水稻种子特异表达启动子Ole18的克隆、序列分析及功能验证

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Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ６： ｉ ｓ ｓ ｎ ． ２ ０ ９ ５ － １ １ ９ １ ． ２ ０ １ ５ ． ７ ． １ １ ４ ７
水稻种子特异表达启动子Ｏ ｌ ｅ ｌ ８ 的克隆 、 序列分析及功能验证
黄 昕颖 ，程祖锌 ，肖长春 ，黄 志伟 ，郑金 贵
（ 福建农林 大学 农产品品质研 究所 。福州 ３ ５ ０ ０ ０ ２ ）
ＨＵＡＮＧ Ｘｉ ｎ － ｙ ｉ ｎ ｇ ，Ｃ ＨＥ ＮＧ Ｚ ｕ － ｘ ｉ ｎ， ＸＩ ＡＯ Ｃｈ ａ ｎ ｇ － ｃ ｈ ｕ ｎ， ＨＵＡＮＧ Ｚ ｈ ｉ — ｗｅ ｉ ， Ｚ ＨＥ ＮＧ Ｊ ｉ ｎ － ｇ ｕ ｉ
（ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ， Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ Ｆ ｏ ｅｓ ｒ ｔ ｒ ｙ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｆ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ ５ ０ ０ ０ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
南方农业 学报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｅ ｒ ｎ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ２ ０ １ ５ ， ４ ６ （ ７ ） ： １ １ ４ ７ — １ １ ５ ３
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Ｉ ＳＳ Ｎ ２ ０ ９５ —１ １ ９１ ；ＣＯＤＥＮ ＮＮＸＡＡＢ
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ｌ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ｇ ｉ ｎ ｔ ｏ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｐ ＭＤ２ ０ － Ｔ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ａ ｎ ｌｙ ａ ｚ ｅ ｉ ｔ ｓ ｂ ｉ ｏ ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． ｈ ｅ Ｔ Ｃ ａ ＭＶ３ ５ Ｓ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ ｕ ｐ ｓ ￣ ｅ ａ ｍ ｏ ｆ ＧＵ Ｓ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｎ ｐ ＣＡＭＢ Ｉ Ａ１ ３ ０１ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｗａ ｓ ｅｐ ｒ ｌ ａ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ Ｏ ｌ ｅ ｌ ８ ｐ ｏ ｍｏ ｒ ｔ ｅ ｒ ｔ ｏ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｎ ｔ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｐ Ｃ ＡＭＢ Ｉ －
子具有启 动活性 ， 且具有胚及糊粉层特异性表达功 能。 关键词 ： Ｏ ｌ ｅ １ ８ 启 动子 ；基 因克隆 ；序列分析 ；功能验证
中图分类号 ： ￥ ５ １ １ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： ２ ０ ９ ５ — １ １ ９ １ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７ — １ １ ４ ７ — ０ ７
பைடு நூலகம்
摘要 ： 【 目的】 克隆水稻种子特异表 达启动子 Ｏ ｌ ｅ ｌ ８ ， 为实现外源 基因在水稻 胚 、 糊粉层特 异表达奠定 基础 。【 方
法】 采用Ｐ Ｃ Ｒ 克 隆扬稻６ 号Ｏｌ ｅ ｌ ８ 启 动子序列 ， 并 连接至ｐ ＭＤ２ Ｏ ． Ｔ 载体 上 ， 经Ｐ Ｃ Ｒ 验证 后进行测序 ， 并 对测序结果 进行 生物信息 学分 析 ；用克隆获得的Ｏ ｌ ｅ ｌ ８ 启 动子 取代ｐ Ｃ Ａ ＭＢ Ｉ Ａ１ ３ ０ １ 载体 中Ｇ 因上游 的Ｃ ａ ＭＶ３ ５ Ｓ 启 动子构建重组
表达载体 ， 经农杆菌介导转化 台粳９ 号， 获得转基 因植株 ， 对其种子进行Ｇ Ｕ Ｓ 染色 。【 结果 】 克隆获得大小 为１ ２ ６ １ ｂ ｐ 的 Ｏｌ ｅ ｌ ８ 启动子序列 ， ￣ｊ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｒ － ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ 、 Ｉ Ｒ ３ ６ 的１ ８ ｋ Ｄ Ｏ ｌ ｅ ｏ ｓ ｉ ｎ 基因启动子同源性为９ ９ ％。 启动子预测软￣Ｎ ＮＰ Ｐ 推 测该序列具有 启动子的功能 ， 含有种子特异 表达启动子所必需 的Ｔ Ａ Ｔ Ａ － ｂ ｏ ｘ 、 Ｃ Ａ Ａ Ｔ － ｂ ｏ ｘ 等顺式调 控元 件。Ｇ Ｕ Ｓ 组织 化学染色结果 表明 ， 该启动子序列 能够驱动Ｇｕ ｓ ｌ 基因在水稻种 子胚及糊粉层 中表 达。【 结论 】 克 隆获得的Ｏ ｌ ｅ ｌ ８ 启动
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： 【 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ］ Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｅ ｄ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｒ Ｏ ｌ ｅ ｌ ８ ｗ ａ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｒ ｉ ｃ ｅ ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｌ ａ ｙ ａ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｆ ０ ｌ ｒ ｔ ｈ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｇ ｎ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｇ ｅ ｎ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ ｇ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｉ ｎ ｒ ｉ ｃ ｅ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ａ ｎ ｄ ａ ｌ ｅ ｕ ｏｎ ｒ ｅ ｌ ａ ｙ ｅ ｒ ．【 Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ］ Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｐ ｏ ｒ ｍｏ ｔ ｅ ｒ