基础研究中国民间疗法C H I N A S N A T U R O P A T H Y ,F e b .2023,V o l .31N o .3җ基金项目:福建省自然科学基金项目(2019J 01344):刘蔚雯,E -m a i l :1919552168@q q.c o m 第一作者:戴燕真,E -m a i l :d y z 11012021@163.c o m 术连饮干预腹泻型肠易激综合征模型大鼠的实验研究җ戴燕真1吴香新2,刘蔚雯1(1.福建中医药大学,福建福州350122;2.福建医科大学,福建福州350122)ʌ摘要ɔ 目的:探讨术连饮对腹泻型肠易激综合征(I B S -D )模型大鼠肠动力的影响及其可能的作用机制㊂方法:选择S D 大鼠60只,随机分为空白对照组㊁模型组㊁匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组,每组10只㊂采用番泻叶灌胃结合束缚刺激法建立I B S -D 大鼠模型㊂造模第15日开始给药,除空白对照组外,其余各组继续灌服番泻叶,1h 后灌胃给药,术连饮低㊁中㊁高剂量组分别给予术连饮2.3g ㊃k g -1㊁4.6g ㊃k g -1㊁9.2g ㊃k g -1灌胃,匹维溴铵组给予18.5m g ㊃k g -1灌胃,空白对照组和模型组均灌胃生理盐水20m L ㊃k g -1㊂给药1h 后,束缚1h ,每日1次㊂连续给药14d ㊂观察大鼠一般状态㊁体质量㊁粪便含水量㊁肠道推进率㊁血浆及结肠组织P 物质(S P )㊁生长抑素(S S )表达的变化㊂结果:与空白对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P <0.01),粪便含水量㊁肠道推进率均显著升高(P <0.01),血浆及结肠组织S P ㊁S S 含量均显著升高(P <0.01)㊂病理组织学结果显示,模型组大鼠结肠黏膜结构完整㊂与模型组比较,术连饮低㊁中㊁高剂量组体质量显著升高(P <0.01或P <0.05),粪便含水量㊁肠道推进率均显著降低(P <0.01);术连饮低㊁中㊁高剂量组血浆S P ㊁S S 含量显著降低(P <0.05),术连饮中㊁高剂量组结肠组织S P 含量显著降低(P <0.05),术连饮低㊁中㊁高剂量组结肠组织S S 含量显著降低(P <0.01)㊂结论:术连饮可有效改善I B S -D 模型大鼠肠运动障碍,其作用机制可能与调节血浆及结肠组织S P ㊁S S 水平有关㊂ʌ关键词ɔ 术连饮;腹泻型肠易激综合征;P 物质;生长抑素;匹维溴铵中图分类号:R 289.3 文献标识码:A D O I :10.19621/j.c n k i .11-3555/r .2023.0323 肠易激综合征(i r r i t a b l eb o w e l s y n d r o m e ,I B S )是常见的胃肠道功能性疾病,以腹泻㊁腹痛㊁排便习惯改变和大便性状异常为特征,除外器质性病变[1]㊂本病症状持续存在或间歇发作,严重影响患者的生活质量和工作效率,并消耗大量的公共卫生资源㊂I B S 可分为腹泻型肠易激综合征(d i a r r h e a l i r r i t a b l e b o w e l s y n d r o m e ,I B S -D )㊁便秘型肠易激综合征(c o n s t i p a t i o nt y p ei r r i t a b l e b o w e ls yn d r o m e ,I B S -C )及混合型肠易激综合征(m i x e di r r i t a b l e b o w e l s yn d r o m e ,I B S -M ),临床以I B S -D 常见㊂I B S -D 的发病机制尚未明确,主要与胃肠功能紊乱㊁内脏感觉异常及精神心理障碍等因素有关[2]㊂目前西医治疗本病以对症治疗为主,疗效较为局限㊂研究显示,I B S -D 的发生与肠动力障碍及胃肠激素的分泌紊乱密切相关[2]㊂中医方剂具有整体观念与辨证论治的优势,已逐渐成为防治I B S 的重要手段㊂术连饮由清㊃董西园‘医级宝鉴“中的术连丸[3]衍化而来,前期研究表明,将术连丸改丸为汤命名为 术连饮 ,白术㊁黄连以4ʒ1的比例配伍后,可促进胃排空,调节胃动力[4]㊂本研究观察术连饮对I B S -D 模型大鼠体质量㊁粪便含水量㊁肠道推进率,以及血浆及结肠组织P 物质(S P )㊁生长抑素(S S )的影响,探讨术连饮调节肠动力作用的可能机制㊂1 材料与方法1.1 动物与分组 选取清洁级雄性S D 大鼠60只,体质量(200ʃ20)g ,由福建医科大学实验动物中心提供,实验动物许可证号:S C X K (闽)2016-0002㊂本实验研究过程遵守‘实验动物伦理与福利“和‘关于善待实验动物的指导性意见“中的原则和要求㊂适应性饲养1周后,按体质量均衡原则随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组㊁模型组㊁匹维溴铵组㊁术连饮低剂量组㊁术连饮中剂量组㊁术连饮高剂量组㊂57中国民间疗法2023年2月第31卷第3期基础研究中国民间疗法C H I N A S N A T U R O P A T H Y,F e b.2023,V o l.31N o.31.2药物与试剂生白术与黄连(黄冈金贵中药产业发展有限公司,批号:D9080101),术连饮煎液生药浓度为1g/m L;番泻叶(江西樟树天齐堂中药饮片有限公司,批号:1908006)水煎液生药浓度为2g/m L㊂药物置于4ħ冰箱备用㊂匹维溴铵片(法国A b b o t tL a-b o r a t o r i e sL i m i t e d,批号:708624),水合氯醛(上海麦克林生化科技有限公司,批号:C804539),冰醋酸(南京建成生物科技有限公司,批号:b018),氢氧化钠(西陇科学股份有限公司,C A S:1310-73-2),多聚甲醛(b i o s h a r p,B L539A)㊂生理盐水(广东环凯微生物科技有限公司,071700)㊂2%葡聚糖蓝-2000(D B-2000,北京拜尔迪生物有限公司)㊂S P试剂盒(批号: J L12596)㊁S S试剂盒(批号:J L12910)均购自江莱生物有限公司㊂1.3仪器6956型烘箱(美国T h e r m o公司),高速冷冻离心机(德国E p p e n d o r f),多功能酶标仪(赛默飞科技有限公司)㊂1.4模型建立及方法(1)建立I B S-D大鼠模型除空白对照组外,模型组㊁匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组均采用番泻叶灌胃联合束缚刺激法建立I B S-D大鼠模型[5]㊂具体操作如下:番泻叶水煎液20m L㊃k g-1灌胃,每日两次,灌服1h后,用软毛发圈束缚大鼠前肢,并用透明胶带缠绕其胸部及肩部,限制其用前肢搔抓头面部,但不限制其活动,束缚1h,连续造模14d㊂空白对照组每日仅用生理盐水20m L㊃k g-1灌胃,不做任何束缚刺激㊂(2)给药方法造模第15日开始给药,除空白对照组外,其余各组继续灌服番泻叶水煎液20m L㊃k g-1, 1h后灌胃给药,术连饮低㊁中㊁高剂量组分别给予术连饮2.3g㊃k g-1㊁4.6g㊃k g-1㊁9.2g㊃k g-1灌胃,匹维溴铵组给予18.5m g㊃k g-1灌胃,空白对照组和模型组均灌胃生理盐水20m L㊃k g-1㊂给药1h后,如前所述束缚1h,每日1次㊂连续给药14d㊂1.5模型观察与指标检测(1)一般状态观察大鼠造模后及给药前后精神状态㊁活动及排便情况等㊂(2)指标检测和病理观察 ①粪便含水量㊂收集各组大鼠干预前(即给药前)和干预后(即给药14d 后)粪便,排便1h内称粪便湿质量(m0),然后置于烘干箱,烘干至粪便质量不再发生变化,称粪便干质量(m1),粪便含水量=(m0-m1)/m0ˑ100%㊂②肠道推进率㊂各组大鼠于给药结束前1d(第28日),禁食24h(水㊁药不禁),第29日取2%D B-20000.4m L作为胃肠内标记物灌胃,20m i n后脱臼处死,立即剖腹,分别测量幽门至色素最前端㊁幽门至直肠末端的距离,二者之比的百分率即为肠道推进率(%)㊂③血浆S P㊁S S含量㊂第29日给予各组大鼠水合氯醛0.3g㊃k g-1麻醉,腹壁静脉取血,抗凝,4ħ㊁3000r㊃m i n-1离心10m i n,分离血浆,-20ħ保存待测㊂采用酶联免疫吸附试验检测㊂④结肠组织S P㊁S S含量㊂采血后,距离大鼠肛门5c m处取结肠组织1c m,滤纸吸湿后称重,置于组织研磨器中,加入1m o l/L的冰醋酸1m L,煮沸5m i n后匀浆,加入1m o l/L的N a O H1m L中和,3000r㊃m i n-1离心10m i n,-70ħ保存待测㊂采用酶联免疫吸附试验检测㊂⑤苏木素-伊红染色法(H E)观察大鼠结肠黏膜形态学改变㊂取大鼠结肠组织置于4%多聚甲醛中固定24h,梯度酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,制成5μm切片,常规H E染色,观察大鼠结肠黏膜病理组织形态学变化㊂1.6统计学方法采用S P S S23.0软件统计数据㊂计量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,采用单因素方差分析或t检验㊂P<0.05表示差异有统计学意义㊂2结果2.1大鼠一般状态比较与空白对照组比较,模型组大鼠精神倦怠,皮毛干枯易脱落,喜蜷缩㊁扎堆,束缚时易暴躁㊁打斗,体质量降低,大便稀软或为水样便,肛周多见污秽等㊂匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组大鼠精神状态好转,皮毛渐见光泽,体质量增加,稀便减少或成形㊂2.2大鼠体质量比较造模前,各组大鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)㊂造模14d后(即给药前),与空白对照组比较,其余各组大鼠体质量显著降低(P<0.01)㊂干预14d后(即给药后),与模型组比较,匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组体质量均显著升高(P<0.01或P<0.05)㊂与匹维溴铵组比较,术连饮低㊁中㊁高剂量组体质量均无显著性差异(P>0.05)㊂术连饮低㊁中㊁高剂量组之间体质量比较,均无显著性差异(P> 0.05)㊂见表1㊂67中国民间疗法2023年2月第31卷第3期基础研究中国民间疗法C H I N A S N A T U R O P A T H Y ,F e b .2023,V o l .31N o .3表1 各组大鼠体质量比较(g,x ʃs )组别只数造模前给药前给药后空白对照组10212.06ʃ17.36298.80ʃ18.53380.74ʃ17.88模型组10212.71ʃ17.57244.48ʃ16.76әә265.85ʃ18.26匹维溴铵组10211.33ʃ16.58242.32ʃ15.85әә304.62ʃ16.59һһ术连饮低剂量组10212.45ʃ16.74243.07ʃ16.06әә289.17ʃ18.37һ术连饮中剂量组10209.02ʃ15.83240.62ʃ14.32әә294.66ʃ16.05һһ术连饮高剂量组10213.01ʃ18.35245.61ʃ17.31әә301.47ʃ17.53һһ注:与空白对照组给药前比较,әәP <0.01;与模型组给药后比较,һP <0.05,һһP <0.01㊂2.3 大鼠粪便含水量比较 与空白对照组比较,给药前模型组大鼠粪便含水量显著增加(P <0.01)㊂给药后,与模型组比较,匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组粪便含水量均显著降低(P <0.01)㊂与匹维溴铵组比较,术连饮低㊁中㊁高剂量组粪便含水量均无显著性差异(P >0.05)㊂术连饮低㊁中㊁高剂量组之间粪便含水量比较,均无显著性差异(P >0.05)㊂见表2㊂表2 各组大鼠粪便含水量比较(%,x ʃs )组别只数给药前给药后空白对照组1037.86ʃ8.4736.69ʃ9.10模型组1073.02ʃ13.01әә70.82ʃ15.16匹维溴铵组1074.34ʃ15.96әә39.45ʃ8.86һһ术连饮低剂量组1074.28ʃ15.27әә43.78ʃ10.24һһ术连饮中剂量组1075.33ʃ16.09әә41.59ʃ9.39һһ术连饮高剂量组1071.35ʃ14.55әә40.83ʃ9.15һһ注:与空白对照组给药前比较,әәP <0.01;与模型组给药后比较,һһP <0.01㊂2.4 大鼠肠道推进率比较 与空白对照组比较,模型组大鼠肠道推进率显著增加(P <0.01)㊂与模型组比较,匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组肠道推进率均显著降低(P <0.01)㊂与匹维溴铵组比较,术连饮低㊁中㊁高剂量组肠道推进率均无显著性差异(P >0.05)㊂术连饮低㊁中㊁高剂量组之间肠道推进率比较,均无显著性差异(P >0.05)㊂见表3㊂表3 各组大鼠肠道推进率比较(%,x ʃs )组别只数 肠道推进率空白对照组1060.73ʃ8.86模型组1086.80ʃ6.28әә匹维溴铵组1063.54ʃ8.75һһ术连饮低剂量组1072.32ʃ11.08һһ术连饮中剂量组1070.63ʃ10.53һһ术连饮高剂量组1069.35ʃ10.11һһ注:与空白对照组比较,әәP <0.01;与模型组比较,һһP <0.01㊂2.5 大鼠血浆㊁结肠组织S P 表达比较 与空白对照组比较,模型组血浆㊁结肠组织S P 含量明显增加(P <0.01)㊂与模型组比较,匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组血浆S P 含量明显降低(P <0.01或P <0.05),匹维溴铵组及术连饮中㊁高剂量组结肠组织S P 含量明显降低(P <0.05)㊂与匹维溴铵组比较,术连饮低㊁中㊁高剂量组血浆与结肠组织S P 含量均无显著性差异(P >0.05)㊂术连饮低㊁中㊁高剂量组之间血浆与结肠组织S P 含量比较,均无显著性差异(P >0.05)㊂见表4㊂表4 各组大鼠血浆㊁结肠组织P 物质表达比较(n g/m L ,x ʃs )组别只数血浆含量结肠组织含量空白对照组100.58ʃ0.1228.83ʃ4.25模型组100.84ʃ0.16әә35.48ʃ5.37әә匹维溴铵组100.61ʃ0.13һһ29.65ʃ4.41һ术连饮低剂量组100.67ʃ0.18һ32.36ʃ4.54术连饮中剂量组100.65ʃ0.15һ31.01ʃ4.03һ术连饮高剂量组100.64ʃ0.17һ31.14ʃ3.65һ注:与空白对照组比较,әәP <0.01;与模型组比较,һP <0.05,һһP <0.01㊂2.6 大鼠血浆㊁结肠组织S S 表达比较 与空白对照组比较,模型组大鼠血浆㊁结肠组织S S 含量明显增加(P <0.01)㊂与模型组比较,匹维溴铵组及术连饮低㊁中㊁高剂量组血浆与结肠组织S S 含量明显降低(P <0.01或P <0.05)㊂与匹维溴铵组比较,术连饮低㊁中㊁高剂量组血浆与结肠组织S S 含量均无显著性差异(P >0.05)㊂术连饮低㊁中㊁高剂量组之间血浆与结肠组织S S 含量比较,均无显著性差异(P >0.05)㊂见表5㊂表5 各组大鼠血浆㊁结肠组织生长抑素表达比较(p g/m L ,x ʃs )组别只数血浆含量结肠组织含量空白对照组109.05ʃ1.8310.85ʃ2.69模型组1012.53ʃ2.53әә20.13ʃ4.78әә匹维溴铵组109.36ʃ2.16һһ12.65ʃ2.86һһ术连饮低剂量组1010.25ʃ2.12һ14.38ʃ3.57һһ术连饮中剂量组109.98ʃ2.32һ13.79ʃ3.42һһ术连饮高剂量组109.57ʃ2.20һ13.45ʃ3.32һһ注:与空白对照组比较,әәP <0.01;与模型组比较,һP <0.05,һһP <0.01㊂2.7 I B S -D 模型大鼠结肠黏膜病理组织形态学观察 空白对照组结肠黏膜组织正常,肠绒毛排列整齐,肠屏障完整㊂与空白对照组比较,模型组固有层腺体轻微萎缩,见少量炎症细胞浸润,结肠黏膜下层及肌层未见明显病理改变㊂结果见图1-2(见本期第125页)㊂3 讨论I B S -D 属于中医泄泻 腹痛 等范畴,临床常见大便溏薄㊁次数增多㊁粪质清稀,兼有食少形瘦㊁脘腹77中国民间疗法2023年2月第31卷第3期基础研究中国民间疗法C H I N A S N A T U R O P A T H Y,F e b.2023,V o l.31N o.3不适等症㊂‘景岳全书㊃泄泻“曰: 泄泻之本,无不由于脾胃㊂ [6]‘罗氏会约医境㊃泄泻“云: 泻由脾湿,湿由脾虚㊂ [7]脾主运化升清,喜燥而恶湿,脾运健旺,则水谷得以运化,水液如常输布;若脾失健运,水湿内生,湿郁化热,清浊不分,下注大肠,则生泄泻㊂因此,脾虚湿盛是I B S-D的主要病机,治疗应以健脾燥湿止泻为主㊂术连饮重用白术为君药,健脾燥湿以复健运;黄连为臣佐药,善清大肠湿热以止泻痢㊂二药合而用之,补清兼施,寒温并用,标本兼顾,共奏健脾止泻㊁清热燥湿之功㊂本研究采用番泻叶灌胃联合束缚刺激法制备I B S-D大鼠模型㊂如前所述,脾虚湿盛是I B S-D的主要病机,而精神心理障碍常诱发或加重I B S发病,I B S 患者更易情绪激动㊁焦虑和抑郁[8]㊂本研究中番泻叶煎剂灌胃是造成脾虚的主因,辅以束缚刺激,可加重脾虚的症状㊂造模后,与空白对照组比较,模型组体质量明显下降,粪便含水量异常升高,出现腹泻症状㊂结肠黏膜病理形态学显示,模型组未见水肿㊁充血及溃疡形成㊂I B S为功能性胃肠病,无明显器质性改变,说明本研究制备的I B S-D大鼠模型是成功的㊂术连饮干预后,大鼠肠运动障碍得以改善,粪便含水量㊁肠道推进率均显著降低,体质量显著提高㊂胃肠道运动主要由肠神经系统(E N S)调节,通过多肽激素进行调控㊂近年来研究发现,I B S-D的发生与胃肠激素的分泌紊乱密切相关[9]㊂本研究观察了I B S-D模型大鼠血浆及结肠组织S P㊁S S表达的变化㊂S P为兴奋性脑肠肽,具有神经递质和调制因子的作用,肠道中S P通过与受体结合对消化道平滑肌发挥强烈的刺激作用㊂任培培等[10]研究显示,I B S-D模型大鼠血清中S P含量异常升高,能增强胃肠蠕动,推进结肠运动,产生肠鸣㊁腹泻等症状㊂S S主要分布于肠壁神经丛及胃㊁胰液的D细胞中,对胃肠道的运动和吸收具有调节作用㊂研究表明,I B S-D模型大鼠血浆和结肠黏膜中S S的含量明显升高[11]㊂刘美荣等[12]亦发现,I B S-D模型大鼠血浆和回肠组织中S S表达异常升高,并认为S S的升高间接刺激了肥大细胞,从而释放过量的生物活性物质,参与并引起肠道运动异常,出现腹痛㊁腹泻等症状㊂这一结果与本研究接近,本研究结果显示,模型组血浆及结肠组织S P㊁S S显著升高,粪便含水量及肠推进率显著增强,出现肛周污秽㊁大便稀软或不成形,体质量显著降低等;术连饮干预后,大鼠血浆及结肠组织S P㊁S S含量明显降低,粪便含水量及肠推进率明显降低,稀水便减少或成形,体质量明显增加㊂术连饮可能通过降低血浆及结肠组织S P㊁S S的表达,改善肠道的运动功能,使腹泻症状得以减轻或好转,达到治疗I B S-D的目的㊂由于脑-肠互动对胃肠动力及情绪调节具有重要意义,本课题后续研究将围绕脑-肠轴进一步探讨术连饮调节肠运动的作用机制㊂参考文献[1]高改风.参苓白术散配合艾灸治疗肠易激综合征临床观察[J].陕西中医,2017,38(8):1020-1021.[2]E L-S A L H Y M,G U N D E R S E N D,G I L J A O H,e t a l.I s i r r i-t a b l eb o w e ls y n d r o m ea no r g a n i cd i s o r d e r[J].W o r l dJG a s t r o e n t e r o l,2014,20(2):384-400.[3]董西园.医级[M].朱杭溢,冯丹丹,校注.北京:中国中医药出版社,2015:323.[4]刘蔚雯,黄群,张苏娜.术连饮调节胃动力的配伍研究[J].中国医药科学,2012,2(16):24-25.[5]谭玮璐,武志娟,张大鹏,等.附子理中汤对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠黏膜N A L P-3炎性体等免疫指标的调节作用[J].中药材,2018,41(4):970-974.[6]张介宾.景岳全书(下)[M].上海:上海第二军医大学出版社,2006:966.[7]罗国纲.罗氏会约医镜[M].北京:人民卫生出版社, 1965:302.[8]杨江升,徐珊,申屠利明,等.宁心安神法对腹泻型肠易激综合征模型大鼠生长抑素的影响[J].浙江中医药大学学报,2011,35(5):710-712.[9]陈祥林,王鸿鹏,蔡腾,等.针灸治疗肠易激综合征的作用机制研究进展[J].广州中医药大学学报,2018,35(6): 1011-1015.[10]任培培,王淼蕾,赵丽,等.平胃胶囊对肝郁脾虚腹泻型肠易激综合征大鼠脑肠肽的影响[J].华西药学杂志,2021, 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