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第三章细胞工程案例1. 世界上第一头克隆绵羊“多莉”1997年2月27日英国爱丁堡罗斯林(Roslin)研究所的伊恩·维尔莫特科学研究小组向世界宣布，世界上第一头克隆绵羊“多莉”(Dolly)诞生，这一消息立刻轰动了全世界。
“多利”的产生与三只母羊有关。
一只是怀孕三个月的芬兰多塞特母绵羊，两只是苏格兰黑面母绵羊。
芬兰多塞特母绵羊提供了全套遗传信息，即提供了细胞核（称之为供体）；一只苏格兰黑面母绵羊提供无细胞核的卵细胞；另一只苏格兰黑面母绵羊提供羊胚胎的发育环境——子宫，是“多莉”羊的“生”母。
其整个克隆过程简述如下：从芬兰多塞特母绵羊的乳腺中取出乳腺细胞，将其放入低浓度的营养培养液中，细胞逐渐停止了分裂，此细胞称之为供体细胞；给一头苏格兰黑面母绵羊注射促性腺素，促使它排卵，取出未受精的卵细胞，并立即将其细胞核除去，留下一个无核的卵细胞，此细胞称之为受体细胞；利用电脉冲的方法，使供体细胞和受体细胞发生融合，最后形成了融合细胞，由于电脉冲还可以产生类似于自然受精过程中的一系列反应，图3-1 克隆羊“多利”使融合细胞也能象受精卵一样进行细胞分裂、分化，从而形成胚胎细胞；将胚胎细胞转移到另一只苏格兰黑面母绵羊的子宫内，胚胎细胞进一步分化和发育，最后形成一只小绵羊。
出生的“多莉”小绵羊与多塞特母绵羊具有完全相同的外貌。
从理论上讲，多莉继承了提供体细胞的那只芬兰多塞特母绵羊的遗传特征，它是一只白脸羊，而不是黑脸羊。
分子生物学的测定也表明，它与提供细胞核的那头羊，有完全相同的遗传物质（确切地说，是完全相同的细胞核遗传物质。
还有极少量的遗传物质存在于细胞质的线粒体中，遗传自提供卵母细胞的受体），它们就像是一对隔了6年的双胞胎。
克隆羊“多利”的诞生，引发了世界范围内关于动物克隆技术的热烈争论。
是科学界克隆成就的一大飞跃。
它还被美国《科学》杂志评为1997年世界十大科技进步的第一项，也是当年最引人注目的国际新闻之一。
体细胞杂交与细胞融合的区别
体细胞杂交和细胞融合在原理和应用上存在显著的差异。
体细胞杂交的原理是基于细胞膜的流动性和细胞的全能性，通过融合两个不同植物的体细胞来创造新的植物品种。
这项技术的目的是克服植物间远源杂交的不亲和性，培育作物新品种。
细胞融合则是动物细胞融合技术的原理，同样利用了细胞膜的流动性，但更多的是关注于细胞的增殖。
动物细胞融合技术的主要应用不是为了培育新品种，而是用于制备单克隆抗体。
单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面具有特异性强、灵敏性高的优点。
总结来说，体细胞杂交和细胞融合在应用和研究领域、原理、目的和方法上都有明显的区别。
实验3 PEG介导的动物细胞融合技术
PEG介导的动物细胞融合技术是一种常用的体外融合细胞的方法，主要应用于融合一些生长速度缓慢或难以进行杂交的细胞。
该技术利用聚乙二醇（PEG）使两种不同细胞融合成一个细胞，从而产生一些杂合细胞，可以获得有趣的遗传组合。
技术原理
PEG确保了细胞融合的前提是细胞外膜的破裂。
PEG受到细胞表面膜过渡物质的吸引，然后与细胞表面膜结合，形成一个PEG-膜复合物。
虽然聚乙二醇是一种高分子，但由于其化学性质与细胞膜相似，在一定程度上可以渗透到细胞膜中，从而使细胞表面膜发生缺陷和破裂，从而产生细胞融合。
实验步骤
1.将需要融合的两种细胞分别进行繁殖和培育，并将其分离。
2.将细胞置于无血清的生长培养基中，进行24-48小时的饥饿处理，使细胞停止生长。
3.制备PEG溶液，将细胞加入到PEG中，进行处理。
4.将PEG处理后的细胞转移到培养基中，定期更换培养基供给其营养并观察其生长情况。
实验注意事项
1.选择渗透性强，尺寸相似的细胞，以利于融合。
2.通过显微镜观察细胞的形态和数量，确保细胞膜在PEG处理后的破裂和细胞融合情况。
3.注意PEG用量，一般为2-4 g/L，过多的PEG处理可能会导致不必要的副作用。
4.注意细胞的状态和健康程度，以保证实验的稳定性和可靠性。
实验应用
PEG介导的细胞融合技术被广泛应用于细胞融合和制备杂交瘤，可以产生一些具有较好生长特性和生物学功能的新型细胞。
此外，该技术也应用于基因转移、卵母细胞和体细胞融合技术，以及其他相关研究领域中。
