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番鸭细小病毒病的防治
本病又称传染性喘泻病，俗称“三周病”，是一种由细小病毒引起的仅发生于雏番鸭的以腹泻、喘气、软脚为主要症状，高度接触性、急性、败血性传染病。
(l)病原。
本病病原是细小病毒科、细小病毒属的番鸭细小病毒。
可在番鸭胚中增殖，并能致死10-12日龄鸭胚，也能在鸭胚原代细胞中增殖，且病毒滴度很高。
本病毒对紫外线照射敏感，但对乙醚、氯仿、胰蛋白酶、酸、热均不敏感。
不能凝集哺乳动物、禽类和人类的红细胞。
(2)流行病学。
本病主要发生于8-18日龄的雏番鸭。
一般4-5日龄初见发病，10日龄左右达到高峰，以后逐日减少，20日龄以后表现为零星发病。
偶尔在30日龄的番鸭也见发病，但死亡率较低，病鸭往往生长发育不良。
其自然感染死亡率为300/-80%，最高达100%。
该病的发生无明显季节性，我国南方温度较高，湿度较大，易发生本病。
康复鸭长期带毒，是主要传染源。
病毒也可污染种蛋，引起传播。
本病主要是通过接触传染，污染物经过消化道进入体内引起感染。
(3)症状。
本病的潜伏期一般为4-16天，最短2天。
病程随日龄的不同可分为最急性、急性和亚急性三型。
6日龄的病雏多为最急性型，多数病例不表现早期症状，仅数小时即衰竭，倒地死亡，有的临死前两脚乱划，头颈向一侧扭曲。
7-21日龄的病例一般为急性型，病雏主要表现为精神萎顿，羽毛蓬松、直立，两翅下垂，两脚无力。
有不同
1。
雏番鸭细小病毒病防治措施文章摘要：雏番鸭细小病毒病又称雏番鸭“三周病”或喘泻症，是由细小病毒引起的专一侵害雏番鸭的一种急性或亚急性、高度接触性传染病。
1.流行特点本病多流行于饲养番鸭较多的地区，一年四季均可发病，但以冬春季...雏番鸭细小病毒病又称雏番鸭“三周病”或喘泻症，是由细小病毒引起的专一侵害雏番鸭的一种急性或亚急性、高度接触性传染病。
1.流行特点本病多流行于饲养番鸭较多的地区，一年四季均可发病，但以冬春季发病较多。
本病在自然情况下只有雏番鸭发病，7～35日龄为该病的易感日龄，尤以7～20日龄最易感。
一般发病的死亡高峰在10～18日龄，自然感染该病的3周龄内雏番鸭群的发病率为27%～62%，而病死率为22%～43%，且随着日龄的增长其发病率及病死率也随之下降。
病愈鸭大多成为僵鸭。
人工感染试验表明经肌肉、皮下、腹腔、滴鼻和口服等各种途径都可引起雏番鸭感染发病。
2.临床症状本病多呈急性或亚急性经过，患病雏番鸭精神沉郁，食欲不振或废绝，怕冷；腹泻，粪便呈绿色或灰白色，常黏附于肛周羽毛；软脚，行走不便，喜蹲伏；多数病鸭呼吸困难，甩头流鼻涕，严重时张口呼吸或喘气。
病后期喙发绀，喘气频繁，最后衰竭而死。
病程一般2～5天，有的达1周以上。
少数耐过的雏番鸭成为生长不良的僵鸭，个体小、明显消瘦。
3.剖检病变病死雏番鸭的病变主要为胰腺苍白或充血，局灶性或整个表面出血，表面有数量不等的针尖大、灰白色的坏死点；肝稍肿大，胆囊胀大；少数病例脾脏肿大，充血；肠道均有明显的病变，肠黏膜呈卡他性炎症，黏膜有少量出血点，肠壁变薄，肠内容物呈淡白色或灰黄色；肾脏呈暗红色或灰白色，似煮熟样；其他脏器未见明显变化。
4.诊断该病可根据其流行病学和特征性的临床症状、病理变化做出初步诊断，确诊需应用实验室手段。
在临诊上该病易与雏番鸭小鹅瘟、雏番鸭流感、雏番鸭出血症、雏番鸭肝炎等相混淆，需根据各病的临诊特征加以鉴别。
5.防治方法除保持孵坊的清洁卫生和加强雏番鸭饲养管理外，预防该病最重要的措施为免疫接种。
番鸭细小病毒特效药番鸭细小病由细小病毒引起，是雏番鸭的一种急性传染病。
病理变化是纤维素性肠炎、胰脏呈点状坏死，以3周龄内的雏番鸭多发，最早是3日龄发病。
病鸭张口呼吸、喘气，消瘦、拒食、蹲伏，十二指肠内容物呈松散栓子状，表层有脱落的黏膜附着。
1日龄用番鸭二联苗每羽皮下注射1头份。
发病鸭每羽肌肉注射番鸭二联高免血清1～2毫升，可适当加入氨苄青霉素或庆大霉素等抗菌类药以防继发感染。
特点：治疗小鹅瘟、鹅副黏、鸭瘟、鸭流感、鸭副粘、番鸭细小病毒等混合感染，一针治愈。
【商品名】鸭毒抗（北京国浩高科）--番鸭细小病毒特效药【主要成份】维生素C（载体为鸭同源精制血清抗体）【药理作用】本品是用引起鸭瘟、鸭流感、鸭副粘、番鸭细小病毒等病毒病原浓缩精制疫苗免疫健康鸭群，产生高效价抗体后，收集血清，采用酶切技术提取IgG、IgM、IgA Fab片段加保护剂制备而成。
IgG是血清中最主要的抗体蛋白，占总免疫球蛋白量的75％，能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用），中和细菌毒素的毒性（中和毒素）以及与病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）；IgM在抗感染免疫的早期起着十分重要的作用；血清型IgA可介导调理吞噬ADCC 作用，分泌型IgA是机体粘膜防御系统的主要成分，是防止病原体入侵机体的第一道防线。
【适应症】本品对鸭瘟、鸭流感、鸭副粘、番鸭细小病毒、小鹅瘟、鹅副黏等病毒性疾病的紧急预防和治疗有特效。
【用法用量】肌肉注射；1ml/kg，预防量减半。
【注意事项】1、注射：本品打开后应在24小时内用完，勿与活疫苗同时使用。
2、若有细菌混合感染，应配合抗生素同时使用。
【包装】250ml/瓶×30瓶/件【贮藏】避光，阴凉处常温可保存6个月，冷藏时间更长，可保存1-2年。
建议冷藏保存。
番鸭细小病毒病的诊治番鸭细小病毒病，是由番鸭细小病毒（Duck Hepatitis A Virus, DHAV）引起的一种急性传染病，主要感染番鸭（Anas platyrhynchos domesticus）。
该病在全球范围内广泛分布，感染病禽可引起高度的死亡率，对养殖业造成严重经济损失。
本文将就番鸭细小病毒病的诊断和治疗进行详细阐述。
一、病因和发病机制番鸭细小病毒病的病原为DHAV，属于皮肤黏膜T细胞淋巴瘤毒科（Picornaviridae）的鸟细小病毒属（Avihepatovirus）。
该病毒具有强烈的传染性，可通过飞沫、接触传播。
感染番鸭后，病毒首先在消化系统中繁殖，然后进入血液循环，通过血液传播到全身各个器官。
病毒主要攻击肝脏，导致炎症和坏死，进一步引起肝功能损伤。
二、临床症状番鸭细小病毒病的潜伏期一般为5-7天，临床症状主要包括：1. 急性高热：患病番鸭体温急剧上升，可达40-41℃。
2. 消化系统症状：患病番鸭食欲减退，出现厌食、嗜睡和胁腹膨胀。
3. 神经系统症状：严重感染可引起神经系统症状，如短暂的抽搐、战栗、羽毛不整和行动迟缓。
4. 肝脏病变：患病番鸭肝脏肿大，肝组织出现充血、坏死和出血灶。
5. 粪便改变：患病番鸭的粪便颜色变浅，甚至呈黄绿色。
三、诊断番鸭细小病毒病的诊断主要依靠临床症状和病理学检查，辅以实验室检测。
1. 病死鸭的病变分析：对死亡番鸭的病理解剖可以观察到肝脏肿大、出血、坏死和充血等病变。
2. 病理学检查：对患病番鸭的肝脏进行组织切片检查，发现肝细胞核内包涵体（称为ABB状物）可以进一步确诊。
3. 病毒分离和鉴定：通过对病死鸭体内的肝脏或肠道等样本进行病毒分离和鉴定，可通过免疫荧光抗体法（IFA）或酶联免疫吸附试验（ELISA）检测病毒的存在。
四、治疗番鸭细小病毒病目前尚无特效药物，且该病的传染性极强，防控更为重要。
对于感染的番鸭，采取以下措施进行治疗：1. 隔离患病鸭：将患病番鸭与健康番鸭进行分离，以防止病毒传播。
番鸭细小病毒病的诊治番鸭细小病毒病（Duck Tembusu Virus Disease）是由番鸭细小病毒（Duck Tembusu Virus，DTMUV）引起的一种急性、传染性的家禽疾病。
该病在我国呈现广泛流行的趋势，给养殖业生产造成了较大经济损失。
下面将详细介绍番鸭细小病毒病的诊治。
番鸭细小病毒病的临床特征主要包括精神沉郁，食欲不振，消瘦乏力，腹泻、呼吸困难、鼻眼分泌物增多，并且可能严重影响番鸭的生产性能。
患病鸭群中死亡率会明显升高，且母鸭可能发生不育症状，导致孵化率下降。
对于番鸭细小病毒病的诊断，主要通过临床症状、病理解剖和实验室检测进行确定。
临床诊断主要基于疫情特点和反应参考，如大批鸭群短期内出现高死亡率、神经症状以及骨骼肌麻痹等。
病理解剖时应注意检查鸭的心肌、脾脏、肾脏、肝脏等器官。
实验室检测主要通过血清学检测、病毒分离、PCR检测等方法进行。
针对番鸭细小病毒病的防治措施主要包括以下几个方面：1. 防疫措施：做好番鸭场的衛生条件，定期消毒场地和设备，加强饲料、饮水的卫生管理，尽量减少疫源的传播。
2. 合理养殖管理：严格控制番鸭场的外来动物、人员进出，避免交叉感染的发生。
保持场地的通风良好，避免积水，减少蚊虫等传播媒介的滋生。
3. 疫苗接种：选择有效的疫苗进行接种，提高番鸭的免疫能力，减轻病毒感染的严重程度。
4. 药物治疗：针对病毒感染引起的症状，及时使用抗生素、抗病毒药物等进行治疗，缓解症状，促进番鸭康复。
番鸭细小病毒病是一种严重的传染性疾病，对番鸭养殖业产生了较大的影响。
通过加强防疫措施、合理养殖管理、疫苗接种和药物治疗，可以降低该病的发生率和死亡率，保障番鸭养殖业的健康发展。
加强病毒病的监测和早期预警，及时采取相应措施，控制病情的扩散，确保养殖业的生产安全。
《上海畜牧兽医通讯》２０１１年第２期 ・ ４５ ・ 番鸭细小病毒在番鸭胚成纤维细胞上的培养 阮二垒 陈申秒 朱秀高 张西营 王金生 （山东滨州沃华生物工程有限公司 山东滨州 ２５６６０６）
番鸭细小病毒病是由番鸭细小病毒（Ｍｕｓｃｏｖｙ Ｄｕｃｋ Ｐａｒｖｏｖｒｉｕｓ，ＭＤＰＶ）引起的侵袭雏鸭为主的一种急性传染 病，临床上以喘气、腹泻及胰脏坏死和出血为主要特征，发病 率和死亡率可达４Ｏ ～５Ｏ ，是目前番鸭饲养业中危害最严 重的传染病之一 。本文着重研究番鸭细小病毒在番鸭胚 成纤维细胞内增殖。 番鸭细小病毒（ＭＤＰＶ）为细小病毒科、细小病毒属新成 员。ＭＤＰＶ外观呈圆形或六边形，无囊膜，正二十面体对称。 病毒粒子为２２～２５ ｎｍ。ＭＰＶ在氯化铯密度梯度离心沉 淀时出现３条带，浮密度分别为１．２８～１．３０ ｇ／ｃｍ。、 １．３２ ｇ／ｃｍ。、１．４２ ｇ／ｃｍ。。对乙醚、氯仿、胰蛋向酶、酸、热有 ｝｝｝＊｝｝｝｝｝｝｝｝ ｝泞｝｝｝｝｝｝＊÷＊＿｝＊÷＊｝｝ 泞｝｝｝｝ ｝ ｝泞｝ ＊｝＊｝｝ ＊｝｝： 存在，微牛物在这些物种问的交流亦是非常广泛的。细菌的 耐药性是由耐药质粒介导的，耐药质粒可以在不同细菌间传 播和扩散 ，因此开展鸭沙门氏菌的药物敏感性检测具有 重要的公共卫牛意义。 ３．３ 本次试验对玉林地区规Ｎ－化鸭场２００７～２００９年分离 的５Ｏ株鸭源致病性沙门氏菌，对３７种抗菌药物的敏感性测 定的结果表明，鸭源沙门氏菌耐药的普遍程度令人吃惊，５Ｏ 株沙门氏菌都是多重耐药菌株（４耐以上），其中耐药１７种以 上的菌株占６４ ，耐药率达５Ｏ 以上的药物有１７种，比食 品源或鸡源沙门氏菌的耐药情况更严重”’ 。 参考文献 ［１］张燕，朱超．我国沙门氏菌病和菌型分布概况［Ｊ］．现代预防医学， ２００２，２９（３）：４００～４０１． Ｃ２３Ｓａｉｌ Ｙ Ｍ，Ｂａｒｎｅｓ Ｈ Ｊ，Ｇｌｉｓｓｏｎ Ｊ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ Ｐｏｕｌｔｒｙ［Ｍ］． Ａｍｅｓ：Ｉｏｗａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２００３，５６７～６１４． （３ｂＡ Ａ ＴｙｃｅＢ著，杨锡林，译．禽沙门氏菌病的预防及减少微生物对 禽侗体的污染［Ｊ］．肉品卫生，１９９８，１１：２８～２９． （４３王茂起，冉陆，王竹天，等．２００１年巾围食源性致病菌及其耐药性 主动监测研究ＣＪ］．卫生研究，２００４，３３（１）：４９～５４． ［５］Ｔｓｅｎ Ｈ Ｙ，Ｈ Ｈ Ｈｕ，Ｊ Ｓ Ｉ．ｉｎ，ｅｔ ａ１．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙ ｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｆｏｏｄ——ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｃａｓｅｓ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｕｂ ｔｙｐｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，１７：１４３～ｌ５２． ［６］吕殿红，张毓金．樱桃谷鸭感染猪霍乱沙门氏菌的分离鉴定ＣＪ］． 中围预防兽医学报，２００２，２４（４）：２８３～２８５． ｒ７３潘志明，焦新安，刘文博，等．鸡白痢沙门氏菌耐药性的监测研究 ＣＪ］．畜牧兽医学报，２００２，３３（４）：３７７～３８３． ［８］王红宁，刘书亮，陶勇，等．规模化猪场致病性大肠杆菌、沙门氏凶 药敏区系调查ＣＪ３．西南农业学报，２０００，１３（Ｓｕｐｐ１）：８４～９Ｏ 抵抗力，对紫外线照射敏感；对鸡、麻鸭、番鸭、鹅、鸽、兔、豚 鼠、绵羊、猪、牛和人Ｉ型红细胞均无凝集作用 ～ 。 ＭＤＰＶ进行初代分离只能在鹅胚或番鸭胚上复制，不易 在其他禽胚内复制。接种的易感胚可见绒毛尿囊膜增厚，胚 胎充血，头、背、胸、翅和趾部均有大小不等的ｍ血点，胚胎死 亡时间一般在接种后３～７ ｄ。病毒对番鸭胚、鹅胚致死率分 别为８３ ～９３ 、１００ ，对鸡胚无致病性。胚体适应毒能在 鹅胚、番鸭胚或这类胚制成的纤维细胞以及番鸭胚肾细胞上 增殖，病毒适应细胞后，形成淡染的小蓝蚀斑，不能在鸡胚成 纤维细胞（ＣＥＦ）、地鼠肾传代细胞（ＢＨＫ２１）和非洲绿猴肾传 代细胞（Ｖｅｒｏ）上增殖。
（９３ Ｕ Ｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｆｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｓｅｒｖ— ｉｃｅ．Ｉｎｔｅｒｉｍ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｒａｗ ｎｌｅａｔ ａｎｄ ｐｏｕｌｔｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｒ］．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ Ｃ ２０００． ［１０１谢正汤，吴挹芳．现代微生物培养基和试剂手册［Ｍ］．福建：福建 科学技术出版社，１９９４，４１１～４１ ５． ［１１］马绪荣，苏德模．药品微生物学检验手册［Ｍ３．北京：科学出版 社，２０００，１０６～１２１． ［ｉ２１杨正时，房海．人及动物病原细菌学［Ｍ］．河北：河北科学技术出 版社，２００３，１７８３～１７８７． ［１３］Ｕ Ｓ Ｉ）ｅｐａｒｔｒｎｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ．Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ：ｈａｚａｒｄ ａ— ｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｐｏｉｎｔ（ＨＡＣＣＰ）ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｆｅｄ Ｒｅｇ、 １９９５，６０：６７７４～６８８９． ［１４１ Ｍｃａｄ Ｐ Ｓ，Ｉ Ｓｌｕｔｓｋｅｒ，Ｖ Ｄｉｅｔ Ｉ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｆｏｏｄ—ｒｅｌａｔｅｄ ｉｌｌｎｅｓｓ ａｎｄ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ［Ｊ］．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，ｌ９９９，５： ６Ｏ７～６２５． ［１５３ Ｔａｕｘｅ Ｒ Ｖ．Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ：Ａ ｐｏｓｔｍｏｄｅｒｎ ｐａｔｈｏｇｅｎ［Ｊ］．Ｊ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ，ｌ９９１，５４：５６３～５６８． ［１６］Ｅｂｅｌ Ｅ，Ｗ Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｎｎｕａｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｇｇｓ ｃｏｎ～ ｔａｍｉｎａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ（Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，６ｌ：５１～６２． ［１７１ Ｈｏｇｕｅ Ａ，Ｐ Ｗｈｉｔｅ，Ｊ Ｇｕａｒｄ Ｐｅｔｔｅｒ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｅｇｇ——ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ［Ｊ］．Ｒｅｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈ Ｏｆｆ Ｉｎｔ Ｅｐｉｚ，１９９７，１６： ５４２～５５３． ［１８］吴承龙．细菌Ｒ质粒在菌群中的转移及细菌耐药性扩散（Ｊ３．中 国人兽共患病杂志，１９９８，１４（６）：４９～５Ｏ． ［１９］刘渠，刘衡川，李灶平，等．食品中沙门氏菌的耐药性研究（Ｊ３．现 代预防医学，２００４，３１（３）：３３０～３３２． ・ ４６ ・ 《上海畜牧兽医通讯》２０１１年第２期 １材料与方法 １．１ 材料 非免疫受精种鸭蛋，Ｆ一１０ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ（Ｈａｍ）ＧＢ ＣＯ ＢＲＩ 产品，Ｍｅｄｉｕｍ １９９ＧＩＢＣＯ ＢＲＩ 产品。初生犊牛血 清（ＮＢＳ），１．５ Ｉ 一谷氨酰胺，胰蛋白酶（１：２５０）。营养液： （１）基础营养基＋８ ～１Ｏ ＢＳ；（２）基础营养基＋６ ～８ ＢＳ；（３）基础营养基＋４ ～６ ＢＳ；（４）Ｌ一谷氨酰胺（终浓度 为１ ）营养液。维持液：（１）基础营养基（不含ＮＢＳ）；（２）基 础营养基＋１ ～２ ＮＢＳ；（３）基础营养基＋３ ～４ ＮＢＳ； （４）Ｌ一谷氨酰胺（终浓度为ｌ ）维持液。 １．２ 方法 １．２．１基础营养基的配制 （１）按使用说明书方法，将Ｆ １Ｏ和１９９各一袋混匀于 ２ ０００ ｍｌ无钙镁ＰＢＳ液，０．２２ ｎｌ微孔滤膜过滤除菌，经无菌 检验合格后，用７．５ ＮａＨＣＯ。溶液将基础营养基ｐＨ分别 调至６．５～６．８、６．８～７．０、７．０～７．２、７．２～７．４、７．４～７．６、 ７．６～７．８和７．８－－８．０等，低温保存备用。 １．２．２原代番鸭胚成纤维细胞的制备 （１）取胚：取１０～１３日龄发育良好的鸭胚，气室向上置 于蛋盘内，无菌取出胚体，去除头、翅、爪和内脏，用Ｈａｎｋ’Ｓ 液冲洗２～３次以去除残留血液及胚液。 （２）剪切：用剪刀将胚体充分剪碎为０．５～ｌ ｍｍ。的小 块，用５倍体积的Ｈａｎｋ’ｓ液反复洗涤２～３次至悬液清亮。 （３）消化：将洗涤过的组织块加１Ｏ倍体积的０．２５ 胰酶 液后，直接放入３７℃水浴锅中，或温箱中温育１０ ｍｉｎ。 （４）洗涤：将消化物用５倍体积的Ｈａｎｋ’Ｓ液轻轻浸洗２ ～３次，至悬液清亮。 （５）吹打：加入预温的营养液洗涤一次，留适量残余液反 复吹打细胞匀浆，加入营养液进一步悬浮细胞，并用４层纱 布过滤去杂。 （６）细胞计数：用血球计数板做细胞计数后，补加适量营 养液，使每毫升约含１×１０ 个细胞。 （７）分瓶培养：按每瓶８～１Ｏ ｍ１装入细胞瓶中，置３７￣Ｃ 恒温箱中静置培养。每隔４～６ ｈ观察细胞贴壁生长状况。 （８）原代细胞的维持：将单层细胞用Ｈａｎｋ’Ｓ液洗涤后， 加入维持液Ｌ一谷氨酰胺，用于原代细胞维持。在维持过程 中，应视细胞瓶液颜色状况进行ｐＨ调整或更换。 每天在显微镜下随机选择视野，观察细胞在活体情况下 形态的变化。当细胞长到２４ ｈ，细胞基本长成单层（图１）。 １．２．３番鸭细小病毒（ＭＤＰＶ）在番鸭胚原代成纤维细胞上 的适应性培养 参照上述方法制备原代番鸭成纤维细胞，待细胞长成致 密单层后，用无菌ＰＢＳ（ｐＨ７．２）清洗细胞表面２次，接种已用
图１ 正常番鸭胚成纤维细胞 双抗处理的ＭＤＰＶ第３代４８～７２ ｈ死亡番鸭胚的尿囊液， 置于３７．５℃Ｃ０：细胞培养箱中吸附１ ｈ后，弃去病毒液，换 细胞维持液（含２ ｍｌ／Ｌ新生小牛血清的ＭＥＭ），置于３７．５℃ Ｃ０ 细胞培养箱中培养，观察细胞病变，同时设接种灭菌 ＰＢＳ对照组；５ ｄ后将细胞毒反复冻融３次，于４℃ ５ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清接种刚长成致密单层的番鸭 成纤维细胞上，观察细胞病变，当病变细胞达７５ 时收毒。 如无病变，５ ｄ后收毒。如此传代，至病毒在番鸭成纤维细胞 上出现细胞病变的时间稳定为止。 ２ 结果 正常番鸭胚成纤维细胞接种ＭＤＰＶ分离株４ ｄ后，细胞 圆缩、脱落（图２）。
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