博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型的建立及评价

贝伐珠单抗改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化黄超文; 赵强; 钟莲娣; 先俊; 钟雪莺; 仝金斋; 黄炎明【期刊名称】《《实用医学杂志》》【年(卷),期】2019(035)015【总页数】5页(P2379-2383)【关键词】血管内皮生长因子; 贝伐珠单抗; 1;25(OH)2D3; 肺纤维化; 博来霉素【作者】黄超文; 赵强; 钟莲娣; 先俊; 钟雪莺; 仝金斋; 黄炎明【作者单位】江门市中心医院呼吸内科一区广东江门 529000【正文语种】中文肺纤维化是间质性肺病中最常见的一种类型，具有高病死率和日益增长的发病率，但目前仍缺乏有效的治疗手段。

肺纤维化的病理特征为肺泡上皮损伤、异常的血管修复和重塑、炎症浸润、肺成纤维细胞细胞增殖活化及肺间质胶原沉积，但其发病机制尚不清楚。

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）目前被认为是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子。

近年来，研究发现VEGF不仅参与全身的血管生成，还与多种肺部疾病相关，其与肺纤维化的联系也日渐受到关注。

研究显示转入抗VEGF的sflt-1基因可抑制博来霉素（Bleomycin，Blm）诱导的小鼠肺纤维化[1]，提示VEGF在纤维化进程中具有重要作用。

同时活性维生素D 1，25（OH）2D3（VD）在慢性气道疾病中的作用亦被逐渐证实，VD具有可抑制VEGF对气道屏障的破坏[2]、气道平滑肌细胞增殖[3]、促肿瘤细胞迁移[4]和改善肺纤维化[5]等作用。

由于目前多种VEGF的抑制剂已上市，而贝伐珠单抗（Bevacizumab，Bev）始终是现有的确切有效且安全的VEGF抑制性药物[6-8]。

结合本课题组已发现VD可减轻肺纤维化[5]，Bev可减轻哮喘小鼠的气道炎症[9]，因此，本研究在前期肺纤维化研究基础上，采用VD作为对照，在博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型中首次探讨Bev对肺纤维化的影响，评价其是否可特异性抑制VEGF，为肺纤维化的治疗提供新的策略。

结果
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��; �����������， ������， ����� H E � M as s on ����������� ����� � � ����， ������������ �( P < 0 .0 5) ; � 28 d � �， �� ��� �� ��� �� ��� �� � ( P < 0 .0 5) �W es t er nb lot� � � ������� I PF ���� ��� E - � ��� ���， �� ���� -S M A � � �� �
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方法
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实用老年医学 20 1 3 年 9 月第 27 卷第 9 期

网络出版时间:２０１８－５－２３１４:１３㊀网络出版地址:ｈｔｔｐ://ｋｎｓ.ｃｎｋｉ.ｎｅｔ/ｋｃｍｓ/ｄｅｔａｉｌ/３４.１０６５.Ｒ.２０１８０５２２.１５００.０１９.ｈｔｍｌ维生素Ｄ３对博来霉素诱发小鼠肺纤维化的影响王㊀熹１ꎬ赵㊀卉１ꎬ徐德祥２ꎬ陈远华２２０１８－０２－３１接收基金项目:安徽省自然科学基金(编号:１５０８０８５ＭＨ１９２)作者单位:１安徽医科大学第二附属医院呼吸内科ꎬ合肥㊀２３０６０１２安徽医科大学卫生毒理学系ꎬ合肥㊀２３００３２作者简介:王㊀熹ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎻ赵㊀卉ꎬ男ꎬ副教授ꎬ硕士生导师ꎬ责任作者ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｚｈａｏ￣ｈｕｉｃｈｅｎｘｉ＠１２６.ｃｏｍꎻ徐德祥ꎬ男ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ责任作者ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｘｕｄｅｘ＠ｍａｉｌ.ｈｆ.ａｈ.ｃｎ摘要㊀目的㊀探讨维生素Ｄ３(ＶｉｔＤ３)对博来霉素(ＢＬＭ)诱发小鼠肺纤维化的保护作用及其机制ꎮ方法㊀９６只成年Ｃ５７ＢＬ/６Ｊ雄性小鼠(８周ꎬ２４~２６ｇ)随机分为如下８组:生理盐水对照组(对照组)ꎬ单纯维生素Ｄ３组(ＶｉｔＤ３组)ꎬ博来霉素组(ＢＬＭ１ｄ㊁７ｄ和２１ｄ组)ꎬ维生素Ｄ３＋博来霉素组(ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ㊁７ｄ和２１ｄ组)ꎮＢＬＭ组经气管单次给予ＢＬＭꎬ剂量为３ｍｇ/ｋｇꎬＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ组:在ＢＬＭ(３ｍｇ/ｋｇ)处理前３０ｍｉｎ及处理后每２４ｈ经腹腔给予一次１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３ꎬ剂量为１μｇ/ｋｇꎬ对照组和ＶｉｔＤ３组给予等量的生理盐水或１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３ꎬ小鼠分别于ＢＬＭ或生理盐水处理后１ｄ㊁７ｄ和２１ｄ剖杀并取肺组织ꎮ用ＨＥ染色法检测肺病理改变ꎬ用免疫组化检测肺３￣硝基酪氨酸水平ꎬＲＴ￣ＰＣＲ检测肺氧化及抗氧化酶ｍＲＮＡ水平ꎮ结果㊀ＨＥ染色提示ＢＬＭ处理引起肺组织破坏及间质纤维化ꎬ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３显著减轻ＢＬＭ诱导的肺组织破坏及间质纤维化ꎮＲＴ￣ＰＣＲ提示ＢＬＭ引起肺组织氧化酶基因表达上调(Ｐ<０ ０５)ꎬ抗氧化酶基因表达下调(Ｐ<０ ０５)ꎮ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３处理显著抑制ＢＬＭ引起的肺脏氧化酶基因表达上调及抗氧化酶基因下调(Ｐ<０ ０５)ꎮ免疫组化结果提示ꎬ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３明显减少ＢＬＭ所致肺３￣硝基酪氨酸残留ꎮ结论㊀维生素Ｄ３可能通过抗肺氧化应激作用减轻ＢＬＭ诱发的肺组织破坏及间质纤维化ꎮ关键词㊀博来霉素ꎻ维生素Ｄ３ꎻ肺纤维化ꎻ氧化应激中图分类号㊀Ｒ３３２ꎻＲ５６３ １３文献标志码Ａ文章编号１０００－１４９２(２０１８)０６－０９１８－０５ｄｏｉ:１０.１９４０５/ｊ.ｃｎｋｉ.ｉｓｓｎ１０００－１４９２.２０１８.０６.０１９㊀㊀特发性肺纤维化(ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎬＩＰＦ)是一类慢性间质性肺疾病ꎬ以肺泡上皮细胞损伤㊁成纤维细胞增生和细胞外基质聚集增多为病理特征[１]ꎮＩＰＦ是最常见的肺部疾病之一ꎬ其发病机制复杂ꎬ早期诊断较为困难ꎬ预后极差ꎮ博来霉素(ｂｌｅｏｍｙｃｉｎꎬＢＬＭ)是一种广泛应用的抗肿瘤药物ꎬ常在实验中用于诱导小鼠肺纤维化ꎬＢＬＭ诱导的肺纤维化ꎬ与人类的特发性肺纤维化相类似ꎬ是最常用的研究特发性肺纤维化的模型[２]ꎮ由于尚无有效方法治疗特发性肺纤维化ꎬ急需尝试新的预防和治疗性干预措施以预防特发性肺纤维化ꎮ越来越多研究[３－４]证明ꎬ活性氧可能在ＢＬＭ诱导的肺纤维化中起关键作用ꎬ活性氮也参与其中ꎬ同时ꎬ大量研究[５]表明ꎬ抗氧化治疗具有一定的抗肺纤维化作用ꎮ维生素Ｄ(ＶｉｔａｍｉｎＤꎬＶｉｔＤ)是脂溶性开环类固醇激素ꎮ人体维生素Ｄ主要通过光照由皮肤合成ꎬ少量由食物摄入[６]ꎮ传统观点认为ꎬ维生素Ｄ在钙吸收和骨骼代谢中发挥关键作用[７]ꎮ最近研究[８]表明ꎬ维生素Ｄ也具有抗氧化剂作用ꎮ维生素Ｄ本身缺乏生物活性ꎮ维生素Ｄ在肝脏细胞色素Ｐ４５０(ＣＹＰ)２Ｒ１作用下首先转化为２５￣(ＯＨ)￣Ｄ３ꎬ２５￣(ＯＨ)￣Ｄ３在肾脏ＣＹＰ２７Ｂ１作用下进一步转化成活性型１ꎬ２５￣(ＯＨ)２￣Ｄ３(即骨化三醇)[９]ꎮ该研究旨在探讨维生素Ｄ３对ＢＬＭ诱发小鼠肺纤维化的影响ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀化学试剂㊀博来霉素和维生素Ｄ３购自美国ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ公司ꎻ３￣硝基酪氨酸抗体购自美国ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｔｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司ꎻＴＲＩｚｏｌ总ＲＮＡ提取试剂购自美国分子研究中心ꎻＤＮＡ酶和实时ＰＣＲ扩增试剂盒购自美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司ꎻ化学发光(ＥＣＬ)检测设备购自皮尔斯生物技术公司ꎻ引物由美国ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司合成ꎮ１.２㊀实验动物㊀成年的Ｃ５７ＢＬ/６Ｊ雄性小鼠(８周大小ꎬ２４~２６ｇ)购自北京维通利华公司ꎬ实验前动物适应性喂养１周ꎬ自由饮食ꎬ昼夜节律ꎬ环境温度２０~２５ħꎬ湿度(５０ʃ５)％ꎮ１.３㊀方法㊀１.３.１㊀动物分组㊁处理㊀９６只成年Ｃ５７ＢＬ/６Ｊ雄性小鼠随机分为如下８组:生理盐水对照组(对照组)ꎬ单纯维生素Ｄ３组(ＶｉｔＤ３组)ꎬ博来霉素组(ＢＬＭ１ｄ组㊁ＢＬＭ７ｄ组和ＢＬＭ２１ｄ组)ꎬ维生素图１㊀肺脏的ＨＥ染色㊀ˑ１００Ａ:对照组ꎻＢ:ＶｉｔＤ３组ꎻＣ:ＢＬＭ１ｄ组ꎻＤ:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ组ꎻＥ:ＢＬＭ７ｄ组ꎻＦ:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ７ｄ组ꎻＧ:ＢＬＭ２１ｄ组ꎻＨ:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ２１ｄ组Ｄ３＋博来霉素组(ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ组㊁ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ７ｄ组和ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ２１ｄ组)ꎮＢＬＭ组和ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ组小鼠经气管内注射给予单次博莱霉素(３.０ｍｇ/ｋｇ)ꎬ对照组和ＶｉｔＤ３小鼠经气管内注射给予等量生理盐水ꎮＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ组小鼠在ＢＬＭ处理前３０ｍｉｎ以及处理后每天经腹腔给予１次１μｇ/ｋｇ的１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３(活性维生素Ｄ３)ꎬ对照组㊁ＢＬＭ组和ＶｉｔＤ３组给予等量的生理盐水或１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３ꎮ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３剂量参照文献[１０]ꎮ对照组㊁ＶｉｔＤ３组于气管内生理盐水注射后２１ｄ剖杀ꎬ余组分别于ＢＬＭ处理后１ｄ㊁７ｄ㊁２１ｄ剖杀ꎬ取左肺组织做石蜡切片和ＨＥ染色ꎬ取右肺放置在－８０ħ冰箱内用于ＲＴ￣ＰＣＲꎮ１.３.２㊀肺组织病理学㊀将留取的肺组织标本固定在４％福尔马林中并按照标准的程序嵌入石蜡中包埋ꎬ用石蜡包埋的肺组织行连续切片ꎬ至少将５张连续的切片行ＨＥ染色ꎮ１.３.３㊀实时定量逆转录－聚合酶链反应㊀运用ＴＲＩｚｏｌ总ＲＮＡ提取试剂提取肺脏组织总ＲＮＡꎬ在２８０ｎｍ及２６０ｎｍ波长下运用分光光度计测样品的吸光度值ꎬ进行ＲＮＡ完整性验证及其浓度计算ꎮ稀释总ＲＮＡ样品定量成０ ５μｇ/ｍｌꎬ进行ＤＮＡ的消化㊁逆转录成ｃＤＮＡꎮ将ｃＤＮＡ１μｌꎬＭＩＸ１０μｇꎬ模板链和随从链引物各１μｌꎬ无酶水７μｌꎬ置入ＲＴ￣ＰＣＲ扩增仪ꎬ通过变性㊁退火㊁延伸３个步骤进行扩增ꎬ运用专用软件计算目标基因的相对值ꎮ各基因引物序列见表１ꎮ１.３.４㊀肺组织免疫组化学检测㊀随机从每组肺脏组织切片中选取５张ꎬ烤箱烤片后二甲苯脱蜡ꎬ依次梯度浓度乙醇水化ꎬ然后滴加ＴｒｉｔｏｎＸ￣１００通透细胞ꎬ再滴加１０％过氧化氢进行封闭ꎬ后枸橼酸钠缓冲液中微波修复抗原３次ꎬ每次５ｍｉｎꎬ间隔１０ｍｉｎꎮ冷却至室温后滴入５％的羊血清湿盒内静置２０ｍｉｎꎬ然后在组织表面滴注３￣硝基酪氨酸(３￣ｎｉｔｒｏｔｙ￣ｒｏｓｉｎｅꎬ３￣ＮＴ)一抗孵育ꎬ放置４ħ冰箱孵育过夜ꎮ然后相应进行二抗孵育ꎬＳＰ反应ꎬ最后用ＤＡＢ显色ꎬ在光镜下进行观察显色ꎬ显色充分后进行复染㊁脱水㊁透明㊁封片ꎮ每张片子随机取５个高倍镜视野在光学显微镜下观察ꎬ使用Ｉｍａｇｅ￣ＰｒｏＰｌｕｓ６ ０图像分析软件半定量分析各个视野下棕黄色区域占整个该视野面积的比例ꎮ表１㊀各基因引物序列基因名称引物序列(５ᶄ￣３ᶄ)长度１８ＳＦ:ＧＴＡＡＣＣＣＧＴＴＧＡＡＣＣＣＣＡＴＴＲ:ＣＣＡＴＣＣＡＡＴＣＧＧＴＡＧＴＡＧＣＧ１５１ｐ４７ｐｈｏｘＦ:ＣＣＡＧＧＧＣＡＣＴＣＴＣＡＣＴＧＡＡＴＡＲ:ＡＴＣＡＧＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＧＡＡＧＡＡ１００ｐ６７ｐｈｏｘＦ:ＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＣＡＣＴＡＴＣＣＴＧＧＲ:ＡＧＧＴＣＧＴＡＣＴＴＣＴＣＣＡＴＴＣＴＧＴＡ１３６ｓｏｄ￣１Ｆ:ＧＣＧＡＴＧＡＡＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＧＴＧＲ:ＴＧＧＡＣＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＴＧＣＴＧＧ１４３ｓｏｄ￣２Ｆ:ＡＧＣＧＡＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＴＣＴＧＡＧＲ:ＡＧＣＧＣＧＣＣＡＴＡＧＴＣＧＴＡＡＧＧＣ１６２ｇｓｈｐｘＦ:ＧＧＴＧＧＴＧＣＴＣＧＧＴＴＴＣＣＣＧＴＲ:ＡＡＴＴＧＧＧＣＴＣＧＡＡＣＣＣＧＣＣＡＣ１１３ｇｓｈｒｄＦ:ＧＧＧＡＴＧＣＣＴＡＴＧＴＧＡＧＣＣＧＣＣＲ:ＴＧＡＣＴＴＣＣＡＣＣＧＴＧＧＧＣＣＧＡ１０７１.４㊀统计学处理㊀采用ＳＰＳＳ１９ ０软件进行数据分析ꎬ统计学分析选用两样本ｔ检验分析ꎬ所有定量资料采用 ｘʃｓ表示ꎮＰ<０ ０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀维生素Ｄ３对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的影响㊀肺组织ＨＥ染色结果提示ꎬ与对照组对比ꎬＢＬＭ组小鼠给药７ｄ㊁２１ｄ后肺泡正常结构破坏严重ꎬ７ｄ开始出现肺泡间隔增厚ꎬ２１ｄ肺间隔明显增宽㊁成纤维细胞增生㊁胶原沉积ꎮＶｉｔＤ３显著减轻ＢＬＭ引起的肺泡正常结构破坏㊁肺间隔增宽和肺纤维化ꎮ见图１ꎮ图２㊀肺脏的３￣ＮＴ免疫组化染色㊀ＳＰˑ４００㊀㊀Ａ:对照组ꎻＢ:ＶｉｔＤ３组ꎻＣ:ＢＬＭ１ｄ组ꎻＤ:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ组ꎻＥ:ＢＬＭ７ｄ组ꎻＦ:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ７ｄ组ꎻＧ:ＢＬＭ２１ｄ组ꎻＨ:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ２１ｄ组２.２㊀维生素Ｄ３对博莱霉素所致肺蛋白质硝化的影响㊀ＢＬＭ组小鼠肺组织中棕黄色显色区域定量较对照组明显增多(Ｐ<０ ０１)ꎬ蛋白质硝化随时间延长而增加ꎬ其中７ｄ达到峰值ꎬ２１ｄ时有所下降ꎬ而ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ组小鼠肺组织中棕黄色区域定量与ＢＬＭ组对比明显减少(Ｐ<０ ０１)ꎬ说明维生素Ｄ３抑制了ＢＬＭ所致的蛋白硝化反应ꎮ见图２㊁３ꎮ图３㊀３￣ＮＴ免疫组织化学染色相对表达量( ｘʃｓꎬｎ＝６)㊀㊀１:对照组ꎻ２:ＶｉｔＤ３组ꎻ３:ＢＬＭ１ｄ组ꎻ４:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ组ꎻ５:ＢＬＭ７ｄ组ꎻ６:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ７ｄ组ꎻ７:ＢＬＭ２１ｄ组ꎻ８:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ２１ｄ组ꎻ与对照组比较:∗∗Ｐ<０ ０１ꎻ与ＢＬＭ组比较:＃＃Ｐ<０ ０１２.３㊀维生素Ｄ３对博莱霉素上调小鼠肺ＮＡＤＰＨ氧化酶基因的影响㊀与对照组对比ꎬＢＬＭ组小鼠肺ＮＡＤＰＨ氧化酶基因ｐ４７ｐｈｏｘ在给药后１㊁７ｄ上调(Ｐ<０ ０５)ꎬｐ６７ｐｈｏｘ在给药后７㊁２１ｄ明显上调(Ｐ<０ ０１)ꎮＶｉｔＤ３显著减轻ＢＬＭ引起的小鼠肺ｐ４７ｐｈｏｘ和ｐ６７ｐｈｏｘ基因的上调ꎮ单纯维生素Ｄ３组与对照组比较氧化酶基因表达无明显变化ꎮ见图４ꎮ２.４㊀维生素Ｄ３对博莱霉素下调小鼠肺抗氧化酶基因的影响㊀与对照组比较ꎬＢＬＭ组小鼠肺抗氧化酶基因超氧化物歧化酶(ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬｓｏｄ)１图４㊀各组小鼠肺脏ＮＡＤＰＨ氧化酶ｍＲＮＡ表达情况( ｘʃｓꎬｎ＝６)㊀㊀Ａ:ｐ４７ｐｈｏｘꎻＢ:ｐ６７ｐｈｏｘꎻ１:对照组ꎻ２:ＶｉｔＤ３组ꎻ３:ＢＬＭ１ｄ组ꎻ４:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ组ꎻ５:ＢＬＭ７ｄ组ꎻ６:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ７ｄ组ꎻ７:ＢＬＭ２１ｄ组ꎻ８:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ２１ｄ组ꎻ与对照组比较:∗Ｐ<０ ０５ꎬ∗∗Ｐ<０ ０１ꎻ与ＢＬＭ组比较:＃Ｐ<０ ０５ꎬ＃＃Ｐ<０ ０１在给药后１㊁７和２１ｄ明显下调(Ｐ<０ ０１)ꎬｓｏｄ２在１ｄ明显下调(Ｐ<０ ０１)ꎬ谷胱甘肽过氧化物酶(ｇｌｕ￣ｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬｇｓｈｐｘ)在２１ｄ明显下调(Ｐ<０ ０１)ꎬＶｉｔＤ３显著对抗ＢＬＭ引起的小鼠肺ｓｏｄ１㊁ｓｏｄ２㊁ｇｓｈｐｘ基因表达下调ꎮＢＬＭ对谷胱甘肽还原酶基因(ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅꎬｇｓｈｒｄ)表达影响很小ꎬ然而ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ组ｇｓｈｒｄ基因表达明显升高(Ｐ<图５㊀各组小鼠肺脏抗氧化酶ｍＲＮＡ表达情况( ｘʃｓꎬｎ＝６)㊀㊀Ａ:ｓｏｄ１ꎻＢ:ｓｏｄ２ꎻＣ:ｇｓｈｐｘꎻＤ:ｇｓｈｒｄꎻ１:对照组ꎻ２:ＶｉｔＤ３组ꎻ３:ＢＬＭ１ｄ组ꎻ４:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄ组ꎻ５:ＢＬＭ７ｄ组ꎻ６:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ７ｄ组ꎻ７:ＢＬＭ２１ｄ组ꎻ８:ＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ２１ｄ组ꎻ与对照组比较:∗∗Ｐ<０ ０１ꎻ与ＢＬＭ组比较:＃Ｐ<０ ０５ꎬ＃＃Ｐ<０ ０１０ ０１)ꎮ单纯维生素Ｄ３组与对照组比较抗氧化酶基因表达无明显变化ꎮ见图５ꎮ３㊀讨论㊀㊀肺纤维化是一种慢性肺部疾病ꎬ其病理机制仍不明确ꎬ目前暂无有效的治疗药物ꎮ目前研究肺纤维化多数运用ＢＬＭ诱导的肺纤维化模型ꎬ本研究成功复制ＢＬＭ肺纤维化模型ꎬ并给予ＶｉｔＤ３进行干预ꎮ结果显示ꎬ维生素Ｄ３明显减轻了ＢＬＭ处理后７ｄ㊁２１ｄ肺泡正常结构破坏㊁肺间隔增厚㊁纤维细胞增生以及胶原沉积ꎮ上述结果提示:维生素Ｄ３明显减轻了ＢＬＭ引起的肺纤维化ꎬ这与早前研究报道维生素Ｄ３能改善ＢＬＭ诱发小鼠肺纤维化相一致[１１]ꎮ㊀㊀随着氧化应激研究的深入ꎬ目前有研究[３]表明氧化应激在肺纤维化过程中起重要作用ꎮ另有研究[１２]提示ＶｉｔＤ３可以减轻ＬＰＳ诱发的急性肾损伤中的氧化应激ꎬ其主要机制是调节氧化酶和抗氧化酶基因的表达ꎮ因此设想ＶｉｔＤ３保护ＢＬＭ诱发肺纤维化的机制与抗氧化应激相关ꎮ本研究结果显示ＢＬＭ所致肺纤维化模型中小鼠肺ＮＡＤＰＨ氧化酶ｐ４７ｐｈｏｘ和ｐ６７ｐｈｏｘ基因分别在给药后１ｄ㊁７ｄ和７ｄ㊁２１ｄ明显上调ꎬ同时抗氧化酶ｓｏｄ１在给药后１ｄ㊁７ｄ和２１ｄ明显下调ꎬｓｏｄ２基因在１ｄ明显下调ꎬｇｓｈｐｘ基因在２１ｄ明显下调ꎬ上述结果表明ＢＬＭ所致肺纤维化中存在氧化酶基因上调和抗氧化酶基因下调ꎬ各种酶基因表达调节时间及时限不同ꎬ抗氧化酶以ｓｏｄ为主ꎮＶｉｔＤ３处理显著减弱了ＢＬＭ所致的肺ＮＡＤＰＨ氧化酶基因表达的上调和抗氧化酶基因表达的下调ꎮ此外ꎬ本研究免疫组化结果显示ＢＬＭ所致肺纤维化模型中蛋白质硝化标志３￣ＮＴ残留定量明显增多ꎬ而ＶｉｔＤ３明显减少了ＢＬＭ所致３￣ＮＴ残留ꎮ综上所述:维生素Ｄ３抑制ＢＬＭ所致肺纤维化过程中氧化应激ꎬ其可能的机制是下调氧化酶基因及上调抗氧化酶基因的表达ꎮ㊀㊀目前ꎬ很多研究[１３－１４]显示ＢＬＭ诱发肺纤维化的机制可能与炎症㊁氧化应激㊁内质网应激等领域相关ꎮ而前期研究[１０ꎬ１５]表明维生素Ｄ３抑制ＢＬＭ诱导的肺部炎症以及内皮细胞中的内质网应激ꎮ本研究仅阐述维生素Ｄ３对ＢＬＭ所致肺纤维化具有保护作用以及可能的机制是减轻其过程中的氧化应激ꎬ但维生素Ｄ３是直接影响氧化应激ꎬ还是通过改善炎症㊁内质网应激等间接影响氧化应激ꎬ抑或是作用三个机制共同起到保护作用ꎬ本研究暂未阐明ꎬ有待进一步的研究ꎮ总之本研究结果表明维生素Ｄ３对肺纤维化起保护作用及部分机制ꎬ并对临床治疗提出新的方向ꎮ参考文献[１]㊀ＳｅｒｇｅｗＡ.Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉ￣ｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＥｍｅｒｇＤｒｕｇｓꎬ２０１５ꎬ２０(４):５３７－５２.[２]㊀ＭｏｏｒｅＢＢ.Ｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｓｏｆｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＡｍＪＰｈｙｓｉ￣ｏｌＬｕｎｇＣｅｌｌＭｏｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２００８ꎬ２９４(２):Ｌ１５２－６０. 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[１０]ＴａｎＺＸꎬＣｈｅｎＹＨꎬＸｕＳꎬｅｔａｌ.Ｃａｌｃｉｔｒｉｏｌｉｎｈｉｂｉｔｓｂｌｅｏｍｙｃｉｎ￣ｉｎ￣ｄｕｃｅｄｅａｒｌｙｐｕｌｍｏｎａｒｙｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ￣ｍｅｓ￣ｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＴｏｘｉｃｏｌＬｅｔｔꎬ２０１６ꎬ２４０(１):１６１－７１.[１１]ＺｈａｎｇＺꎬＹｕＸꎬＦａｎｇＸꎬｅｔａｌ.ＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｉｔａｍｉｎＤｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｎｂｌｅｏｍｙｃｉｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１５ꎬ５:１７６３８.[１２]ＸｕＳꎬＣｈｅｎＹＨꎬＴａｎＺＸꎬｅｔａｌ.ＶｉｔａｍｉｎＤ３ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｌｌｅｖｉ￣ａｔｅｓｒｅｎａｌｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｋｉｄ￣ｎｅｙｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＪＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０１５ꎬ１５２:１３３－４１.[１３]ＴｏｄｄＮＷꎬＬｕｚｉｎａＩＧ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｐｕｌ￣ｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＦｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓＴｉｓｓｕｅＲｅｐａｉｒꎬ２０１２ꎬ５(１):１１.[１４]ＨｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌＧＳ.Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓａｎｄｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａ￣ｔｏｒｙｂａｓｉｓｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｃｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].Ｃｅｌｌꎬ２０１０ꎬ１４０(６):９００－１７.[１５]ＨａａｓＭＪꎬＪａｆｒｉＭꎬＷｅｈｍｅｉｅｒＫＲꎬｅｔａｌ.Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｐｌａｓ￣ｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｂｙｖｉｔａｍｉｎＤｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉ￣ａｌｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＦｒｅｅＲａｄｉｃＢｉｏｌＭｅｄꎬ２０１６ꎬ９９:１－１０.ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｖｉｔａｍｉｎＤ３ｏｎｂｌｅｏｍｙｃｉｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅＷａｎｇＸｉ１ꎬＺｈａｏＨｕｉ１ꎬＸｕＤｅｘｉａｎｇ２ꎬｅｔａｌ(１ＤｅｐｔｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙꎬＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨｅｆｅｉ㊀２３０６０１ꎻ２ＤｅｐｔｏｆＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙꎬＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨｅｆｅｉ㊀２３００３２)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｉｔａｍｉｎＤ３ｏｎｂｌｅｏｍｙｃｉｎ(ＢＬＭ)￣ｉｎｄｕｃｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀９６ａｄｕｌｔｍａｌｅＣ５７ＢＬ/６Ｊｍｉｃｅ(８ｗｅｅｋｓꎬ２４~２６ｇ)ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｓ:ＣｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｖｉｔａｍｉｎＤ３(ＶｉｔＤ３)ｇｒｏｕｐꎬＢＬＭ１ｄꎬ７ｄａｎｄ２１ｄｇｒｏｕｐｓꎬａｎｄＶｉｔＤ３＋ＢＬＭ１ｄꎬ７ｄａｎｄ２１ｄｇｒｏｕｐｓ.Ｉｎｂｌｅｏｍｙｃｉｎｇｒｏｕｐꎬｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｂｌｅｏｍｙｃｉｎ(３ｍｇ/ｋｇ).ＩｎＶｉｔＤ３＋ＢＬＭｇｒｏｕｐꎬｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３(１μｇ/ｋｇ)ｄａｉｌｙꎬｂｅｇｉｎｎｉｎｇａｔ３０ｍｉｎｂｅｆｏｒｅＢＬＭｉｎｊｅｃｔｉｏｎ.ＶｉｔＤ３ｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３(１μｇ/ｋｇ)ｄａｉｌｙ.Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓａｌｉｎｅｄａｉｌｙ.Ｍｉｃｅｗｅｒｅｅｕｔｈａｎｉｚｅｄａｔ１ｄꎬ７ｄꎬａｎｄ２１ｄａｆｔｅｒＢＬＭꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｓｏｍｅｌｕｎｇｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒｒｅａｌ￣ｔｉｍｅＲＴ￣ＰＣＲ.Ｓｏｍｅｌｕｎｇｓｗｅｒｅｅｘｃｉｓｅｄｆｏｒｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＡｓｅｘｐｅｃｔｅｄꎬＢＬＭ￣ｉｎｄｕｃｅｄｄａｍａｇｅｏｆａｌｖｅｏｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅ.Ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇｌｙꎬ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３ａｔｔｅｎｕａｔｅｄＢＬＭ￣ｉｎｄｕｃｅｄｄａｍａｇｅｏｆａｌｖｅｏｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅ.ＦｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｆｏｕｎｄｔｈａｔＢＬＭｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ.１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３ｉｎｈｉｂｉｔｅｄＢＬＭ￣ｉｎｄｕｃｅｄｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅａｎｄｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅ.Ｍｏｒｅｏｖｅｒꎬｓｔｒｏｎｇ３￣ｎｉｔｒｏｔｙｒｏｓｉｎｅｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｌｕｎｇｓ１ｄꎬ７ｄａｎｄ２１ｄａｆｔｅｒＢＬＭｉｎ￣ｊｅｃｔｉｏｎꎬａｎｄ１ꎬ２５(ＯＨ)２Ｄ３ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｔｔｅｎｕａｔｅｄＢＬＭ￣ｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｎｉｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｌｕｎｇｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｖｉｔａ￣ｍｉｎＤ３ｍａｙｒｅｄｕｃｅＢＬＭ￣ｉｎｄｕｃｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｉｓｓｕｅｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈａｎｔｉ￣ｐｕｌｍｏｎａｒｙｏｘｉ￣ｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ｂｌｅｏｍｙｃｉｎꎻｖｉｔａｍｉｎＤ３ꎻｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓꎻｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ。

化纤汤治疗博莱霉素致小鼠肺纤维化实验研究王少杰;白文;王春玲;戴中【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】2007(27)4【摘要】目的研究中药化纤汤对博莱霉素致肺纤维化小鼠的防治作用，并与丹参及地塞米松治疗进行对照，从而探讨中药治疗肺纤维化的临床价值及可能的作用机制。

方法6～8周龄雄性ICR小鼠分8组，模型组（BM组）经鼻滴入博莱霉素（BLM）5mg／kg建立肺间质纤维化模型，化纤汤预防治疗组（PHT组）于滴入BLM前48h予化纤汤灌胃，化纤汤治疗组（HT组）于滴入BLM后第14天用化纤汤灌胃，同时设立丹参预防治疗组（PDST组）及丹参治疗组（DST组），地塞米松预防治疗组（PDT组）及地塞米松治疗组（DT组），并与正常小鼠（Nc组）进行对照。

第28天收获其支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织，右肺行苏木精-伊红（HE）和Masson三色染色，并观察电镜下细胞超微结构的改变，左肺经酸解法检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中转化生长因子β1（TGF—β1）的浓度。

结果各药物干预组与BM组比较，小鼠肺系数明显下降（P〈0．05）；肺泡炎、纤维化程度均有改善（P〈0．05），其中化纤汤预防治疗组改善最明显；肺HYP含量下降（P〈0．05）；BALF中TGF—β1含量亦明显下降。

结论早期应用化纤汤可以在某种程度上减轻BLM诱导的肺泡炎及肺纤维化程度，提示益气活血中药对肺纤维化有一定预防作用；抑制TGF-β1在肺组织中的表达可能是其作用机制之一。

【总页数】5页(P347-351)【关键词】中药化纤汤;肺纤维化;小鼠;博莱霉素;转化生长因子β1【作者】王少杰;白文;王春玲;戴中【作者单位】北京大学人民医院中医科【正文语种】中文【中图分类】R777.330.5【相关文献】1.博莱霉素致大鼠肺纤维化胶原表达的研究rn博莱霉素致大鼠肺纤维化胶原表达的研究 [J], 蔡后荣;戴令娟;郑培德2.羧胺三唑对博莱霉素致小鼠肺纤维化的治疗作用及其机制 [J], 陶章;黄建安;陈珊珊;胡洋3.补气通肺汤对博莱霉素致大鼠肺纤维化影响的实验研究 [J], 赵子贤;欧阳修河;马君;张天嵩4.丹芍化纤胶囊抗博莱霉素所致大鼠肺纤维化的实验研究 [J], 张崇;韦小瑜;吴亚芸;李诚秀;杨勤;程明亮5.丹参总酚酸对博莱霉素致肺纤维化小鼠的治疗作用 [J], 林军;冯一中;顾振纶;武慧;周文轩;郭次仪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。