皮肤变态反应试验操规

A

BCD

报告

内容报告姓名及操作项目，语言流畅、态度认真、表情自然2210.50

仪表

举止仪表大方，举止端庄，步伐轻盈2210.50

服装

服饰服装鞋帽整洁，着装符合职业要求，发不过肩2210.50

1、核对医嘱卡及病人2210.50

2、评估：询问患者用药史，过敏史及家族过敏史，本人及

家属有无其他药物过敏史。如有青霉素过敏史者应停止该

项试验，有其他药物过敏史或变态反应疾病者应慎用(如曾

使用青霉素，停药24小时后再次使用或使用过程中改用不

同批号，需重做过敏试验）66320

1、病人了解过敏试验的目的、方法、注意事项、配合要点

药物作用及副作用2210.50

2、病人空腹时不宜进行皮试，口述：个别病人于空腹时注

射药物，会发生眩晕、恶心等反应，易与过敏反应相混淆2210.50

3、选择部位2210.50

环境评估环境：温湿度适宜、安静整洁、光线适中（口述）2210.50

护士修剪指甲（指甲已修剪）、洗手（七步洗手法）、戴口罩

（计时开始）2210.50

1、治疗车上层：治疗盘、1ml注射器、20毫升注射器、青

霉素160万单位、0.9%氯化钠(250ml塑料瓶)、手消毒液、

棉签、医嘱卡、输液单、75%酒精、弯盘、启瓶器2210.50

2、治疗车下层：锐器盒、医疗垃圾桶、生活垃圾桶、剪刀

、血管钳2210.50

3、抢救用物与用品：0.1%盐酸肾上腺素、急救车、氧气、

吸引器等。2210.50

1、核对医嘱33210

2、检查药物的质量、剂量、有效期及一次性材料，记录青

霉素批号2210.50

3、开启0.9 %氯化钠注射液、青霉素瓶盖1110.250

4、检查棉签，取4根棉签消毒瓶口2210.50

5、打开20毫升注射器，松动活塞，抽取0.9%氯化钠注射

液，排尽空气和多余液体，剩至8ml液体注入青霉素粉剂内

进行稀释，剂量要准确（每毫升含青霉素20万单位）轻轻

摇匀，将药液完全抽吸至注射器内，再次混匀后，排尽空

气，将药液注入青霉素瓶内66320

6、打开1毫升注射器，松动活塞，更换注射器针头，抽取

牛结核病提纯结核菌素变态反应试验

1. 原理 机体受到结核杆菌刺激时，导致T淋巴细胞转变为淋巴母细胞，并进而增殖分化为致敏淋巴细胞，使机体致敏；以后如再次接触结核菌时（结核菌素），致敏淋巴细胞即释放出各种淋巴因子，一方面使机体表现特异性的细胞免疫，而另一方面则发生迟发型变态反应，出现以单核细胞浸润，以及由于巨噬细胞释出溶酶体酶（水解酶）和淋巴细胞释出淋巴毒素所引起的组织环死为特征的病理现象。

皮内注射提纯结核菌素（PPD）于正常动物，不出现显著的局部炎症反应。相反，如果将其注入曾感染结核病而致敏的动物，便发生迟发型超敏感性应答，在几小时之内注射局部不出现肉眼的或组织学的变化，但以后血管扩张，通透性增加，因而出现红斑和水肿，肿胀硬固。组织检查，这种病变和典型的急性炎症反应不同的是，浸润细胞主要是单核细胞，即巨噬细胞和淋巴细胞，虽然反应初期也出现短暂的嗜中性白细胞的积聚。注射后24-72小时反应程度最强，以后逐渐消退。非常严重的反应，在注射局部可发生坏死。

2.器材与试剂 酒精棉、卡尺、1-2.5ml注射器、针头、牛型提纯结核菌素。

3.操作方法

3.1注射部位及术前处理：在颈侧中部上1/3处剪毛（或提前一天剃毛），三个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。如术部有变化时，应另选部位或在对侧进行。(图-1)

图片 1位置

3.2注射剂量：不论大小牛只，一律皮内注射1万国际单位。即将牛型提纯结核菌素稀释成每毫升含10万国际单位后，皮内注射0.1ml。如用2.5ml注射器，应再加等量注射用水皮内注射0.2ml。冻干菌素稀释后应当天用完。

3.3注射方法：先以75%酒精消毒术部，然后皮内注入定量的牛型提纯结核菌素，注射后局部应出现小泡，如注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。

3.4注射次数和观察反应：皮内注射后经72小时判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好记录。对疑似反应牛应即在另一侧以同一批菌素同一剂量进行第二回皮内注射，再经72小时后观察反应。如有可能，对阴性和疑似反应牛，于注射后96和120小时再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。

迟发型变态反应（DTH）检测：耳肿胀法

一、原理

二硝基氟苯（DNFB）是一种半抗原，将其稀释液涂抹腹壁皮肤后，与皮肤蛋白结合成完全抗原，由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4～7天后再将其涂抹于耳部，使局部产生迟发型变态反应。一般在抗原攻击后24～48h达高峰，故于此时测定其肿胀程度。

二、材料

DNFB、丙酮、麻油、硫化钡、打孔器。

三、实验步骤

1、试剂配制

DNFB溶液 DNFB溶液应新鲜配制，称取DNFB50mg，置清洁干燥小瓶中，将预先配好的5mL丙酮麻油溶液（丙酮：麻油=1：1），倒入小瓶，盖好瓶塞并用胶布密封。混匀后，用250μL注射器通过瓶盖取用。

2、致敏

每鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛，范围约3cm×3cm、用DNFB 溶液50μL均匀涂抹致敏。

3、DTH的产生与测定

5天后，用DNFB 溶液10μL 均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击。攻击后24h 颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳。用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。

四、数据处理与结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

左右耳重量之差表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于与对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。

五、注意事项

操作时应避免DNFB与皮肤接触。

什么是变应原检测？

江油市厚坝镇卫生院检验科 四川江油 621715

伴随着我国医学技术的不断提高，大部分的传统的疑难杂症都得到了有效解决，以往的不治之症也有新的攻破方向与治疗思路。但变态反应性疾病依旧是我国发病率极高的临床疾病，在皮肤科接诊当中，有相对一大部分的疾病都属于过敏性疾病的范畴，为此本文将对临床变应原检测的四种操作方法进行解释，并从临床检验方面说明什么是变应原检测。

1、什么变应原？

变应原又称为过敏原，凡是能够引起人体产生超敏反应的抗原类物质都可称为变应原。而超敏反应又称为变态反应，是一种有害的、异常的、病理性的免疫反应，目前我国的医学研究水平尚未达到能够对变应原的发生原因与表现进行分析的水平，医学领域对此说法各执一词，不同的医学分科都拥有不同的看法与观点。但按照变应原的病理机制进行分类划分的话，可以大致分为速发型、细胞毒型、免疫复合型、迟发型四种类型。按照抗原种类进行划分，变应原可大致分为两类。一种是完全抗原体，例如微生物、螨虫、寄生虫、植物花粉、变异种类动物血清等等。而另一种是半抗原体，例如医用药物或者一些化学制剂等等。除此之外，当自身成分发生变异时，也有可能引起超敏反应的产生。

关于变应原的划分种类各式各样，根据不同的划分标准所划分出来的变应原种类也是大相径庭。在医学临床研究当中，通过变应原检测可以明确过敏反应患者所过敏的主要物质，并及时将患者与该类物质进行隔离，有利于患者病情的恢复治疗。如果，不对患者进行变应原检测的话，当患者再次接触此类物质时，有很大的概率会引起过敏反应的复发，严重者甚至会加重患者病情，所以一旦当患者确诊为过敏反应，就应该及时就医，配合医院的变应原检测并接受治疗。

2、临床变应原检测的操作方法。

所谓的变应原检测，就是对能够引起患者超敏反应的抗原体进行检测，对患者的过敏物质进行明确。常用的变应原检测方法主要包括四种，分别是：斑贴试验、划破试验、皮内试验和变应原检测体外试验。