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培养基的配制
1、大量元素母液的配制：依次称量所需药品的用量分别放入一个烧杯，加少量蒸馏水彻底溶解后依次混合，最后用蒸馏水定容。
贴好标签保存于冰箱中。
2、微量元素母液的配制：由于微量元素称取量很小，为避免误差可适当增加母液的量。
依次称量所需药品的用量分别放入一个烧杯，加少量蒸馏水彻底溶解后依次混合，最后用蒸馏水定容。
贴好标签保存于冰箱中。
3、铁盐母液的配制：把FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别置于450ML蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（可用磁力搅拌器搅拌），然后将两种溶液混合，调PH值到5.5，加蒸馏水到最终容积1L，置于棕色细口瓶中，用力振荡1~2min，避光保存
4、有机母液的配制：由于称取量很小，为避免误差可适当增加母液的量。
依次称量所需药品的用量分别放入一个烧杯，加少量蒸馏水彻底溶解后依次混合，最后用蒸馏水定容。
贴好标签保存于冰箱中。
激素母液配制：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
由于多数激素难溶于水，它们的配法如下：生长素类: IAA，IBA, 2，4-D用适量无水乙醇或1M NaOH 彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
α-NAA可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
细胞分裂素类：KT和6-BA先溶于少量1M NaOH中，再加水定容。
反式玉米素先溶于适量1M NaOH中，再加水至一定浓度。
赤霉素类：GA3先溶于适量无水乙醇中，再加水定容到一定浓度。
培养基的制备一、配制原则和种类（一）培养基配制原则１、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。
制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。
因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。
换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌状态。
２、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。
一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应高。
须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。
（二）培养基的种类１、根据营养物质的来源，可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
（１）天然培养基天然培养基是指用化学成分还不清楚或化学成分不恒定天然有机物配制而成的培养基，如各种农副产品及其下脚料──小麦、大豆、玉米粉、麸皮、米糠、作物秸秆、木屑、棉籽壳、甘蔗渣等，以及动植物组织的浸出液──牛肉膏、肉汤、马铃薯汁、麦芽汁、豆芽汁等都可以用来配制天然培养基，这种培养基来源广，成本低，营养丰富，适合于在生产上大规模培养菌类使用，但这些天然有机物质因产地、品种、生长期的不同，化学成分不能宣。
每批成分也不稳定，不宜用来做精细的科学实验。
以分离驯化食用菌培养基（２）半合成培养基为了促进食用菌菌丝的生长发育，常在天然培养基中添加适量的无机盐类，或在合成培养基中添加适量的某些天然有机物，就成为半合成培养基。
这类培养基种类繁多，应用广泛，也是生长菌种和实际栽培最常用的培养基。
培养基配制中注意事项培养基是微生物学研究的基础设施，是用于培养和繁殖微生物的营养物质的混合物。
正确配制培养基对于保证微生物的生长和繁殖至关重要。
以下是在培养基配制过程中需要注意的事项：1.选择适当的配方：根据培养细菌的需求，选择合适的营养物质组成。
不同的微生物对于碳源、氮源、矿物质、维生素等需求不同，因此选择合适的培养基配方非常重要。
2.选择合适的pH值：不同的微生物对于pH值的要求不同，因此在配制培养基时要根据细菌的需求选择合适的pH值。
一般情况下，大多数细菌可以在中性pH范围内生长，但也有一些需要酸性或碱性条件的细菌。
3.合理调整浓度：培养基中各种营养物质的浓度对于微生物的生长和繁殖起着至关重要的作用。
通常情况下，培养基中的碳源、氮源和矿物质的浓度要根据微生物的需求进行合理调整。
4.注意无菌操作：在配制培养基的过程中，要注意无菌操作，以避免污染。
使用无菌的培养器具和耗材，进行无菌操作，避免外源性微生物的污染。
5.控制温度和时间：培养基的配制和煮沸时间要适当控制，以保证营养物质的溶解和杀死潜在的污染微生物。
同时，还需要控制配制和煮沸后培养基的冷却速度，以避免蛋白质的凝固和酶的降解。
6.储存培养基：配制好的培养基应及时储存，以防止其变质和污染。
要选择适当的储存条件，如低温、防潮、避光等，以延长培养基的保存时间。
7.检测培养基的效力：在使用培养基之前，要对其进行效力检测。
使用已知的细菌菌种进行验证，如果细菌能够在培养基上生长和繁殖，说明培养基是有效的，可以使用。
8.记录配制过程：在配制过程中，要详细记录配方和步骤，以备将来的参考和整改。
同时，还要记录培养基的批号和保存时间，以便追溯。
总之，在培养基配制过程中，我们需要注意选择适当的配方和调整营养物质的浓度，进行无菌操作和控制温度与时间，储存培养基并进行效力检测。
这些注意事项可以保证培养基的质量和有效性，从而促进微生物学研究的顺利进行。
培养基的配制注意事项培养基是用来培养和繁殖微生物的基础物质，配制培养基时需要注意一些重要事项。
下面就是一些配制培养基的注意事项。
首先，培养基的配制要确保材料的纯净度。
培养基的质量和纯度直接影响到培养菌株的生长和繁殖。
因此，在配制培养基时要使用高质量的试剂，如脱离培养基组分、高纯度的激素、无菌水等。
同时，所有实验器皿、培养杯、培养皿等都需要经过高压灭菌或其他严格消毒处理，以确保无菌状态。
其次，培养基的配制要注意组分的比例。
组分比例的错误可能导致培养基的pH值偏离正常范围，从而影响菌株的生长。
因此，在配制培养基时，我们要严格按照制定的配方和组分比例来配制，避免过量或不足。
第三，配制培养基要注意溶解度。
有些培养基组分可能难以溶解，如果不充分溶解就直接使用，会导致培养基的均匀性差，不利于微生物的生长。
因此，配制培养基时，我们可以先将难溶组分进行预处理，如高温加热、搅拌等，使其完全溶解后再进行配制。
第四，配制培养基要注意消毒。
无论是液体培养基还是固体培养基，在配制后都需要进行严格的消毒处理，以杀灭其中可能存在的微生物污染。
常用的消毒方法有高压灭菌、滤器消毒等，具体方法可以结合培养基的特点来选择。
最后，配制培养基要注意保存。
配制好的培养基在使用前应储存在干燥、阴凉的地方，以免受潮和污染。
尤其对于固体培养基，要使用无菌铝箔包装，并保存在适当的温度下，以保持培养基的质量和无菌状态。
综上所述，培养基的配制需要注意材料的纯净度、组分比例、溶解度、消毒和保存等方面的问题。
只有注意这些事项，才能保证培养基的质量和有效地培养和繁殖微生物。
/846443755/blog/1310470351/846443755/blog/1310470322/578992878/blog/1311176032B5培养基成分使用浓度(mg/L)大量元素KNO3 2500 MgSO4·7H2O 250CaCl2·2H2O 150 (NH4)2SO4 134微量元素KI 0.75 H3BO4 3.0MnSO4·4H2O 10 ZnSO4·7H2O 2.0Na2MoO4·2H2O 0.25 CoCl2·6H2O 0.025铁盐CuSO4·5H2O 0.025 Na2-EDTA 37.3FeSO4·7H2O 27.8有机成分肌醇100 烟酸 1.0盐酸吡哆醇 1.0 盐酸硫铵10注意事项1、现在一般用通用铁盐代替草酸铁。
2、过磷酸钙先用盐酸溶解，再加入培养基中。
3、现在琼脂质量较好，具体用量，自己掌握。
4、用于兰花播种和组织培养，具有较好的缓冲能力B5培养基的组成和配方组成成分数量(mg/l）KNO3 2500大量元素CaCl2·2H2O 150MgSO4·7H2O 250(NH4)2SO4 134KI 0.75H3BO4 3.0MnSO4·4H2O 10微量元素ZnSO4·7H2O 2.0Na2MoO4·2H2O 0.25CoCl2·6H2O 0.025CuSO4·5H2O 0.025铁盐Na2-EDTA 37.3FeSO4·7H2O 27.8肌醇100烟酸 1.0有机成分盐酸吡哆醇 1.0盐酸硫铵10N6培养基配方组成成分数量(mg/l）硝酸钾(KN03) 2830硫酸铵(NH4SO4) 463大量元素氯化钙(CaCl2·2HzO) 166硫酸镁(MgSO4·7H20) 185磷酸二氢钾(KH2PO4) 400硫酸亚铁(FeSO４·7H20) 27.8硫酸锰(MnS04·4H20) 4.4微量元素硫酸锌(ZnSO4·7H20) 1.6硼酸(H2BO3) 0.8碘化钾(KI) 1.6甘氨酸 2有机成分烟酸0.5盐酸硫胺素(维B1) 1.0盐酸吡哆素(维B6)1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备：首先，需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外，还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂：按照配方中的比例，准确地称取所需的试剂。
在称量过程中，应注意保持实验环境的清洁，并使用洁净的称量工具，以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂：将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中，可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后，应检查溶液的透明度和均匀性，确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值：根据具体的培养基配方，使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液，并经过搅拌均匀，逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中，应注意避免过度调节，以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒：将配制好的培养基加热至沸腾，保持沸腾状态持续5-10分钟，以达到消毒的目的。
在加热过程中，应注意避免溢出和烧焦，同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却：将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度，通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中，应避免引入环境中的微生物污染，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存：将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中，并密封保存。
在分装过程中，要注意避免试剂接触到外界空气，以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁，操作过程要注意无菌操作，以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中，应准确称取试剂的质量，并按照配方中的比例进行配比，以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时，应充分搅拌均匀，确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时，应注意控制加热时间和温度，以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中，要避免污染和细菌的侵入，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行，并尽快密封保存，避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
一、实验所需的仪器设备和用具。
二、实验安排与要求：将全班若干小组（6-7人），每小组配制500 mlMS固体培养基，三、边示范边讲解实验方法和步骤1、计算并填写培养基成分单计算公式：∨母液＝∨配制÷母液倍数∨激素＝∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2. 每组取500ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，用天平称4g琼脂放入蒸馏水中，在电炉上加热溶解。
称15g蔗糖放入溶解的琼脂中。
3. 按配方取出各种母液，放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中，用玻璃棒搅动混合，并加蒸馏水定容至500ml。
4. 用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8，可用PH精密试纸或酸度计测定。
5. 用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中。
6. 用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口，并做好标记。
7. 把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水至水位线。
盖好锅盖，上好螺丝，接通电源升温。
待锅内温度达100。
C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时，打开排气阀排净锅内冷空气，然后关闭排气阀，继续加热至温度达到121。
C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时，维持20~30min即可切断电源，让锅内气压自然下降，当压力降到零点后，打开排气阀，排出剩余蒸汽，再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。
8. 培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后，存放于阴凉干燥洁净处待用。
四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验试验一：培养基的配制学号：200730030120 班级专业：07茶学姓名：张晓菊联系电话：136****3981实验目的：1、了解培养基的组成，掌握培养基的配制原理和步骤。
2、了解影响培养基配制的因素。
3、了解灭菌基本操作。
4、为植物的离体培养创造营养条件。
实验原理：培养基的类别，依据培养基中是否加有固化剂可分为固体培养基和液体培养基，前者因加有固化剂如琼脂或卡拉胶而呈固体状态，后者不加固化剂，培养基为液体。
关于发酵常用培养基的基本原则
按用途培养基按其用途可分为孢子培养基、种子培养基和发酵培养基三种。
(1) 孢子培养基
孢子培养基是供菌种繁殖孢子的一种常用固体培养基，对这种培养基的要求是能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，并要求这种培养基不易引起菌种发生变异。
所以对孢子培养基的基本配制要求是：第一，营养不要太丰富（特别是有机氮源），否则不易产孢子。
如灰色链霉在葡萄糖-硝酸盐-其它盐类的培养基上都能很好地生长和产孢子，但若加入0.5%酵母膏或酪蛋白后，就只长菌丝而不长孢子。
第二，所用无机盐的浓度要适量，不然也会影响孢子量和孢子颜色。
第三，要注意孢子培养基的pH和湿度。
生产上常用的孢子培养基有：麸皮培养基、小米培养基、大米培养基、玉米碎屑培养基和用葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食盐等配制成的琼脂斜面培养基。
大米和小米常用作霉菌孢子培养基，因为它们含氮量少，疏松、表面积大，所以是较好孢子培养基。
大米培养基的水分需控制在21%－50%，而曲房空气湿度需控制在90%－100%。
(2) 种子培养基
种子培养基是供孢子发芽、生长和大量繁殖菌丝体，并使菌体长得粗壮，成为活力强的“种子”。
所以种子培养基的营养成分要求比较丰富和完全，氮源和维生素的含量也要高些，但总浓度以略稀薄为好，这样可达到较高的溶解氧，供大量菌体生长繁殖。
种子培养基的成分要考虑在微生物代谢过程中能维持稳定的pH，其组成还要根据不同菌种的生理特征而定。
一般种子培养基都用营养丰富而完全的天然有机氮源，因为有些氨基酸能刺激孢子发芽。
但无机氮源容易利用，有利于菌体迅速生长，所以在种子培养基中常包括有机及无机氮源。
最后一级的种子培养基的成分最好能较接近发酵培养基，这样可使种子进入发酵培养基后能迅速适应，快速生长。
(3) 发酵培养基
发酵培养基是供菌种生长、繁殖和合成产物之用。
它既要使种子接种后能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成需产物。
因此，发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前体和促进剂等。
但若因生长和生物合成产物需要的总的碳源、氮源、磷
源等的浓度太高，或生长和合成两阶段各需的最佳条件要求不同时，则可考虑培养基用分批补料来加以满足。
培养基成分和配比的选择培养基的组分（包括这些组分的来源和加工方法）、配比、缓冲能力，粘度，消毒是否易彻底，消毒后营养破坏程度，及原料中杂质的含量都对菌体的生长和产物形成有影响。
但目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基配方。
目前还只能是在生物化学、细胞生物学等的基本理论指导下，参照前人所使用的较适合于某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备，对碳源、氮源、无机盐和前体等进行逐个单因子试验，观察这些因子对菌体生长和产物合成量的影响。
最后再综合考虑各因素的影响，得到一个比较适合本菌种的生产配方，以求得到高产。
为了加快试验时间，可考虑用“正式试验设计”等数学方法来确定培养基组分和浓度，它可以通过比较少的实验次数而得到较满意的结果。
另外还可通过方差分析，了解哪个因素影响较大，以引起人们的注意。
在考虑培养基总体要求时，要注意一些问题。
第一，考虑碳源、氮源时，要注意快速利用的碳（氮）源和慢速利用的碳（氮）源的相互配合，发挥各自的优势，避其所短。
第二，选用适当的碳氮比。
培养基中氮比的影响极为明显。
氮源过多，会使菌体生长过于旺盛，pH偏高，不利于代谢产物的积累，氮源不足，则菌体繁殖量少，从而影响产量，碳源过多，则容易形成较低的pH，若碳源不足，易引起菌体衰老和自溶。
另外碳氮比不当还会影响菌体按比例地吸收营养物质，直接影响菌体的生长和产物的形成。
菌体在不同的生长阶段，其对碳氮比的最适要求也不一样。
一般碳源因为既作碳架又作能源，因此用量要比氮多。
从元素分析来看，酵母菌细胞中碳氮比约为100：20，霉菌约为100：10；一般工业发酵培养基的碳氮比约为100：0.2－2.0；但在氨基酸发酵中，因为产物中含氮多，所以碳氮比就要相对高一些。
例如谷氨酸生产中取碳氮比100：15－21，若碳氮比为100：0.5－2.0，则会出现只长菌体，而几乎不合成谷氨酸的现象。
碳氮比随碳水化合物及氮源的种类以及通气搅拌等条件而异，很难确定一个统一的比值。
第三，要注意生理酸、碱性盐和pH缓冲剂的加入和搭配。
这是根据该菌种在现有工艺设备条件下，其生长合成产物时pH变化情况，以及最适pH控制范围等，综合考虑选用什么生理酸碱性物质及其用量，从而保证在整个发酵过程中pH都能维持在最佳状态（有时也可考虑用中间补料来控制pH）。
培养基成分的用量的多少，大部分是根据经验而来。
但有些主要代谢的产物因为它们的代谢途径比较清楚，所以可以根据物料平衡计算来加以确定，例如在酒精生产中可根据淀粉的用量计算洒精的理论产率。
从上式可计算出青霉素G的理论得率为每克葡萄糖得1.1克青霉素G。
在确定培养基中碳源数量时，还要考虑用于菌体生长和维持所需的消耗。
在选择培养基所用的有机氮源时，特别要注意原料的来源、加工方法和有效成分的含量。
有机氮源大部分为农副产品，其中所含的成分受产地、加工、贮藏等的影响较大，常会引起产量的波动。
例如黄豆饼粉、花生饼粉、棉子饼粉等，它们的产地不同有机氮的成分和含量也不同，东北大豆含胱氨酸和蛋氨酸的量比华北、江南产的黄豆含量高，有利于链霉素的生产。
又如豆饼粉加工有热榨和冷榨两种，它们对发酵产品的产量影响就各不相同。
在酱油生产中采用热榨豆饼较好，因为热榨豆饼中水分含量少，蛋白质含量高，易破碎且使用方便。
而链霉素生产却以冷榨豆饼为宜。
低温贮藏可延长贮存期，若于室温存放，尤其是夏天，豆饼中的油酯等易氧化变质，影响微生物生物合成。
发霉变质的饼粉对产量也有明显影响。
国外为了稳定生产，把棉籽饼粉加工制得成分稳定的商品药用培养基，已用于青霉素等发酵生产。
热榨豆饼和冷榨豆饼的主要成分含量成分——
加工方法水分（%）粗蛋白（%）粗脂（%）碳水化合物（%）灰分（%）冷榨12.12 46.45 6.12 26.24 5.44
热榨 3.38 47.94 3.74 22.84 6.31
糖蜜是制糖工业的副产物，其工艺有碳酸法和亚硫酸法，这两种工艺所得糖蜜的成分有所不同。
即使同种工艺不同产地的甘蔗（土质、气候）和存放期不同都影响糖蜜的质量，所以它的有效成分波动甚大。
用甜菜制作的糖蜜，转化糖含量低，PH呈碱性。
甘蔗糖蜜转化糖含量，PH呈酸性。
还有些发酵工厂用葡萄糖结晶后所得的母液作碳源。
在制备培养基时水质的影响也应注意，各地区的深井水和自来水的质量有很大差别。
其中微量元素的含量，对成分简单的孢子培养基或种子培养基有较大的影响。
在制酒或啤酒工业中更要注意选择水瓶、控制水的硬度、含铁量、含氯量及氨态、硝酸态和亚硝酸态的氮含量，一般常用电渗析或离子交换树脂等进行水的纯化国。
培养基的原料在大规模工业生产中用量很大。
在选用时，应尽就近利用较丰富的廉价原料，设法降低成本。
例如原来生产赖氨酸用山芋漃粉，后来改用山芋粉为碳源，这样不仅价廉，而且山芋粉中还含有生物素、镁盐等，当培养基改用山芋粉后，就将可省去原来要加的玉米浆，硫酸镁，并整个成本降低15%。
有些原料在使用前要进行预处理。
如一些谷物或山芋干等农产品。
使用前要去除杂草、泥块、石头、小铁丁等杂物以免损坏粉碎机。
又如要酒精、丙酮、丁醇等的生产中，淀粉原料使用量大，需要预先进行蒸煮、糊化，使酵母能有效地将其糖化。
糊化程度与温度、时间有关，蒸煮温度过低使糊化不充分，影响糖化率；反之，则会发生焦化等情况，影响营养成分，甚至产生黑色素等有害物质。
为了避免长时间的蒸煮，可将大块干薯加以粉碎过筛。
国外生产抗生素用培养基均通过200目筛子。
有些谷物如大麦、高粱、橡子等原料最好先
云皮壳，这样一方面可防止㿹中有害物和单宁等带入发酵醪（液），影响微生物生长和产物形成；另一方面大量皮壳占去一定体积，降低了设备的利用率，且堵塞管道，增加流动阻力。
在使用糖蜜时，在必要时，也要进行预处理。
例如在柠檬酸生产时，为了去除糖蜜中铁离子，防止异柠檬酸的产生，要预先加入黄血盐云除铁离子。
在酒精生产或酵母生产中若使用糖蜜，则需要预先进行稀释、酸化、灭菌、灯清和添加营养盐等处理。
因为糖蜜中干物质浓度很大，糖分高、产酸细菌多，灰分和胶体物质也很多，酵母无法生长。
