HPLC法测定紫苏叶中咖啡酸野黄芩苷和迷迭香酸的含量-杂志社
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ＡＣＴＡＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳＴＲＡＤＩＴＩＯＮＩＳＭＥＤＩＣＡＬＩＳＳＩＮＥＮＳＩＳＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＡＥＱＵＥＳＨＡＮＧＨＡＩＶｏｌ．３０Ｎｏ．４Ｊｕｌ．，２０１６
方药研０１９
ＨＰＬＣ法测定紫苏叶中咖啡酸、野黄芩苷 和迷迭香酸的含量
东北 广东天泰药业
河北安国市 安徽亳州市 河北安国市 广西玉林市 河北保定市 广西玉林市 安徽亳州市 河北安国市 广东广州市
不详
批号 ｚｓｙ１４０７２８４
２０１３０９２６ ｚｓｙ１４０７２８ ｚｓｙ１４１０２６２ ＨＹ２０１５０１１６０５ ｚｓｙ１４０７２７
１４０５１７ ｚｓｙ１４０７３０１ ｚｓｙ１３１００１ ｚｓｙ１４１０２４３ ｚｓｙ１４０７２４ ２０１３０３１８ ｚｓｙ１４０８３１２ ｚｓｙ１４０８１３１ ｚｓｙ１４１０２４２ ｚｓｙ１４０７２８１ ｚｓｙ１４０７２８５ ｚｓｙ１４０８１３３ ｚｓｙ１４０７２８３ ｚｓｙ１４１０２４１ ｚｓｙ１４１０２６１ ｚｓｙ１４０８３１１ ｚｓｙ１４０８１３２
１ 材料与方法
１．１ 仪器与材料 １．１．１ 仪器 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相系统：Ｇ１３２２Ａ 在线真 空 脱 气 机，Ｇ１３１１Ａ四 元 梯 度 泵，Ｇ１３１３Ａ自 动进 样 仪，Ｇ１３１６Ａ柱 温 箱，Ｇ１３１５Ｂ二 极 管 阵 列 检 测器，ＡｇｉｌｅｎｔＣｈｅｍ Ｓｔａｔｉｏｎ工作站（安 捷 伦 科 技 有 限 公司，美国）；电子天平（ＳａｒｔｏｒｉｕｓＢＰ２１１Ｄ，德国），超 声波 清 洗 器 （型 号 ３５１０ＥＤＴＨ，频 率 ４０ｋＨｚ，美 国 Ｂｒａｎｓｏｎ），ＭｉｌｌｉＱＳｙｎｔｈｅｓｉｓＡ１０Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ， 美国 Ｂｅｄｆｏｒｄ）。 １．１．２ 材料 乙腈（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＬＯＴ１４１２２１） 和冰醋酸（ＣＮＷ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＬＯＴＭ２０９Ｋ１３２）为色 谱级，甲醇为分析级，水为超纯水。咖啡酸（ＬＯＴ３０ ２００１）、野黄芩苷 （ＬＯＴ０５１０１３）和迷迭香酸 （ＬＯＴ ３０２０１７）均购自上海中药标准化研究中心，纯度 ＞ ９８％。紫苏叶药材信息见表 １，标本存放在上海中 药标准化研究中心标本室。 １．２ 实验方法 １．２．１ 对照品溶液制备 取咖啡酸、野黄芩苷和 迷迭香酸 适 量，精 密 称 定，溶 于 甲 醇，分 别 配 制 成 １ｍｌ各含 ５０μｇ的咖啡酸、野黄芩苷和迷迭香酸的 单个对照品溶液和混合对照品溶液。
［基金项目］ 国家中医药管理局中医药行业科研专项项目 （２０１３０７００２） ［作者简介］ 胡惠军，女，在 读 硕 士 生，主 要 从 事 中 药 活 性 成分与质量标准研究 ［通讯作者］ 谷丽华，副研究员，硕士生导师； Ｅｍａｉｌ：ｇｕｌｉｈｕａ１２２８＠１６３．ｃｏｍ
咖啡酸、野 黄 芩 苷 和 迷 迭 香 酸 进 行 含 量 测 定，以 期 对紫苏叶质量标准的制定和提升提供参考和依据。
紫 苏 叶 是 唇 形 科 紫 苏 属 植 物 紫 苏 Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ（Ｌ．）Ｂｒｉｔｔ．的干燥叶，为常用中药，具有解 表散寒、行气和胃之功效，临床上用于风寒感冒、咳 嗽呕恶、胸腹胀满、妊娠呕吐、鱼蟹中毒等症［１］。紫 苏叶化学成分主要含挥发油［２］和黄酮及酚酸类［３］， 其次含三萜酸［４］，紫色紫苏叶还含有花青素［３］。挥 发油是紫 苏 叶 的 重 要 活 性 成 分，紫 苏 叶 挥 发 油 组 分［５７］及药理报道［８９］已经很多，但由于人们尚未发 现其组分的巨大差异与活性有何相关性，因此通常 以总紫苏油作为紫苏叶的一个质量评价指标。值 得一提的是，除 了 挥 发 油，黄 酮 和 酚 酸 两 大 类 成 分 在紫苏叶中所 占 比 例 非 常 大 ［３，１０］，且 与 其 功 效 相 关 的药理活性研究报道也很多，如抗炎、抗氧化等，是 紫苏叶质量评价不应忽视的部分。我们对市售的 紫苏叶进行 ＬＣＭＳ分析，发现紫苏叶醇提取物中咖 啡酸、木犀草素 ７Ｏ二葡萄糖醛酸苷［１１］、野黄芩苷 和迷迭香酸为所有紫苏叶中主要的共有成分，但由 于木犀草素 ７Ｏ二葡萄糖苷对照品难以获得，因此 本研究拟建立高效液相含量测定方法，对紫苏叶中
上海中医药大学学报 第 ３０卷 第 ４期 ２０１６年 ７月
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表 １ 紫苏叶样品来源
编号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３
收集地 广西玉林市
东北 河南辉县市 河北安国市 上海雷允上 河南辉县市 安徽亳州市 河南禹州市 安徽福春堂 安徽亳州市 北京同仁堂
１．２．２ 供试品溶液制备 取 ０．５ｇ紫苏叶药材粉 末（过 ２号筛），精密称定，置 １００ｍｌ圆底烧瓶中，加 ６０％甲醇 ５０ｍｌ，称定质量，８０℃回流 ２ｈ，冷却至室 温，用 ６０％甲醇补足质量，混匀，经 ０．４５μｍ的微孔 滤膜过滤，取续滤液，即得。 １．２．３ 色谱条件 ＦｏｒｔｉｓＸｉＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ× ４．０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙腈（Ａ）０．２％冰醋酸水 溶液（Ｂ）梯 度 洗 脱 （０～１５ｍｉｎ，１５％～２２％ Ａ；１５～ ３０ｍｉｎ，２２％～２４％Ａ）；检测波长为 ３３０ｎｍ，流速为 １ｍｌ／ｍｉｎ；柱温 ２５℃；进样量 １０μｌ。 １．２．４ 测定方法 分别精密吸取供试品溶液和对 照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图 １） 及咖啡酸、野黄芩苷、迷迭香酸的峰面积，在 １．２．３ 项色谱条件 下，紫 苏 叶 供 试 品 溶 液 在 与 咖 啡 酸、野 黄芩苷和迷迭香酸对照品色谱峰相应的保留时间 处检测出色谱峰。
胡惠军，谷丽华，鱺桂新
上海中医药大学中药研究所，上海中药标准化研究中心 （上海 ２０１２０３）
【摘 要】 目的：建立同时测定紫苏叶中咖啡酸、野黄芩苷和迷迭香酸的 ＨＰＬＣ方法。方法：采用 ＦｏｒｔｉｓＸｉ Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．０ｍｍ，５μｍ），以乙腈０．２％冰醋酸为流动相进行梯度洗脱，柱温为 ２５℃，体积流量 为 １ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长 ３３０ｎｍ，进样量 １０μｌ。结果：３个被测成分在各自测定的线性范围内线性良好，ｒ≥ ０．９９９９，加样回收率范围分别为 ９７．７４％、９８．７６％、１０１．５％，ＲＳＤ分别为 １．７％、３．１％和 ２．３％。结论：所 建立的方法操作简单，稳定性和重复性好，可用于紫苏叶药材中咖啡酸、野黄芩苷和迷迭香酸含量的测定。 【关键词】 紫苏叶；含量测定；ＨＰＬＣ；咖啡酸；野黄芩苷；迷迭香酸
ＡＣＴＡＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳＴＲＡＤＩＴＩＯＮＩＳＭＥＤＩＣＡＬＩＳＳＩＮＥＮＳＩＳＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＡＥＱＵＥＳＨＡＮＧＨＡＩＶｏｌ．３０Ｎｏ．４Ｊｕｌ．，２０１６
方药研０１９
ＨＰＬＣ法测定紫苏叶中咖啡酸、野黄芩苷 和迷迭香酸的含量
东北 广东天泰药业
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不详
批号 ｚｓｙ１４０７２８４
２０１３０９２６ ｚｓｙ１４０７２８ ｚｓｙ１４１０２６２ ＨＹ２０１５０１１６０５ ｚｓｙ１４０７２７
１４０５１７ ｚｓｙ１４０７３０１ ｚｓｙ１３１００１ ｚｓｙ１４１０２４３ ｚｓｙ１４０７２４ ２０１３０３１８ ｚｓｙ１４０８３１２ ｚｓｙ１４０８１３１ ｚｓｙ１４１０２４２ ｚｓｙ１４０７２８１ ｚｓｙ１４０７２８５ ｚｓｙ１４０８１３３ ｚｓｙ１４０７２８３ ｚｓｙ１４１０２４１ ｚｓｙ１４１０２６１ ｚｓｙ１４０８３１１ ｚｓｙ１４０８１３２
１ 材料与方法
１．１ 仪器与材料 １．１．１ 仪器 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相系统：Ｇ１３２２Ａ 在线真 空 脱 气 机，Ｇ１３１１Ａ四 元 梯 度 泵，Ｇ１３１３Ａ自 动进 样 仪，Ｇ１３１６Ａ柱 温 箱，Ｇ１３１５Ｂ二 极 管 阵 列 检 测器，ＡｇｉｌｅｎｔＣｈｅｍ Ｓｔａｔｉｏｎ工作站（安 捷 伦 科 技 有 限 公司，美国）；电子天平（ＳａｒｔｏｒｉｕｓＢＰ２１１Ｄ，德国），超 声波 清 洗 器 （型 号 ３５１０ＥＤＴＨ，频 率 ４０ｋＨｚ，美 国 Ｂｒａｎｓｏｎ），ＭｉｌｌｉＱＳｙｎｔｈｅｓｉｓＡ１０Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ， 美国 Ｂｅｄｆｏｒｄ）。 １．１．２ 材料 乙腈（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＬＯＴ１４１２２１） 和冰醋酸（ＣＮＷ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＬＯＴＭ２０９Ｋ１３２）为色 谱级，甲醇为分析级，水为超纯水。咖啡酸（ＬＯＴ３０ ２００１）、野黄芩苷 （ＬＯＴ０５１０１３）和迷迭香酸 （ＬＯＴ ３０２０１７）均购自上海中药标准化研究中心，纯度 ＞ ９８％。紫苏叶药材信息见表 １，标本存放在上海中 药标准化研究中心标本室。 １．２ 实验方法 １．２．１ 对照品溶液制备 取咖啡酸、野黄芩苷和 迷迭香酸 适 量，精 密 称 定，溶 于 甲 醇，分 别 配 制 成 １ｍｌ各含 ５０μｇ的咖啡酸、野黄芩苷和迷迭香酸的 单个对照品溶液和混合对照品溶液。
［基金项目］ 国家中医药管理局中医药行业科研专项项目 （２０１３０７００２） ［作者简介］ 胡惠军，女，在 读 硕 士 生，主 要 从 事 中 药 活 性 成分与质量标准研究 ［通讯作者］ 谷丽华，副研究员，硕士生导师； Ｅｍａｉｌ：ｇｕｌｉｈｕａ１２２８＠１６３．ｃｏｍ
咖啡酸、野 黄 芩 苷 和 迷 迭 香 酸 进 行 含 量 测 定，以 期 对紫苏叶质量标准的制定和提升提供参考和依据。
紫 苏 叶 是 唇 形 科 紫 苏 属 植 物 紫 苏 Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ（Ｌ．）Ｂｒｉｔｔ．的干燥叶，为常用中药，具有解 表散寒、行气和胃之功效，临床上用于风寒感冒、咳 嗽呕恶、胸腹胀满、妊娠呕吐、鱼蟹中毒等症［１］。紫 苏叶化学成分主要含挥发油［２］和黄酮及酚酸类［３］， 其次含三萜酸［４］，紫色紫苏叶还含有花青素［３］。挥 发油是紫 苏 叶 的 重 要 活 性 成 分，紫 苏 叶 挥 发 油 组 分［５７］及药理报道［８９］已经很多，但由于人们尚未发 现其组分的巨大差异与活性有何相关性，因此通常 以总紫苏油作为紫苏叶的一个质量评价指标。值 得一提的是，除 了 挥 发 油，黄 酮 和 酚 酸 两 大 类 成 分 在紫苏叶中所 占 比 例 非 常 大 ［３，１０］，且 与 其 功 效 相 关 的药理活性研究报道也很多，如抗炎、抗氧化等，是 紫苏叶质量评价不应忽视的部分。我们对市售的 紫苏叶进行 ＬＣＭＳ分析，发现紫苏叶醇提取物中咖 啡酸、木犀草素 ７Ｏ二葡萄糖醛酸苷［１１］、野黄芩苷 和迷迭香酸为所有紫苏叶中主要的共有成分，但由 于木犀草素 ７Ｏ二葡萄糖苷对照品难以获得，因此 本研究拟建立高效液相含量测定方法，对紫苏叶中
上海中医药大学学报 第 ３０卷 第 ４期 ２０１６年 ７月
·８１·
表 １ 紫苏叶样品来源
编号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
１０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３
收集地 广西玉林市
东北 河南辉县市 河北安国市 上海雷允上 河南辉县市 安徽亳州市 河南禹州市 安徽福春堂 安徽亳州市 北京同仁堂
１．２．２ 供试品溶液制备 取 ０．５ｇ紫苏叶药材粉 末（过 ２号筛），精密称定，置 １００ｍｌ圆底烧瓶中，加 ６０％甲醇 ５０ｍｌ，称定质量，８０℃回流 ２ｈ，冷却至室 温，用 ６０％甲醇补足质量，混匀，经 ０．４５μｍ的微孔 滤膜过滤，取续滤液，即得。 １．２．３ 色谱条件 ＦｏｒｔｉｓＸｉＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ× ４．０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙腈（Ａ）０．２％冰醋酸水 溶液（Ｂ）梯 度 洗 脱 （０～１５ｍｉｎ，１５％～２２％ Ａ；１５～ ３０ｍｉｎ，２２％～２４％Ａ）；检测波长为 ３３０ｎｍ，流速为 １ｍｌ／ｍｉｎ；柱温 ２５℃；进样量 １０μｌ。 １．２．４ 测定方法 分别精密吸取供试品溶液和对 照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图 １） 及咖啡酸、野黄芩苷、迷迭香酸的峰面积，在 １．２．３ 项色谱条件 下，紫 苏 叶 供 试 品 溶 液 在 与 咖 啡 酸、野 黄芩苷和迷迭香酸对照品色谱峰相应的保留时间 处检测出色谱峰。
胡惠军，谷丽华，鱺桂新
上海中医药大学中药研究所，上海中药标准化研究中心 （上海 ２０１２０３）
【摘 要】 目的：建立同时测定紫苏叶中咖啡酸、野黄芩苷和迷迭香酸的 ＨＰＬＣ方法。方法：采用 ＦｏｒｔｉｓＸｉ Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．０ｍｍ，５μｍ），以乙腈０．２％冰醋酸为流动相进行梯度洗脱，柱温为 ２５℃，体积流量 为 １ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长 ３３０ｎｍ，进样量 １０μｌ。结果：３个被测成分在各自测定的线性范围内线性良好，ｒ≥ ０．９９９９，加样回收率范围分别为 ９７．７４％、９８．７６％、１０１．５％，ＲＳＤ分别为 １．７％、３．１％和 ２．３％。结论：所 建立的方法操作简单，稳定性和重复性好，可用于紫苏叶药材中咖啡酸、野黄芩苷和迷迭香酸含量的测定。 【关键词】 紫苏叶；含量测定；ＨＰＬＣ；咖啡酸；野黄芩苷；迷迭香酸
