血液DNA快速提取方法

磁珠法全血基因组DNA 提取详细步骤及方法注意事项样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降；◆需要自备材料：无菌水、异丙醇、磁铁或磁架、1.5 ml离心管(最好低吸附的离心管)；需要去除RNA自备RNase A，在蛋白酶K消化这一步加入4 μl RNase A （100 mg/ml）；PBS。

◆已加入抗凝剂的血液样品可在2-8℃储存不超过3天（推荐使用EDTA作为抗凝剂），长期贮存请置于-70℃；◆整个过程请勿离心，以免磁珠不可逆聚集而影响提取效果。

实验准备◆冻存血液应在室温或37℃缓慢解冻，不可高温加热，以免血凝成块；将冻存的血液置于37℃摇床150-200 rpm融化，效果最佳；也可提前一天放在4℃解冻；◆磁珠用前一定要充分混匀；◆56℃加热源◆使用前需在Buffer BGW I中加入相应体积的无水乙醇。

操作步骤1. 裂解：(1)当全血样品量低于200 μl时，在全血中加入200 μl Buffer BGL、20 μl Proteinase K，56℃ 10min；(2)当全血样品量高于200 μl时，12000 rpm离心1分钟，弃上清，加入200 μl PBS缓冲液，再加入200 μl Buffer BGL、20 μl Proteinase K，56℃ 10min；2. 结合：在上述裂解液中加入400 μl 异丙醇和磁珠悬浮液(MB) 30 μl（使用前充分重悬），吹打分散磁珠；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。

3.漂洗: (1) 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer BGW 0,涡旋振荡5s，充分重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤一次。

(2) 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer BGW I,涡旋振荡5s，充分重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。

提取dna的实验步骤原理DNA提取是一项重要的实验技术，用于从细胞中分离纯净的DNA。

它在生物学、医学、犯罪学等领域具有广泛的应用。

DNA提取的过程可以分为以下几个步骤：样品收集、细胞破碎、蛋白质消化、DNA分离、洗涤、溶解和纯化。

首先，样品收集是DNA提取的第一步。

样品可以来自不同的来源，如血液、唾液、组织样本等。

对于血液样品，静脉采血是最常见的方式。

收集的血液样品需要采用抗凝剂进行预处理，以防止凝血。

细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。

细胞破碎的目的是将细胞膜以及核膜破坏，释放细胞内的DNA。

常用的细胞破碎方法有物理破碎、化学破碎和酶解法。

物理破碎一般采用高速离心仪或超声波处理，通过机械力量破坏细胞结构。

化学破碎使用适当的溶液，如细胞裂解液（例如EDTA、SDS、蛋白酶K等）来分解膜脂质和蛋白质。

酶解法则通过酶的作用来降解膜和核酸。

蛋白质消化是为了去除提取过程中的蛋白质杂质。

蛋白质会干扰DNA的纯化和测定。

在蛋白质消化过程中，常用的方法是加入蛋白酶K或肾脏酸性蛋白酶等蛋白水解酶，通过其酶解作用将蛋白质降解。

DNA分离是将DNA与其他细胞组分分离的过程。

DNA在细胞破碎后呈现为线性或环状的形态。

为了分离DNA，一般采用盐溶液和有机溶剂共同作用的方案，如添加高浓度的盐类（如NaCl）和异丙醇。

这些溶剂会沉淀细胞残渣和蛋白质，而DNA则溶于水相中。

洗涤过程是为了去除残留的蛋白质和盐类。

洗涤液一般为酒精溶液，如酒精和醋酸盐。

洗涤时，将沉淀的DNA加入洗涤液中，通过离心使DNA沉淀，然后去除上清液。

此过程重复一至三次可以有效去除杂质。

溶解是将沉淀的DNA重新溶解于缓冲液中，以便于后续的操作。

溶解液可以是Tris-EDTA缓冲液、无菌纯水等。

在加入缓冲液后，将溶液置于水浴中进行搅拌和温度控制，使DNA彻底溶解。

纯化是最后一步，目的是去除DNA提取过程中的杂质，获得纯净的DNA。

常见的纯化方法有酚-氯仿抽提法和硅胶纯化法。

1．-20度冻存1年是没有问题的，当然越低越好。

但是冻存后，用蛋白酶K法，红细胞不易裂解，必须采用特殊方法裂解。

2．建议裂解红细胞后再冻存于－80度。

因为冻融后红细胞会裂解，而且红细胞会增加蛋白污染，影响DNA抽提3．我们实验室加ACD抗凝血液，保存3年了，抽提DNA没问题（我们是先离心后分层保存，以便后续试验）！血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。

2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。

3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。

4、2500rpm离心10min，弃上清。

5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。

6、3000rpm离心10min，弃上清。

7、倒置离心管，去掉残液。

8、得白细胞，－80?C冻存。

试验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。

氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：试验试剂：Ligsisbuffer：133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。

ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。

提取缓冲液（Extractionbuffer）：10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0 .5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌试验步骤：1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。

以4000rpm，离心5min。

弃上清液。

2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。

磁珠法提取dna原理磁珠法提取DNA原理DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，磁珠法是一种常用的DNA提取方法。

磁珠法利用了磁性珠子的特性，使得DNA在磁场作用下能够与磁珠结合，从而实现DNA的快速、高效提取。

磁珠法提取DNA的原理基于亲和层析技术，其中亲和剂是磁性珠子表面的修饰物。

这些修饰物能够与DNA的特定区域结合，例如特定序列、结构或染色体上的特定区域。

磁珠法的基本步骤包括样品裂解、DNA与磁珠结合、磁珠分离、洗涤和DNA的洗脱。

样品需要经过裂解步骤，以破坏细胞膜和核膜，使DNA释放到溶液中。

裂解液中通常包含蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液，以消化细胞蛋白质。

然后，磁性珠子被加入裂解液中，这些珠子的表面修饰物能够与DNA结合。

修饰物可以是亲和剂，如亲合素或抗体，也可以是特定的DNA引物。

在结合步骤中，磁性珠子与DNA结合形成复合物。

通过磁场的作用，磁珠复合物被吸附到管壁或磁珠法专用的磁力架上，从而实现DNA的分离。

与传统的离心分离方法相比，磁珠法具有更高的纯度和回收率。

此外，磁珠复合物的形成和分离速度较快，节省了实验时间。

分离步骤通常涉及将磁力架移除至洗涤液中，以去除非特异性结合物质。

洗涤步骤可以使用乙酸盐缓冲液、乙醇或其他洗涤缓冲液来去除冗余的污染物。

洗涤后，磁力架被重新放置到洗脱液中，DNA 从磁珠上解离，溶解在洗脱液中。

洗脱液通常是低盐缓冲液或去离子水，以确保DNA的高纯度。

磁珠法提取DNA的优点不仅在于其高纯度和回收率，还在于其灵活性和可扩展性。

磁珠的表面修饰物可以根据实验需求进行选择，以实现对特定DNA序列或特定组分的选择性结合。

此外，磁珠法可应用于多种样品类型，包括血液、组织、细胞和体液等。

对于大规模的DNA提取，磁珠法可以进行高通量自动化处理，提高操作效率和样品数量。

总结起来，磁珠法提取DNA的原理是利用磁性珠子与DNA的特异性结合，通过磁场的作用将DNA分离和纯化。

这种方法具有高纯度、高回收率、灵活性和可扩展性的优点，广泛应用于分子生物学研究、临床诊断和法医学等领域。

法医实验室几种常用DNA提取方法及比较法医实验室几种常用DNA提取方法及比较(一)Chelex100法原理：Chelex100是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，起着螯合基团作用，对多价金属离子有极强亲和力。

在低离子强度、碱性及100℃煮沸条件下，可以使细胞膜裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离。

检材基质中一般含有大量金属离子，在低离子强度及加热条件下，金属离子可以辅助脱氧核糖核酸酶降解DNA，也可以抑制PCR反应，所以在提取DNA时，加入Chelex100，螯合了金属离子，防止了DNA降解，提高了PCR扩增成功率。

方法：剪取适量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、软组织等等生物检材，置于0.5ml离心管内，加入适量纯水，室温浸泡，13,000rpm离心5min，上清丢弃，管底留约20μl左右液体及检材基质，加入100-200μl 5%Chelex100(有时需加适量PK)56℃15mi n至数10小时不等，100℃8min，13,000rpm离心5mim，上清备用。

评述：1、Chelex100法已经成为DNA提取的基本方法，Chelex100法是万能的。

目前，我们一切纯化方法都在Chelex100法的基础上进行，Chelex100法又不是万能的。

2、Chelex100法提取前的检材清洗非常重要，因为现场检材往往均较脏，脏东西可以抑制PCR反应，所以往往不止清洗一次，清洗检材时可能损失部分DNA。

所以应平衡清洗抑制剂与损失DNA之间的关系。

特别强调清洗时应“把根留住”，很多情况下已知样本DNA检验失败的原因是把根没有留住。

DNA检验时还有另外一句名言：“一个萝卜一个坑”，防止混乱检材。

肝素抑制PCR反应，血红素抑制PCR反应，所以长时的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血红素。

在已知样本多次无检验结果疑为肝素抗凝的情况下，多洗是检验成功所必须的。

DNA提取步骤抗凝（20ml血+3.5mlACD）-70℃保存5ml冻存血液，室温水浴中融化+等体积PBS（5 ml），来回颠倒混匀↓（约50次）天平平衡，室温，3500g, 离心15min↓弃上清，沉淀+4ml抽提缓液，混匀（轻轻），以充分溶解沉淀（20ml血+15 ml抽提缓冲液）37℃温育1小时（泡多的DNA多）↓加蛋白酶K至终浓度达100μg/ml（血液），充分混匀（50次）(可多加5-15ml)蛋白酶K20mg/ml20μg/μl （５ml血液可加入30 μl 或35μl ) 5ml---500μg 500/20=25μl↓将裂解细胞的悬液置于50℃水浴3小时，不时旋转混匀↓冷却至室温+等体积盐饱和酚(5ml)，来回颠倒混匀（约50次）↓天平平衡，室温，5000g, 离心15min↓用大口径移液管（出口径为0.3cm）将粘稠的水相移至一洁净离心管中+1/2体积饱和酚 +1/2体积氯仿，混匀（50次）（注意：不要将絮状沉淀吸入，不要将下层血液吸入）↓天平平衡，室温， 5000g, 离心15min↓用移液管将水相移至一洁净离心管中＋１体积氯仿，混匀↓天平平衡，室温， 5000g, 离心15min↓用移液管将水相移至一洁净离心管中＋0.1V 3M乙酸钠＋１V 异丙醇稍混匀，小心别粘在盖子上，用枪头小心挑起丝状物至一干净离管↓×天平平衡，室温， 5000g, 离心 5min↓沉淀用２０％乙醇洗两次，收集DNA（多洗几次，把DNA放在壁上，用枪头吸干乙醇洗４次，无须离心）↓晾干乙醇＋２0-50μl TE液 100μl TE液（溶解DNA）↓摇床12-24小时，直至DNA完全溶解，如隔几天使用，无须摇床，DNA也能完全溶解↓测定DNA样品在260nm和280nm处的光吸收值，计算DNA纯度和浓度↓DNA于４℃下保存。

鱼类血液基因组DNA的提取1.取0.3ml血液于1.5ml离心管中，加入1/6体积(0.05ml)ACD抗凝剂，再加入1ml 0.35 %NaCl 淡水鱼生理盐溶液, 混匀,12 000 r/ min离心2 min (若上清仍带红色可加入0.35 % NaCl 再洗一次) 去上清;2.沉淀加入100μl 0.35 %NaCl 摇匀, 加入400μl 无离子水作低渗处理15 min , 13 000 r/min离心3 min , 去上清, 获乳白色沉淀( 细胞核) ;3.向沉淀中加入100 μl0135 % NaCl , 混匀, 再加入400μl 裂解液缓缓混匀后, 加入蛋白酶K (20mg/ml) 10μl , 温和混匀，置入50 ℃水浴5 h。

4.将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；5.将上层水相转入另一无菌1.5ml离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），旋涡振荡至充分混匀，12000rpm离心10min；6.将上层水相转入另一无菌1.5ml离心管中；并加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），充分振荡混匀，12000rpm离心10min；7.将上清液转移到另一无菌1.5ml离心管中；加入2倍体积的冰乙醇，1/10体积醋酸钠(NaAc)水平摇动，直到可见絮状DNA析出；8.将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15～20min，取出后再次12000rpm离心10min，使DNA沉淀；9.倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。

用700μl 70%乙醇洗涤并晃动，以洗出DNA的杂质；10.倒出乙醇，将DNA用真空干燥或自然晾干，加入适量的TE缓冲液或无菌水回溶，-20℃保存备用。

血液dna 提取流程英文回答：Blood DNA Extraction Protocol.Materials:Whole blood sample in EDTA tube.DNA extraction kit.Microcentrifuge.Pipettes and tips.Vortex mixer.Water bath or heating block.Ethanol (96-100%)。

RNase A.Procedure:1. Lysis and Proteinase K Digestion.Add 200 µL of whole blood to a microcentrifuge tube.Add 20 µL of proteinase K solution and mix thoroughly.Incubate at 56°C for 10 minutes.2. DNA Binding.Add 200 µL of lysis buffer and vortex vigorously.Add 200 µL of ethanol (96-100%) and mix thoroughly.Pipette the mixture onto a spin column and centrifugeat 14,000 x g for 1 minute.3. Washing.Add 500 µL of wash buffer 1 and centrifuge at 14,000x g for 1 minute.Add 500 µL of wash buffer 2 and centrifuge at 14,000x g for 1 minute.4. Elution.Place the spin column in a clean microcentrifuge tube.Add 50-100 µL of elution buffer and incubate at room temperature for 5 minutes.Centrifuge at 14,000 x g for 1 minute to elute the DNA.5. RNase A Treatment (Optional)。

血液中DNA提取的原理：如果以外周血为DNA提取材料，在外周血中提取DNA就是从有核的白细胞中提取DNA。

因此，从外周血中提取DNA包括以下几个关键步骤：第一，破坏红细胞，通常利用红细胞与白细胞膜结构的差异，先使红细胞裂解，经离心后收集白细胞；第二，白细胞裂解：使膜蛋白和核蛋白变性，游离DNA，通常是采用离子型表面活性剂使蛋白质变性；第三，除去变性蛋白质：通常采用蛋白沉淀剂沉淀变性蛋白质，使DNA留在上清液中；第四，在高盐环境下使DNA从有机溶剂如无水乙醇中析出。

取材取外周血5ml，EDTA抗凝1.新鲜抗凝血，离心弃去上清液；2.取出4℃冰箱预冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml 细胞压积加入6-10ml裂解液），轻轻吹打混匀；红细胞裂解液ELS配方：NH4Cl:4.15克加双蒸水500ml,取450ml;Tris:1.0297克加双蒸水50ml,再加上上面的450ml,共计500ml,高压灭菌,用时加10-20ml3.800-1000rpm离心5-8分钟，离心弃去上层红色清液；4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次；5.如裂解不完全可重复步骤2和3；6.重悬细胞，用于后续实验；提取DNA，最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液进行.酚氯仿方法提取DNA在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。

是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。

这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。

原则：（1）防止和抑制DNase对DNA的降解；（2）尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。

一、试剂准备1．TE: 10mM Tris-HCl (pH 7.8); 1mM EDTA (pH 8.0)。

2．TBS: 25mM Tris-HCl (pH 7.4); 200mM NaCl; 5mM KCl。

磁珠法提取游离dna以磁珠法提取游离DNA引言：DNA提取是生物学研究中的常用操作，它是分子生物学和遗传学研究的基础。

磁珠法提取游离DNA是一种高效、快速、准确的DNA 提取方法，广泛应用于基因组学、遗传学和临床医学等多个领域。

本文将介绍磁珠法提取游离DNA的原理、步骤和应用。

一、原理：磁珠法提取游离DNA的原理基于磁性珠子对DNA的亲和力。

磁珠是一种具有磁性的微小颗粒，表面经过修饰能够与DNA特异性结合。

在提取过程中，磁珠与DNA结合形成复合物，通过磁场的作用将复合物集中于一定位置，然后通过洗涤和离心等步骤去除杂质，最后用适当的缓冲液将DNA从磁珠上洗脱下来，得到纯净的游离DNA。

二、步骤：1. 样品处理：样品可以是血液、组织、细胞等含有DNA的生物材料。

首先，将样品进行预处理，如血液可以通过裂解红细胞膜释放DNA，组织可以经过细胞破碎等方法获得单个细胞。

2. 结合磁珠：将样品加入含有DNA结合磁珠的管子中，充分混合。

DNA在磁珠表面结合形成复合物。

3. 磁场分离：将含有复合物的管子放入磁场中，磁珠受磁力作用向管壁靠拢，使复合物沉积在管壁上。

废液中的杂质被去除，保留含有DNA的复合物。

4. 洗涤：加入适量的洗涤缓冲液，将其充分混合，然后将管子放入磁场中，使磁珠与洗涤液分离。

这一步的目的是去除残留的杂质，确保提取的DNA纯度。

5. 洗脱：加入适量的洗脱缓冲液，将其充分混合，然后将管子放入磁场中，使磁珠与洗脱液分离。

DNA从磁珠上洗脱下来，得到纯净的游离DNA。

三、应用：磁珠法提取游离DNA具有高效、快速、准确的特点，广泛应用于各个领域。

以下是一些常见的应用：1. 基因组学研究：磁珠法提取游离DNA是进行基因组DNA测序、SNP分型等研究的重要步骤。

2. 遗传学研究：磁珠法可用于提取个体DNA，用于遗传标记分析、基因突变检测等研究。

3. 临床医学：磁珠法提取游离DNA在临床诊断中有重要应用，如肿瘤基因检测、遗传病筛查等。

法医实验室几种常用DNA提取方法及比较DNA提取是法医学中常用的一项技术，用于获得从犯罪现场或是嫌疑人身上采集的样本中的DNA，从而用于分析和鉴定。

在法医实验室中，有几种常用的DNA提取方法，下面将对其进行介绍和比较。

1. 酚/氯仿提取法（Phenol/Chloroform Extraction Method）：酚/氯仿提取法是DNA提取的经典方法之一、它通过将DNA样品与酚和氯仿等有机溶剂混合后，形成两相体系，利用酚的高密度和氯仿的高挥发性质，将DNA转移到有机相中。

通过离心分离DNA和有机溶剂，最终得到纯净的DNA。

该方法能够获得高纯度的DNA，适用于各种样本（血液、组织、唾液等），但操作复杂且耗时较长。

2. 快速提取法（Rapid Extraction Method）：快速提取法是一种高效的DNA提取方法，适用于大规模样品的处理。

它利用一种化学试剂，如蛋白酶K，能够迅速裂解细胞并释放DNA。

然后通过简化的步骤，如磁珠吸附或粘附柱，将DNA从溶液中分离。

该方法操作简单、快速，适用于高通量的样本分析，如犯罪现场的大规模检材筛查。

3. 盐析法（Salting out Method）：盐析法是一种常用的DNA提取方法，利用高盐浓度可以沉淀DNA。

首先，细胞样本经过溶解后，加入高盐浓度缓冲液，使DNA与其他细胞成分分离。

然后通过离心沉淀DNA，去除上清液。

最后，通过洗涤去除溶剂和杂质，获得纯净的DNA样品。

盐析法操作简单，适用于各类样本，但提取的DNA质量可能稍差。

4. 硅胶柱法（Silica Column Method）：硅胶柱法是一种基于硅胶膜或胶珠的DNA提取方法。

这种方法通过将DNA样品与硅胶柱一起离心，使DNA吸附在硅胶上。

随后，通过洗涤去除杂质，最后用低盐缓冲液洗脱DNA，得到纯净的DNA。

硅胶柱法提取的DNA纯度和质量较高，适用于各种样品。

不过，硅胶柱价格较高，操作相对繁琐。

总体而言，这些DNA提取方法各有优劣，选择合适的方法需要考虑实验室的需求和条件。

TKM—血液DNA快速提取法
赵瑞君;赵仰星
【期刊名称】《山西医学院学报》
【年(卷),期】1996(027)001
【摘要】在临床ＰＣＲ检验中，血卟啉对酶促反应的影响不容忽视，因此在纯化
ＤＮＡ的过程中，常需将红细胞清除，以消除血卟啉对实验结果的干扰。

用ＴＫＭ法提取血液ＤＮＡ，方便、经济、快速且效果良好。

该ＤＮＡ可用于ＰＣＲ的分析，结果及为理想，完全可以替代其他血液ＤＮＡ的提取方法。

【总页数】3页(P4-6)
【作者】赵瑞君;赵仰星
【作者单位】山西医学院寄生虫学教研室;山西省肿瘤医院血研室
【正文语种】中文
【中图分类】R446.9
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2.石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值评价 [J], 杨秀媚
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