四种鲤鱼对柱形病抗病能力的差异

《河北渔业￣２０１５年第１Ｏ期（总第２６２期）　ｏ研究与探讨　

ＤＯＩ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１００４—６７５５．２０１５．１　０．００５　

四种鲤鱼对柱形病抗病能力的差异　

杨玲，安丽，付佩胜　

（山东省淡水水产遗传育种重点实验室。山东省淡水渔业研究院，山东济南２５０１１７）　

摘　要：采用半致死浓度法，对４种鲤（东平湖鲤、建鲤、俄罗斯鲤及德国镜鲤）对柱状黄杆菌引起的柱形病（即　烂鳃病）的抗病力进行了试验研究，分别采用１×１０　、２×１０　、４×１０　、８×１０　、１．６Ｘ　１０　ｃｆｕ／ｍＬ浓度的柱状黄　杆菌Ｇ４菌株茵液浸泡攻毒１　ｈ，参考Ｒｅｅｄ－－Ｍｕｅｎｃｈ法计算半致死浓度（ＬＣｓｏ）。结果表明，东平湖鲤ＬＣｓｏ为　１０　７１７４　ｃｆｕ／ｍＬ；建鲤ＬＣ５ｏ为１０　ｃｆｕ／ｍＬ；俄罗斯鲤ＬＣ５０为１０　６４１４　ｃｆｕ／ｍＩ　；镜鲤ＬＣ５０为１０　５６９４　ｃｆｕ／ｍＬ，　表明不同品种鲤鱼对柱形病的抗病能力存在差异，四种鲤抗病力大小依次为东平湖鲤＞建鲤＞俄罗斯鲤＞　

镜鲤，其中东平湖鲤和建鲤无显著差异，二者和镜鲤的差异极显著（Ｐ＜Ｏ．０１）。　关键词：鲤鱼；柱形病（烂鳃病）；抗病力　

东平湖鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ　ｃａｒｐｉｏ）属鲤形目、鲤　

科，源自黄河，和黄河鲤鱼同属一个品种，是东平　

湖久负盛名的大型经济鱼类，水汛时黄河鲤随河　

水进入湖内，因湖内水质肥沃，适宜鱼类繁育和生　

长而在湖内定居。相对隔离的生存环境使得东平　

湖鲤与黄河鲤等其它水体的鲤鱼基因交流较少，　

形成相对独立的地理种群，该鱼体型短宽，背苍黑　

色，腹黄白色，尾鳍下叶呈红色，誉谓“金翅金鳞”，　

其肉嫩鲜美，肥而不腻，营养极为丰富，为鱼中之　

上品。近年来由于市场需求量的急剧增加，过度　

捕捞使得东平湖鲤野生资源锐减，近年来湖区人　

工增殖放流和民间放生活动的的开展，导致东平　

湖鲤这一长久以来形成的独特地理群体遭受到不　

同程度的遗传渐渗，造成基因污染，而一旦污染，　

这一种质资源的原种便再难找到和恢复，因此有　

必要对东平湖鲤的种质资源进行发掘，以培育生　

长速度快、抗病抗逆能力强等优良性状的经济品　

系。鲤的地方群体或品系较多，为了比较不同鲤　

鱼对柱形病抗病能力的差异，本文以东平湖鲤、建　

鲤、俄罗斯鲤及镜鲤等作为研究对象，通过对柱形　

病抗病力的差异测定和比较，以期为鲤鱼抗病遗　

传育种提供参考。　１材料和方法　

１．１试验鱼及试验菌种　

东平湖鲤取自东平湖，是用野生东平湖鲤繁　

育的Ｆ１代个体，建鲤购自槐荫区养殖场，俄罗斯　

鲤和镜鲤取自省淡水渔业研究院，购买后饲养１　

个月，以消除养殖环境因子的影响，暂养期间定期　

泼洒药物以防发生鱼病。试验鱼体长１１．５～　

１５．６　ｃｍ，体重２２．９～３８．５　ｇ，试验菌种为柱状黄　

杆菌（Ｆ．ｃｏｌｕｍｎａｒｅ），由中科院水生生物研究所　

提供。　

１．２　方法　

１．２．１柱状黄杆菌的培养和记数采用含ｌｆｆｇ／　

ｍＬ妥普霉素的Ｓｈｉｅｈ培养基培养柱状黄杆菌，先　

用固体培养基２７℃培养，再挑取单克隆接种到４　

ｍＬ液体培养基２７℃振荡培养，１８　ｈ后取１　ｍＬ　

接种到１００　ｍＬ中再培养１８　ｈ，测其ＯＤ　值，并　

进行菌落记数。分别稀释１Ｏ　、１ｏ。、１０。、１Ｏ　、１Ｏ。　

五个梯度，各浓度取０．２　ｍＬ涂布到固体培养基　

平板上，各浓度设３个重复。２７℃恒温培养１７　ｈ　

后菌落计数。　

１．２．２　攻毒预试验　采用菌液浸泡法攻毒，试验　

基金项目：山东省农业良种工程项目“东平湖鲤种质资源发掘与良种选育”资助；　山东省现代农业产业技术体系鱼类创新团队资助（ＳＤＡＩＴ一１４一Ｏ１１—０３）　作者简介：杨玲（１　９６７一）女，研究员，主要从事鱼类遗传育种研究。ｊｎｓｙａｎｇ＠１６３．ｃｏｒｎ　通讯作者：付佩胜Ｅ　ｍａｉｌ：ｊｎｓｆｕ＠１２６．ｃｏｒｎ　

一１８

—　《河北渔业）５２０１５年第１Ｏ期（总第２６２期）　ｏ研究与探讨　

在塑料周转箱中进行，每组试验鱼２Ｏ尾，分别用　

１×１０　ｃｆｕ／ｍＬ、１×１０　ｃｆｕ／ｍＬ、ｌ×１０　ｃｆｕ／ｍＬ　

的菌液浓度浸泡１　ｈ后，转移到盛有清水的塑料　

箱中观察，箱内保持充气，试验水温２６℃。　

１．２．３半数致死浓度（ＬＣ　。）的测定　每组试验　

用鱼２０尾，分别用浓度为１×１０　ｃｆｕ／ｍＬ、２×１０　

ｃｆｕ／ｍＬ、４×１０　ｃｆｕ／ｍＬ、８×１０　ｃｆｕ／ｍＬ、１．６×　

１０　ｅｆｕ／ｍＬ的菌液浸泡攻毒，另外设置空白对照　

组。菌液浸泡１　ｈ后，转移到清水中，每天记录２　

次鱼的死亡情况，连续记录３　ｄ。试验在塑料周转　

箱中进行，试验期间保持充气，试验水温２６℃，半　

数致死浓度（ＬＣ　。）计算方法参考Ｒｅｅｄ—　

Ｍｕｅｎｃｈ法　¨。　

２结果　

２．１　柱状黄杆菌的培养和菌落记数　

取ｌ　ｍＬ培养液接种到１００　ｍＬ液体培养基　

中２７℃振荡培养１８　ｈ后，测得其ＯＤ。。。值后结合　

菌落计数，计算出菌液浓度为２×１０　ｃｆｕ／ｍＬ。　

２．２预攻毒试验　

攻毒处理２４　ｈ后观察发现用１×１０　ｃｆｕ／ｍＬ　

浓度浸泡处理的鲤鱼全部存活，而用１×１０　ｃｆｕ／　

ｍＬ和１×１０。ｃｆｕ／ｍＬ浓度处理的鱼则全部　

死亡。　

２．３半数致死浓度（ＬＯ　。）的测定结果　

四种鲤鱼感染柱状黄杆菌３　ｄ内的死亡情况　

见表１，计算得出各自的半数致死浓度（ＬＣ　。）见　

表２。试验结果的方差分析表明，四种鲤鱼中东　

平湖鲤与建鲤无显著差异，二者与镜鲤的差异极　

显著（Ｐ＜Ｏ．０１），俄罗斯鲤与镜鲤也有显著差异　

（Ｐｄ０．０５）。　

Ｒｅｅｄ—Ｍｕｅｎｃｈ计算ＬＣ５０公式：　

距离比一（高于５Ｏ　的死亡率一５０　）／（高　

于５Ｏ　的死亡率一低于５０　的死亡率）　

半数致死浓度计算：一ｌｇ　ＬＣ　。一一ｌｇ（死亡　

率高于５０　的稀释度）＋距离比×稀释度间距的　

对数　

本试验中各稀释度之间是以１：２的比例进　

行稀释，在２倍系列稀释时，这个系数为０．３０１。　

根据以上公式计算得出，东平湖鲤ＬＣ　。为　

１０　・　＂　ｃｆｕ／ｍＬ；建鲤ＬＣ５ｏ为１０　・。。　ｃｆｕ／ｍＬ；俄　

罗斯鲤ＬＣ５０为１０　・。　Ｈ　ｃｆｕ／ｍＬ；镜鲤ＬＣ５ｏ为　１０　ｃｆｕ／ｍＬ，经ＳＰＳＳ分析，东平湖鲤和建鲤间　

差异不显著（Ｐ＞０．０５），两者与镜鲤的差异极显　

著（Ｐ＜０．０１），俄罗斯鲤与镜鲤差异显著（Ｐ＜　

０．０５）。　

３讨论　

东平湖鲤选育的主要目标是提高生长速度和　

增强抗逆抗病能力，本研究选用４种不同品种鲤　

鱼来探讨其对柱形病的抗病力差异，其中东平湖　

鲤是捕自东平湖的野生亲本经人工繁育的子一　

代；建鲤为济南本地养殖群体，经过连续多代人工　

繁育的后代；俄罗斯鲤和镜鲤取自山东省淡水渔　

业研究院，引自天津市水产研究所。　

柱状黄杆菌是世界范围的水生动物致病菌，其　

宿主范围极广泛，可感染鲑科、鲤科、鲶科、鲈科等　

多个科的鱼类，几乎所有的淡水鱼均对该菌敏感，　

是我国重要养殖鱼类草鱼、鲤鱼等烂鳃病的病原　

菌　］，它是条件致病菌，组织损伤、高温、低氧、操作　

不当及继发感染等都有可能发病，主要危害鱼鳃，　

也可引起体表溃疡。通过本试验研究，计算出各自　

的半致死浓度（Ｉ　Ｇ。），结果显示柱状黄杆菌对四种　

鲤半致死浓度顺序为东平湖鲤＞建鲤＞俄罗斯鲤　

＞镜鲤，方差分析表明，东平湖鲤和建鲤差异不显　

著，两者与镜鲤有极显著差异（Ｐ＜０．０１）。　

本研究结果为野生东平湖鲤子一代的抗柱形　

病能力最强，镜鲤的抗病力最弱，和蔡完其等Ｌ３］研　

究鲤鱼对嗜水气单胞菌的ＬＣ　。的结果建鲤＞野　

鲤＞镜鲤及卢彤岩等　对高寒鲤和散鳞镜鲤的比　

较结果相似。分析可能有以下几个方面原因：一　

是东平湖鲤为野生亲本的子一代，其亲本是自东　

平湖采集的７龄以上的天然野生群体，经过多年　

优胜劣汰的自然选择，天然群体中体质弱的苗种　

已经遭淘汰，能够成活下来的都是体质比较壮的　

个体；二是野生群体的亲本数量多，具有较高的遗　

传变异度和遗传多样性水平，避免了因近亲繁殖　

造成的种质退化；德国镜鲤１９８４年从德国引进我　

国，具有生长快、耐低温等特点，但是其抗病力　

差　］，是因为体表鳞片少，缺乏第一层防御系统的　

保护的原因造成的；建鲤是１９９６年杂交育成的优　

良品种，具有生长快、适应性和抗病力强等特　

点　］，本实验所用的建鲤是附近养殖者多年人工　

养殖的，亲本数量相对较少外，又经过连续多代人　

一１　９—

　《河北渔业＞＞２０１５年第１０期（总第２６２期）　ｏ研究与探讨　

工繁育，存在一定程度的近交衰退，加之是在人工　与鲤鱼的杂交品种，具有耐低温、生长快、性成熟　

环境下养殖，饲料营养因素、养殖水环境因素、人　晚等特点　，１９９８年引进我国，但是引进的基础　

为管理等因素的不当，也会导致群体整体抗病能　群体较少，经过多代的人工繁育，存在近交衰退的　

力的减弱；俄罗斯鲤又名乌克兰鳞鲤，是大马哈鱼　问题，从而使其抗病能力减弱。　

表１　四种鲤鱼感染柱状黄杆菌３　ｄ内死亡率的比较　

结果　积累数　群体　浓度／ｃｆｕ・ｍＬ一　——死亡率／　生存　死亡　生存　死亡　总数　

２Ｏ

一　《河北渔业￣２０１５年第１０期（总第２６２期）　Ｏ研究与探讨　

通过引进野生种质，更新亲本，提高养殖苗种　

的遗传多样性水平，可能在抗病性状方面获得一　

定的改善，然而近交不一定就带来衰退，遗传多样　

性高也未必能大幅提高抗病和生长效果，有目的　

的近交可以在很短的时间内将某一目标性状进行　

纯化和固定，应充分利用好现有的种质资源，在保　

护好野生种质资源的基础上，针对抗病力、生长速　

度等指标进行品系和品种的培育才是遗传育种工　

作的关键［８］。　

参考文献：　

［１］杨玲，孟庆磊，安丽，等．３个草鱼群体抗柱形病能力比较　［Ｊ］．齐鲁渔业，２０１２，２９（６）：８—１０　Ｅ２３黄锦炉，汪开毓，黄艺丹，等．水生动物致病菌一柱状黄杆菌　研究进展［Ｊ］．中国水产，２００９，５２（１０）：５９—６１　［３］蔡完其，孙佩芳．三种鲤对爆发性鱼病抗病力的差异［Ｊ］．水　

产学报，１９９４，１８（４）：２９０—２９５　［４］卢彤岩，刘洪柏，李池陶，等．两种鲤鱼对侵袭性病原体及嗜　水气单胞菌抗病力的比较［Ｊ］．水产学杂志，２０００，１３（１）５３　

—５６　［５］官会顶，王武民，张卓．池塘养殖镜鲤主要病害的治疗及综合　防治措施ＥＪ］．中国水产，２００８，５１（９）：６７—６８　Ｅ６３朱健，王建新．建鲤品种特性研究进展［Ｊ］．浙江海洋学院学　报，２００４，２３（１）：５２—５５　［７］王锡荣，王秉利．俄罗斯鲤健康养殖试验［Ｊ］．齐鲁渔业，　

２Ｏ１２，２９（１０）：１３—１４　［８］贾智英，石连玉，孙效文．鲤抗病育种研究进展［Ｊ］．上海海洋　大学学报，２０１２，２１（４）：５７５—５７９　（收稿日期：２０１５—０６—２５）　

（上接第８页）　

（１．Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｓｅａ　Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｆｉｓｈｅｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００９０，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　ＩＣＤ　Ｈｉｇｈ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｌａｉｗｕ　２７１１００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｄｏｎｇｙｉ　Ｏｃｅａｎ　Ｅｃｏｎｏｍｉｃ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｗｅｎｚｈｏｕ　３２５７０４，Ｃｈｉｎａ；４．Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｓｈｅｎｇｈｅ　Ｐｌａｓｔｉｃｓ　Ｃｏ，Ｌｔｄ，Ｎａｎｔｏｎｇ，２１１６００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｄ—ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ／ｐ０ｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ　ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ