液质联用分析实验报告

液质联用测定甘油三酯结构

一、

1 仪器设备：SFC：超临界液相色谱 Q-TOF-MS：飞行时间质谱

2 条件：本研究中使用Waters Xevo G2-S Q-TOF质谱仪（沃特斯Waters，USA）与Waters Acquity Ultra Performance Convergence Chromatography（UPC2，Waters，USA）联用。SFC系统配备了二元溶剂泵，自动进样器，柱管理器和主要包含背压调节器的汇流管理器。在1500psi的恒定背压下，在50℃下在Acquity

UPC2 BEH-2EP柱（100mm×3.0mm×1.7lm，Waters，USA）上进行分离步骤。洗脱液A是超临界CO 2，洗脱剂B是甲醇：乙腈：甲酸（50:50:0.1，v / v / v）的混合溶剂。洗脱梯度基于我们研究组以前的研究，并在本研究中进行了优化：将0.1％B的等度洗脱保持2分钟，然后洗脱液B的比例在6分钟时线性增加至1％，在9分钟时增加2％并保持6分钟，之后，在20分钟时线性上升至7％，24分钟时上升至20％。最后，在0.5分钟内回到初始梯度并保持0.5分钟。运行期间流速维持在1.0 mL / min，注射体积为1.0 μL。

Q-TOF质谱仪的优化参数如下：采用m / z 50-2000采集范围的MSE采集方法，采用正离子电喷雾电离（ESI +）模式进行数据采集。脱溶剂气体为气体流量800L

/ h的氮气，碰撞气体为氩气。源温度和去溶剂化温度分别为120℃和450℃。毛细管电压为3.0kV，锥形电压为25V。锥形气体流量为20L / h。低碰撞能量设定在4 eV，而高斜坡碰撞能量设定在20-60 eV。亮氨酸脑啡肽（0.4ng / μL）用作实时校准的内标（每30秒）。

3 参考文献中结果如图：

二、

1 仪器设备：HPLC-ELSD：高效液相色谱-蒸发光散射检测器

2 条件：采用1100系列液相色谱仪（Agilent Technologies，Waldbronn，Germany），该仪器配有四元泵、脱气机、恒温柱室，自动采样器和联机到Agilent 385-ELSD的UV-vis二极管阵列检测器。使用Kinetex C18100A柱（150mm×4.6mm，2.6μm; Phenomenex，Torrance，CA，USA）进行分离。优化的分离条件如下：用80:20 乙腈/正戊醇混合物等度洗脱45分钟，然后在20分钟内使乙腈/正戊醇的比例梯度降低至达60:40；柱温，10℃;流速1.0 mL / min;注射量10μL。 UV检测在波长205±10nm（参照360±60nm）进行。ELSD参数如下：蒸发和雾化温度55℃;气体流量，1.2标准升/分钟（SLM）;增益因子 1。

实验七 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索

一、实验目的

1、了解LC-MS的主要构造和基本原理；

2、学习LC-MS的基本操作方法；

3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。

二、实验原理

1、液质基本原理及模式介绍

液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。

但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS已经成为最重要研究方法之一。

质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。

（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。实例：（Q1 = 100-259m/z）

（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。实例：（Q1 =

259m/z）

本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：质量分析器），由于多了Q2、Q3的存在，在分析测试的模式上又多了四种选择：

液质联用经验总结一

1.酸性物质适合做负离子检测，所以流动相中偏碱较合适，促使其解离

碱性物质适合做正离子检测，流动相中适当的加入酸，促使其形成正离子

中性物质，流动相中适当加一些醋酸钠（或者醋酸铵），可形成加钠的正离子或者

加铵的正离子

加醋酸铵应该也可以啦，可以促进生成加铵的正离子

2.糖苷类的物质在做FAB和esi（＋）时，[M+Na]峰往往比[M+H]峰要强，此为经验，原因只是推测可能和天然产物的提取过程有关；盐类化合物如盐酸盐、硫酸盐在质谱中酸的部分一般不会出现；二羧酸盐（esi负离子模式）除了分子离子峰外，会出现连续掉44的两个峰，为失去羧酸根的离子，这三个峰非常特征，但是会受锥孔电压的影响，调低电压谱图会更漂亮。

3. 胺类物质做esi质谱时要注意进样量要少，因为很容易离子化，不易冲洗干净，会影响后面样品的测定。像三乙胺在液质联用时不能用于调节流动相pH值。若不慎引入三乙胺，在正离子检测时总会出现很强的102峰（三乙胺的[M+H]）.

4.

1)质谱用水一般用娃哈哈纯净水之类的就很好了

2.)质谱用甲醇和乙腈，我换用了很多个品牌，发现Merck的还是稍微好一些。

3.)Finnigan用的氮气不一定要用到液氮瓶，用普通的钢瓶气就可以了，可能还省钱些。

4).建议大家买一个好一点的手电筒和一个放大镜，手电筒用来看源里面，放大镜看你割的毛细管平整

5。质谱的基线其实跟液相的紫外检测器和荧光检测器一样，基线高的原因不外乎内部和外部的原因。

1）。你选择的流动相在质谱的响应比较高，比如水相比较多的时候，噪音比较大些；还有如果盐含量比较大的时候，噪音更大些。

2）。检测器的灵敏度越高的时候，噪音应该越高。如果质谱的污染比较严重时，基线肯定比较高。比如离子阱检测器，用得久了，阱中的离子就会增多，一方面降低了质谱的灵敏度，另一方面增加了基线噪音。

3）。质谱的基线很多时候还跟你选择的离子宽度有关。比如你作选择离子扫描的时候，基线就低些。你作选择反应扫描的时候，离子宽度不要选得太宽，太宽噪音就高些。

现代分析技术之

液相色谱-质谱联用技术

一、 概述

1、质谱

质谱法（Mass Spectrometry）即质谱分析法

不同质荷比的离子经质量分析器分离，而后被检测并记录下来的谱图叫做质谱图(Mass

Spectrum)

质谱图的横坐标是质荷比（m/z)，纵坐标是离子强度

2、 质谱检测的是离子质量

质谱中采用的质量单位

—Da=Dalton（道尔顿）

质量单位，等于一个碳原子（12C）质量的十二分之一，约为1.66×10-24克；一克约为6

×1023道尔顿

—amu=atomic mass unit，

原子质量单位

1amu=1Da

3、质量数

¾ 名义质量数

—采用元素质量数的整数进行计算，例如：C=12，H=1，O=16

¾ 单同位素质量数或准确质量数

—用丰度最大的同位素准确质量数计算

—例如：12C=12,1H=1.0078,16O=15.9948

¾ 平均质量数或化学质量数

—考虑到所有天然同位素丰度的该元素原子量来计算

—例如：C=12.001，H=1.00794，O=15.9994

¾ 质谱获得的单电荷离子的m/z值，是单同位素质量数

4、分子量的计算

利血平，C33H40N2O9的MW的计算

5、液质联用（LC/MS）

色谱质谱的联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准

确的定量和定性分析。

6、LC/MS中的液相色谱

液质联用的前提和基础=进样+分离

1根据化合物的化学特性分离样品（比如极性化合物，非极性化合物，酸性化合物，碱性

化合物等）

LC的特点：分离技术

分离效率高

连续流出，峰宽有限

有时需要使用缓冲盐提高分离度

高压环境工作（>1000 psi）

7、LC/MS中的质谱

质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱

分析物被转化为气相离子而被分析

离子按其质荷比（m/z）被分离及检测

MS的特点：

灵敏度高

定性/定量

高真空环境工作