浴锅、试剂瓶、镊子、滤纸、擦镜纸等 ❖ 硝酸银溶液、明胶显影液、Giemsa原液
3、实验方法
❖ (1)按常规方法制备染色体标本片（见实验一）
❖ (2)在培养皿底部放一用蒸馏水润湿的滤纸， 上放2根玻棒(或火柴棒)，置水浴锅保温至 56～60℃(一般采用60℃)。
此过程可不放在水浴锅内，直接将常规染色体标 本片放在56～60℃的电热板上亦可。
❖ (6)蒸馏水冲洗后，空气干燥，镜检。
5、实验结果与分析讨论
❖ 仔细观察．Ag-NOR分布， ❖ 并计数10个细胞分裂相Ag-NOR数目

成 份 中的 纤 维成 份 围 绕 常 在 代 谢 活 动 非 常 活
,
证实
,
基 因 存 在 于 细 胞 核 仁 的 致 密 纤维 成
份 并 在 其 中转 录
跃 的 细 胞 和 恶 性 细 胞 中 发 现 这 种类 型 的 核 仁
在 光 学 显 微镜 下 用 银 染 的 方 法 和 在 电 子 显 微 镜 下 都 能见 到 纤 维 中心 银染 色 最 强 纤 维成 份 银
一 ,
。
李白 和
一
聚合 酶
,
‘ 的分 布
区域
。
,
纤 维 中心 相 当 于 核 仁
、
染 色 质或 核仁 组 织者
、
。
。
它 是 由核 仁 组 织 者 演 化 而 来 的 纤 维 中 心 的 数
目 大 小 与 细 胞 生 长 速 度 代谢 活 动 紧 密 相 关
核 仁 的 最 内 层 有 一 个 大 的 纤维 中 心 由 一
, ,
的 电 子 密度 低 的 区 域 占 核 仁 总 体 积 的
含 有直 径 反应 是
,
胞 的 核 仁类 型 数 目和 大 小 都各 不 相 同
、
。
的 纤维 用银 染色 呈强 的银 着色
核仁 的 类 型
不 同 的 细 胞 的 核仁 形 态 很 不 相 同 根 据核 仁 成 份 和 分 布 的 不 同 可把 核 仁 分 为三 种 类 型 环 状 的 核仁
关 关 关 关 关 关 关 关
。
鸡 基 因组 上 内源性 抗 内源 性
,
的感 染
。
据 此现 象 科 学 家 提 出
。
,
了 把 外 源 反 转 录 病 毒 外壳 蛋 白 基 因插 入 到 禽 基 因 组 从 而 引入 抗 外 源 病 毒 的 显 性基 因 的 设 想

[实验原理 实验原理]： 实验原理 • 其中C-带主要显示着丝粒附近的异染色质，故称为C-带， 其他异染色质均可显示。染色体经酸（HCl）、碱 [Ba(OH)2] 和缓冲盐溶液（2×SSC）处理后， 再以 Giemsa染液染色而显示的带型。它包括染色体C-带结构 特征、C-带位置、染色强度，异染色质含量等。 • 作为细胞分类学指标，染色体C-带核型可以从不同层次 上反映其生物类群间的分类关系。染色体C-带在同一属 内有一明显而恒定的C-带结构模式，往往构成“标志性 C-带带纹”，由此可以进行属级分类单元的比较。
实验七 植物染色体带型分析
教研室：遗传学与细胞生物学 指导教师：黄世全
[目的要求 ： 目的要求]： 目的要求 1、了解染色体带型分析的有关概念。 2、了解染色体C-带显色技术。 3、学会植物染色体C-带分析方法。
[实验原理 实验原理]： 实验原理 • 染色体是遗传物质的载体，如果染色体发生变化了，生物 的外在性状必然发生变化。染色体数目的变化比较容易察 觉，但是染色体结构和组成成分的变化就比较难以发现。 染色体显带技术使不可察觉的染色体结构和成分变化转变 为可以定量表述的带型变化。 • 染色体分带技术：染色体经物理、化学因素处理后，再进 行染色，使其呈现特定的深浅不同带纹（band）的方法。 • 染色体分带技术可分为两大类，一类是产生的染色带分布 在整个染色体和长度上，如Q、G和R带；另一类是局部 性的显带，它只能使少数特定的带或结构染色，如C、T 和N带等。
材料： 材料：经C-分带技术处理得到的黑麦染色体的图片。 器具： 器具：显微镜、测微尺、毫米尺、镊子、剪刀、绘 图纸、圆规、铅笔等。
操作程序： 操作程序： 1、选取良好的有丝分裂中期的C-带图片。 2、染色体C-带位置： （1）着丝粒C-带（也称着丝粒区C-带）：指着丝粒本身及 其相邻部分的C-带纹。 （2）端部C-带：指染色体末端区域的C-带纹。 （3）居间C-带：在着丝粒C-带和端部C-带之间范围内的C带纹。根据其所在位置又细分为近着丝粒带、中间带、亚 中间带和亚端带等。 3、每对同源染色体上相对应的C-带是否纯合 即在某一特定位置相配对的两条染色体是否都具有带纹， 带纹大小、染色程度是否一致，如不一致，则按杂合计

细胞及遗传学实验报告陈香燕201008030103 生科1班实验七植物染色体标本的制备与观察(一实验目的学习植物染色体标本的制备技术,掌握染色体的技术方法,了解染色体的生物学意义。

(二实验原理植物染色体标本的制备,常用分生组织,如根尖、茎尖和嫩叶做材料。

常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法,其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。

由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体(微管二聚体的形成,以至于不能拉动染色体分开向细胞两极,因此可以使细胞分裂停止在分裂中期,再经过染色,压片,镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。

(三实验用品一、材料:蚕豆二、试剂1.Carnoy固定液2.0.1%秋水仙素溶液3.1mol/L HCl4.Schiff试剂5.亚硫酸水溶液(漂洗液6.Carbor fuchsin (卡宝品红染液(四实验方法步骤1.取材:将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上,室温或28°C下发芽,待胚根长达1~2cm时,切取0.5cm长的根尖部分。

2.预处理:将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中,室温下处理3~4h。

3.水解:把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中,恒温条件下水解14~15min4.染色:倒去热HCl,滴加卡宝品红少许,染色5~10分钟。

5.洗涤:吸去卡宝品红试剂,用蒸馏水换洗2~3次,每次1~2min。

除去残留染色液后加几滴45%醋酸。

6.压片:用吸管从醋酸中吸取材料,置干净载玻片上,材料周围保留半滴45%醋酸,盖上盖玻片,其上放一片吸水纸。

左手指压住吸水纸的左边,右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去,再用铅笔擦头从盖玻片上轻轻敲打,使细胞均用散开。

7.镜检:把压好的片子放在显微镜下,先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少,再检查分裂中期细胞中染色体是否完全散开。

如若染色体分散不好而难以分辨和计数,可取下片子,平放桌面上,用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压力,如果操作细心,用力适度,便可很容易得到染色体分散良好的压片标本,供观察,计数和照相用。