麦氏比浊管配置方法(0.5-10号)

药敏试验抑菌圈直径判断标准

一、药敏试验操作步骤

1、制作待检菌液

在超净工作台内挑取培养18-24h普通营养琼脂平板上的菌落，悬于含3ml无菌生理盐水的试管中。混匀后与比浊管比浊，调整浊度至0.5麦氏标准（相当于1-2*10 cfu/ml）。

2、接种细菌

在超净工作台内用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余的菌液，均匀涂抹整个平板表面，最后沿平板内缘涂抹一周（用接种环密集划线法也可以）。

3、贴药敏片

将涂抹均匀的培养皿底部用记号笔做好标记，眼科镊子在酒精灯上灼烧灭菌待冷却后，镊取各种购买或自制的药敏片，分别贴于相应的位置上，用镊子轻轻按压纸片使药敏纸片与培养基表面密贴。药敏纸片应在培养基表面均匀分布，各纸片距中心距离大于24mm，纸片距边缘距离大于15mm，这样一个直径90mm的培养皿可贴7个药敏纸片。

4、培养

最后将贴好药敏纸片的平板倒置于37℃±1℃恒温培养箱，培养

16-18h后取出，观察结果。

二、结果观察与判定

1、抑菌圈直径观察

抑菌圈直径以肉眼见不到细菌明显生长的边缘为限（变形杆菌可蔓延生长至某些抗微生物的抑菌圈内，表现为一种细薄微弱的生长，形成一层明显的抑制性生长环，对于这种情况应忽略不计；对于磺胺类药物，应忽略抑菌圈内轻微的细菌生长，少于20%的菌苔，以明显的边缘为抑菌圈直径）。

2、根据药敏片周围抑菌圈的大小，判定药物的敏感度

敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用量该抗菌药物治愈。

中介：表示被测菌株对常规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于敏感菌株，使用高于正常给药量有疗效。

耐药：表示被测菌株不能被常用剂量药物抑制，临床疗效不佳。

3、判定

不同菌株结果判定标准不同；不同药物判定标准不同。最终判定结果应以WS/T125-1999列表中对应的标准为准。也可以根据以下标准进行判定：

备注：商品要通常按照说明书用量原倍配置药敏纸片，可视情况做 2 倍、4 倍浓度配置；商品药敏感性判定通常抑菌圈直径﹥20mm

牛津杯法定量检测大蒜抑菌作用实验

一、实验目的

1. 了解大蒜对微生物中大肠杆菌的抑菌作用

2. 学习不同抑菌效价检测方法的原理和差异

3. 掌握牛津杯法的抑菌试验

二、实验原理

抑菌试验是指在体外测定样品的抑菌或杀菌能力。在药品、功能食品、保健品和化妆品等行业中，所用中药材提取物、天然活性物质（如多糖类、黄酮类和

精油类等）和抗生素类等物质的抑菌性能是一个重要指标。抑菌试验常用的方法

有抑菌圈法、菌落计数法、最小抑菌浓度法和比浊法等。牛津杯法属于抑菌圈法

的一种，其原理是利用待测药物在琼脂平板中扩散使其周围的细菌生长受到限制

而形成透明圈——抑菌圈，根据抑菌圈大小判定待测药物抑菌效价。它既可用于定性试验，也可用于定量分析，并且操作便捷、成本低廉、结果准确可靠，在多

个领域被广泛使用。

大蒜是百合科葱属植物，具有医食同源性，既是调味品也是天然的药剂。大蒜具有较高的营养价值，含有丰富的氨基酸、肽类、蛋白质、糖类、脂肪、无机盐、维生素以及蒜油。同时它还具有抗菌抑菌、抗癌防癌、营养保健、降血压、

抗击各种病毒侵袭、提高机体免疫力等功能。大蒜被誉为“天然广谱抗生素”，

对多种致病菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和致病性肠道细菌都有较强的抑制或

杀灭作用，其抑菌的活性成分主要是含硫化合物等挥发性物质和大蒜素等。

本实验以大蒜作为待测样品、以大肠杆菌（Escherichia coli）作为指示菌，

通过牛津杯法定量检测大蒜粗提物对大肠杆菌的抑制作用，让学生在掌握牛津杯

法抑菌实验的同时，观察到大蒜粗提液的抗菌杀菌效果，从而增加对生活中食用

大蒜对人体的抗感染和保健作用的了解。

三、 实验方法

1. 试验菌种

大肠杆菌（Escherichia coli）

2. 培养基与试剂

1) LB液体培养基：胰蛋白胨10 g (1%)；酵母提取物5 g (0.5%)；氯化钠10

g (1%)；蒸馏水1000 mL；pH值7.0~7.2。

2) LB半固体培养基（含1%琼脂）: 胰蛋白胨10 g (1%)；酵母提取物5 g

麦氏比浊管使用说明

麦氏比浊管是一种常见的实验仪器，用于测量液体的浊度。它是通过光的透射来判断液体中悬浮物的浓度的一种方法。本文将介绍如何正确使用麦氏比浊管，并提供一些建议以确保准确的测量结果。

一、

将麦氏比浊管从包装中取出，检查是否有损坏或者杂质。如果发现有问题，请及时联系供应商进行更换。

二、

清洗麦氏比浊管。在使用之前，将麦氏比浊管放入洗涤剂或肥皂溶液中浸泡一段时间。然后用清水冲洗干净，并用干净的纸巾擦干。

三、

准备待测液体。将待测液体装入一个干净的容器中，并摇匀以确保悬浮物均匀分布。确保待测液体的温度和浊度在实验要求的范围内。 四、

操作麦氏比浊管。使用胶头滴管或其他合适的工具，将待测液体滴入麦氏比浊管中。注意避免空气泡困在管内，以免影响测量结果。在填满液体后，用手指捏住麦氏比浊管的开口，并轻轻摇晃几次以确保液体和悬浮物充分混合。

五、

放置麦氏比浊管。将麦氏比浊管放置在亮度适中的背景下，例如白色纸张或光板上。确保光线均匀而充足，以便进行准确的测量。

六、

观察麦氏比浊管。通过麦氏比浊管的侧面观察液体的浊度。当液体越浑浊时，透射的光线越少，麦氏比浊管中液面的位置越难以辨认。通过比较不同液体的浊度，可以估计悬浮物的浓度。

七、

记录测量结果。根据观察到的液面位置，以及之前的经验和标准曲线等信息，将测量结果记录下来。在记录时注意准确度和完整度，以便后续的数据分析或对比。 八、

清洗麦氏比浊管。测量完成后，将麦氏比浊管立即清洗，以防止残留物的附着和污染下次的测量。使用清水和合适的清洁工具彻底清洗麦氏比浊管，并确保其完全干燥后进行储存。

九、

注意事项：在使用麦氏比浊管时，有一些注意事项需要注意。首先，避免将麦氏比浊管暴露在强光下，避免光线干扰测量结果。其次，在操作麦氏比浊管时，要注意避免刮伤或碰撞管壁，以免影响光线透过的质量。最后，在选择待测液体时，应根据实验要求选择合适的浊度范围，以确保测量结果的准确性。

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法

1.1.常量肉汤稀释法

1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。

1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围 根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。

1.1.4.接种物的制备 有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白

（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。