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植物内生真菌一、内生真菌的概念内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。
这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成的孢子（或者孢子果）不容易识别。
真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。
与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。
草本植物内生真菌侵染种子内部，播种后，真菌随着幼苗的生长和植株的发育成熟而生长，这些真菌没有吸器，出现在茎、叶、花序组织，而不出现在根内，这一点与菌根真菌不同。
受侵染的植株在营养生长阶段不表现出被内生真菌侵染的特点，但是，当植物开花的时候，就可以观察到浸染的真菌。
与内生真菌容易混淆的一个概念是内生菌根，菌根是高等植物的根与真菌形成的共生联合体，内生苗根是菌根当中的一种类型，内生菌根的共同特征是根的表面不产生菌套，仅有稀疏的外生菌丝，菌丝在根部皮层组织的细胞间延伸，但不产生哈蒂氏网，菌丝体可侵入细胞内部，并形成不同形状的吸器，而宿主植物的根一般无形态及颜色的变化。
故内生菌根用肉眼很难识别。
二、内生真菌的一般特征内生真菌存在于根以外的植物组织细胞，可以用显微镜观察，也可以通过纯培养把它们分离出来进行研究。
分离内生真菌时要对植物组织进行表面消毒，然后切成小片放在培养基上培养3～5天，内生真菌就生长在培养基上，可根据孢子和菌丝的特征，对它们进行分类鉴定。
可以按常规方法把内生真菌从多种植物上分离出来，已经发现的内生真菌包括许多子囊菌和半知菌、一些担子菌及少量的卵菌。
主要的内生真菌包括药用Chloroscypha和Lophodermium（散斑壳属）中的一些种类以及Cryptoxline、Cryptosporriopsis（拟隐孢菌属）、Phomopsis（拟茎点霉属）和 Phyllosticta（叶点霉属）中的一些种类。
其中许多可以从植物组织中偶然分离到。
这类真菌的共生生活方式与其占主导地位的腐生生活方式来讲，似乎是次要的。
贵州白苞蒿抗肿瘤、抗氧化内生真菌的筛选与鉴定白苞蒿Artemisia lactiflora是一种重要的药用植物。
对已分离获得的54株白苞蒿内生真菌粗提物分别采用MTT法和DPPH法进行体外抗肿瘤和抗氧化活性筛选，并采用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定。
结果显示，共计10株（18.5%）白苞蒿内生真菌粗提物对人骨髓白血病细胞系（HL-60）、人乳腺癌细胞系（MCF-7）和人前列腺癌细胞系（PC-3）生长的抑制活性较好，其中以链格孢属GYBH47菌株粗提物的抗肿瘤活性最佳，对3种肿瘤细胞株的生长均有抑制作用；共计2株（3.7%）白苞蒿内生真菌粗提物的抗氧化活性较好，其中，拟茎点霉属GYBH42菌株粗提物同时具有抗氧化活性和细胞毒活性。
表明贵州白苞蒿内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源，其生物活性成分值得进一步研究和开发。
标签：白苞蒿；内生真菌；细胞毒活性；抗氧化活性；分子鉴定1 材料1.1 内生真菌贵州白苞蒿内生真菌54株，由本实验室分别自贵州省贵阳、毕节和威宁地区白苞蒿的根、茎和叶中分离获得，保存于贵州大学西南药用生物资源教育部工程研究中心药用真菌实验室。
1.2 肿瘤细胞HL-60（人白血病细胞）、MCF-7（人乳腺癌细胞）和COLO205（人结肠癌细胞）均购于南京凯基生物技术有限公司。
1.3 试剂试药阿霉素购于美国Sigma公司，DPPH自由基购于日本和光纯株式会社，Vit E购于中国食品药品检定研究院，真菌基因组DNA快速抽提试剂盒、Master Mix、异丙醇和真菌 5.8S rDNA通用引物ITS1（TCCGTAGGTGAACCTGCGG），ITS4（TCCTCCGCTTATTGATATGC）均购于生工生物工程（上海）有限公司。
乙酸乙酯（EtOAc）、二甲基亚砜（DMSO）、乙醇等试剂购于贵州鼎国生物技术有限公司，均为分析纯。
1.4 培养基马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基用于活化菌种；马铃薯葡萄糖液体（PDB）培养基用于培养种子液；查氏（Czapek′s）培养基用于菌株鉴定；肿瘤细胞株采用RPMI 1640培养，使用前加入10%胎牛血清。
科技成果——农业内生菌资源分离鉴定技术成果简介植物内生菌（endophyte）是指能定殖在健康植物组织内，并与植物建立了和谐联合关系的一类微生物。
植物内生菌的研究已逐步成为生命科学领域一个新的研究热点，受到国内外植物学家和微生物学家的关注。
研究已经证实，内生菌在植物体内不仅积极地生存着，而且还能产生多种生物学作用，如固氮、促进植物生长和对病虫害的防治等作用。
人们注意到植物-内生菌这种和谐共生，互利共栖的生命形式，可能是未来生态型农业发展的一条重要思路。
所以，在“资源节约型，环境友好型”产业已逐渐成为国内外公认主流发展方向的今天，开展植物内生菌的研究不仅对植物微生物学科的研究对农业可持续发展也有重要的实践意义。
选择有研究和应用价值的模式植物和内生菌种是进行内生菌研究的先决条件，从农村地区一些重要作物（包括主要蔬菜）中分离多种内生菌是本项研究的首要工作。
随着这些大量植物内生菌资源的分离，植物内生菌研究就可以进一步深入。
本人目前已得到一批有重要植物促生作用的细菌及其培养技术，可以转化为工业化生产。
技术水平目前，国际上关于这些内生菌的生物学作用及在农业生产中的应用，属于应用性研究，包括固氮作用或菌肥、作物抗病抗逆、果蔬抗菌保鲜等；我们已对手头内生菌与宿主植物的相互作用机制这一的核心问题进行了深入系统的研究，从根本上对内生菌做出恰当评价，为解释其生物学作用及实际应用提供依据。
本项目负责人从事内生菌研究十余年，技术水平高，成熟。
市场前景由于内生细菌具有在应用与环境微生物学研究中的重要价值，而其在资源节约型，环境友好型现代农业中的应用已逐渐成为国内外公认主要发展方向。
内生菌与植物的联合作用机制是当前国际上内生菌研究中最受关注的问题。
本项研究，一方面可以从农村地区重要作物分离鉴定的具有多种生物学作用的内生菌，具有自主知识产权和自主创新性的独特优势，为其进一步应用于农业生产，减少或替代化肥和农药的施用；另一方面，本项研究有助于揭示内生细菌和宿主植物联合运作机制。
安徽农学通报，Anhui Agri，Sci，Bull，2020，26（23）西藏2种乌头属药用植物茎内内生菌的分离与鉴定马红梅王璐璐段双全*（西藏大学理学院，西藏拉萨850000）摘要：目的：探究西藏工布乌头和露蕊乌头2种药用植物植株茎内内生菌。
方法：采用培养基培养法和载玻片法对分离得到的菌株进行形态学分析，并利用分子生物学技术提取菌株DNA进行测定。
结果：从2种西藏乌头属药用植物中获得的2株菌株，均属于半知菌亚门曲霉属环绕亚属黑色组的真菌。
关键词：西藏；药用植物；内生菌；DNA；乌头属中图分类号Q944.54文献标识码A文章编号1007-7731（2020）23-0026-03Isolation and Identification of Endophytes in the Stem of Two Medicinal Plants of Aconitum in Tibet MA Hongmei et al.（College of Science，Tibet Univercity，Lahasa850000，China）Abstract：Objective：This paper mainly explores the Isolation and identification of endophyte in medicinal plant of Aconitum in Tibet.Methods：The strains of endophyte were isolated and analyzed morphologically by medium cul⁃ture method and slide method.DNA of each strain was extracted by molecular biology technology for determination. Results：The two strains obtained belonged to the black fungus group of Aspergillus，Monilia-ceous，Hyphomyceta⁃les，Hyphomycetes，Deuteromycotina.Key words：Tibet；Medicinal plants；Endophytes；DNA；Aconitum内生菌（Endophyte）一词最早是由德国科学家de Bary首先提出的，早期定义是指生活在植物组织内的微生物。
