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多器官功能障碍大鼠胰腺腺泡细胞超微结构和功能的改变

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多器官功能障碍大鼠胰腺腺泡细胞超微结构和功能的改变 【摘要】 目的 探讨多器官功能障碍综合征(MODS)时胰腺腺泡细胞超微结构和功能的改变。方法 实验地点为福建省立医院动物房、福建省立医院心血管研究所重点实验室、福建省立医院病理科与福建医科大学电镜室。清洁级健康雄性SD大鼠20只,体重180～220 g,随机分成2组,即:MODS组和对照组,每组10只。MODS组大鼠腹腔内注射大肠杆菌菌液,同时钳断大鼠左下肢,造成感染复合创伤二次打击MODS大鼠模型。对照组给予等量生理盐水腹腔内注射。48 h后检测有两个以上器官或系统功能障碍即为MODS组造模成功。成功造模后,抽血测定其血清胰淀粉酶、脂肪酶,两组大鼠资料的比较用成组t检验。抽血后取标本电镜下观察两组大鼠胰腺腺泡细胞超微结构,免疫组化分析胰腺腺泡细胞Bax蛋白表达。结果 和对照组比较,MODS组大鼠胰淀粉酶、脂肪酶及Bax蛋白表达明显高于正常对照组(P＜0.01)。胰腺腺泡细胞出现空泡变性,少数细胞坏死,及出现线粒体肿胀,粗面内质网扩张等一系列超微结构病理改变。结论 MODS大鼠可出现胰腺损害。

【Abstract】 Objective To explore the effect of multiple organ dysfunction syndrome (MODS) on the ultrastructure and function of pancreatic acinar cells.Methods This study was performed in the Animal Department of Fujian Provincial Hospital,the Key Laboratory of Fujian Provincial Cardiovascular Institute,the Pathology Department of Fujian Provincial Hospital and in the Electron Microscopic Department of Fujian

Medical University.Twenty pathogen free male Sprague Dawley rats weighing 180~220 g,were selected and randomly divided into an MODS group and a control group (10 rats per group).MODS was induced by intraperitoneal injection with bacterium coli and cutting the left legs in two stages,while the control group received an intraperitoneal injection of an equivalent volume of sodium chloride.The MODS model was considered successful when two or more organs showed dysfunction 48 h after the injection.And than the serum amylase and the serum lipase were measured.All data were analyzed using t tests.The ultrastructure of the pancreatic acinar cells was observed under an electron microscope.The expression of Bax was determined immunohistochemically.Results The serum amylase,the serum lipase and the expression of Bax were increased significantly in the MODS group compared with the control group (P＜0.01).Pathological ultrastructural changes were found,as follows:most pancreatic acinar cells in the MODS group exhibited vacuole degeneration,some were necrotized,the mitochondria had swollen and the rough endoplasmic reticulum had expanded.Conclusion It may cause damage to the pancreatic acinar cells in rats with MODS.

【Key words】 MODS; Pancreatic acinar cells;Ultrastructure;Pathologic changes; Rat 多器官功能障碍综合征(MODS)是危重病患者死亡的主要原因之一,国内、外已有很多学者研究表明,MODS时体内重要脏器,如:肝、肺、肾、胃肠道等均可出现损害[1],但胰腺的损害却很少见到报道。而近年来,我们在临床工作中时常发现,各种原因导致MODS的危重患者常常出现血清胰淀粉酶升高,少数患者血清胰淀粉酶升高可达正常值的10余倍,并有腹胀、上腹不适等临床症状,提示出现了胰腺损害。为了明确MODS时胰腺的改变情况,设计了本实验,旨在探讨MODS时胰腺腺泡细胞结构和功能的改变,为临床治疗提供依据。

1 材料与方法 1.1 试验材料 大肠杆菌血清型0127:H6由福建医科大学提供;胰淀粉酶诊断试剂盒由上海卓康生物科技有限公司提供;脂肪酶测试盒由南京建成生物工程研究所提供;Bax多克隆抗体免疫组化试剂盒,由美国Santa Cruz公司提供;细胞超微结构观察采用日立Hu 12A型(飞利浦208型)透射电镜。

1.2 动物分组及模型制备 清洁级健康雄性SD大鼠20只(上海斯来克实验动物有限责任公司提供),体重180～220 g,随机分成2组,每组10只,即:MODS组和正常对照组。无菌条件下给MODS组大鼠腹腔内注射大肠杆菌菌液,大肠杆菌血清型0127:H6,4℃增菌后制成8×1011 cfu/L混悬液,每只1 ml,同时钳断大鼠左下肢,造成感染复合创伤二次打击MODS大鼠模型。模型的制备参照有关文献[2,3],检测有两个以上器官或系统功能障碍即为造模成功。对照组以等量生理盐水腹腔内注射。造模后48 h,两组大鼠腹腔注射10%水合氯醛3 ml/kg进行麻醉,心脏穿刺取血,测其血清胰淀粉酶,脂肪酶,抽血后打开腹腔,取其胰腺,送电镜、免疫组化、病理检查。

1.3 观察指标的检测方法 1.3.1 胰腺组织电镜标本制备与观察 在动物开腹后,未停止心跳前,切取靠近胰尾的胰腺组织,大小约1 mm3,在1 min内浸泡于3%戊二醛预固定,避免胰酶破坏胰腺组织结构。再予以1.5%多聚甲醛前固定,1%锇酸 1.5%亚铁氰化钾后固定,酒精 丙酮脱水,环氧树脂618包埋剂包埋;超薄切片,醋酸铀、柠檬酸铅染色,透射电镜观察、摄影。

1.3.2 免疫组化法检测胰岛Bax蛋白的表达,操作严格按照说明书进行,在我院病理科主任指导下观察胰岛细胞Bax蛋白的表达,结果采用计算机彩色图像分析仪对棕褐色阳性物质进行定量分析。

1.3.3 胰腺组织病理学标本制备与观察 开腹取标本后,经HE染色,在我院病理科主任指导下观察胰腺组织病理改变。

1.3.4 血清胰淀粉酶、脂肪酶的测定 胰腺淀粉酶采用酶联免疫吸附测试,血清脂肪酶采用分光光度计比色测试,操作严格按照试剂说明书进行。 1.4 统计学分析 资料以均数±标准差(x±s)表示,两组大鼠血清胰淀粉酶、脂肪酶、Bax蛋白定量的比较用成组t检验,统计学处理采用SPSS 16.0for Windows统计软件包完成,P＜0.05为差异有统计学意义,P＜0.01为差异有显著统计学意义。

2 结果 2.1 MODS组大鼠血清胰淀粉酶、脂肪酶明显升高,其中血清胰淀粉酶平均升高近2倍,脂肪酶升高达3倍余,和正常对照组比较有显著统计学意义(P＜0.01)(见表1)。

2.2 Bax蛋白在胰腺腺泡细胞胞浆中表达,呈棕褐色。在MODS组可见Bax蛋白出现高表达,其灰度值和正常对照组比较,有显著统计学意义(P＜0.01)(见图1)。

2.3 光镜下,正常对照组大鼠胰腺细胞结构完整、清楚,间质无炎性细胞浸润。MODS组大鼠胰腺腺泡细胞呈空泡变性,胰腺被膜下充血、水肿、增厚,见急慢性炎症细胞浸润,小叶间间隔扩张,部分腺泡间隔扩张,间质血管充血,导管周围有炎症细胞浸润(见图2)。

2.3 透射电镜下胰腺组织超微结构的变化 正常组大鼠胰腺腺泡细胞核仁正常,腺泡细胞胞质内可见线粒体、粗面内质网、高尔基体,分泌颗粒多而大,腺泡腔见微绒毛正常(见图3)。

MODS组大鼠胰腺腺泡细胞灶性脱落,部分腺泡细胞坏死,仅存细胞碎片,部分腺泡细胞呈不规则形,核呈不同程度的固缩状,核内染色质凝聚边集,核膜皱析,胞质基质线粒体肿胀,线粒体嵴模糊,嵴肿胀破坏甚至消失,粗面内质网弥漫扩张,囊泡化,脱颗粒,高尔基复合体肿胀,胞质内可见较多大小不等的溶酶体、次级溶酶体出现,其内可见变性酶原颗粒和其他细胞残余结构;胞浆内有大小不等的空泡,胞浆空泡化,分泌颗粒减少。胰腺组织见少量中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润,部分毛细血管管腔不规则,内皮细胞肿胀(见图3、图4)。

表1 两组大鼠血清胰淀粉酶、脂肪酶、腺泡细胞Bax蛋白表达灰度值的比较(x±s) 胰淀粉酶(U/L)脂肪酶(U/L)Bax蛋白表达 MODS组17.36±2.76577.80±126.531737±98 对照组9.73±1.09162.16±11.27576±71

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重症急性胰腺炎相关的PPT课件课件

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持饮食均衡。
避免过度劳累
合理安排作息时间，避 免过度劳累和精神紧张
。
护理要点
监测病情
01
密切观察患者的生命体征、腹部症状及体征， 及时发现并处理病情变化。
疼痛护理
02
评估患者的疼痛程度，遵医嘱给予适当的止痛 药或镇痛治疗。
饮食护理
03
根据病情调整饮食，逐步恢复至正常饮食。
心理护理
04
关注患者的心理状态，给予必要的心理支持和 疏导。
。
心血管功能衰竭
重症急性胰腺炎时，由于大量失 液、感染等因素可能导致心血管
功能衰竭。
其他器官功能衰竭
如肝功能衰竭、凝血功能紊乱等 也可能在重症急性胰腺炎患者中
发生。
05
重症急性胰腺炎的预防与护 理
预防措施
控制胆道疾病
积极治疗胆结石、胆囊 炎等胆道疾病，避免诱
发急性胰腺炎。
调整饮食
避免高脂、高糖、高蛋 白饮食，控制饮酒，保
胆道引流术
对于肠道并发症，如肠梗阻、肠穿孔 等，可能需要切除病变肠道或进行肠 道吻合术。
引流术
放置引流管，引流出坏死组织和渗出 液，减轻腹腔内压力。
肠切除或吻合术
对于胆源性胰腺炎，手术解除胆道梗 阻，引流胆汁。
04
重症急性胰腺炎的并发症
感染
胰腺坏死继发感染
重症急性胰腺炎时，胰腺组织坏死继 发感染，可引起腹腔内感染、败血症 等严重后果。
特点
起病急、病情重、进展迅速，死 亡率较高，需要及时诊断和治疗 。
病因与发病机制
病因
酗酒、胆结石、胆道感染、高脂血症 、外伤等是重症急性胰腺炎的常见病 因。
发病机制
多种因素导致胰酶激活，引起胰腺组 织自身消化，进而引发炎症反应、组 织坏死和器官功能衰竭。
NLRP3炎症小体介导细胞焦亡在急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

NLRP3炎症小体介导细胞焦亡在急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

·论著·NLRP3炎症小体介导细胞焦亡在急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究*冯颖1#陈醒2郭美霞1徐浩宇1孙博1周俊明1李敏利1&东部战区总医院干部消化内科1（210002）无锡联勤保障中心药品仪器监督检验站2背景：细胞焦亡参与了急性胰腺炎的发生，但其在远隔器官损伤中的作用尚未明确。

目的：探讨NLRP3炎症小体依赖性细胞焦亡在急性胰腺炎相关肺损伤中的作用和机制。

方法：32只雄性Sprague⁃Dawley大鼠随机分为4组：对照组、重症急性胰腺炎（SAP）组、Z⁃WEHD⁃FMK（caspase⁃1抑制剂）组和双硫仑（GSDMD抑制剂）组，后3组以5%牛磺胆酸钠构建SAP模型。

检测血清淀粉酶、脂肪酶、降钙素原水平和髓过氧化物酶（MPO）活性；通过组织病理学检查和肺湿/干重比评估胰腺和肺损伤程度；分别以ELISA法和免疫组化染色、蛋白质印迹法检测血清细胞焦亡相关炎症因子水平和肺组织细胞焦亡通路相关蛋白表达。

结果：与对照组相比，SAP组血清生化指标、MPO活性、白细胞介素（IL）⁃1β、IL⁃18水平显著升高，胰腺和肺组织损伤明显，肺组织NLRP3、caspase⁃1、GSDMD表达显著上调（P均<0.05）；与SAP组比较，caspase⁃1抑制剂和GSDMD抑制剂预处理组胰腺和肺损伤程度减轻，血清生化指标、MPO活性降低，细胞焦亡相关炎症因子水平和焦亡通路相关蛋白表达下凋（P均<0.05）。

结论：NLRP3/caspase⁃1/ GSDMD通路介导的细胞焦亡在急性胰腺炎相关肺损伤中发挥重要作用，抑制相关通路可能为其治疗提供新的方向。

关键词急性胰腺炎；急性肺损伤；细胞焦亡；NLRP3炎症小体Mechanism of NLRP3Inflammasome Mediated Pyroptosis in Acute Pancreatitis⁃related Lung Injury FENG Ying1,CHEN Xing2,GUO Meixia1,XU Haoyu1,SUN Bo1,ZHOU Junming1,LI Minli1.1Department of Gastroenterology, Eastern Theater Command General Hospital,Nanjing(210002);2Drug Instrument Supervision and Inspection Station,Wuxi Joint Logistics Support Center,Wuxi,Jiangsu ProvinceCorrespondence to:LI Minli,Email:******************Background:Pyroptosis is involved in the occurrence of acute pancreatitis,but its role in remote organ injury remains unclear.Aims:To investigate the role and mechanism of NLRP3inflammasome⁃dependent pyroptosis in acute pancreatitis⁃related lung injury.Methods:Thirty⁃two male Sprague⁃Dawley rats were randomly divided into four groups:control group, severe acute pancreatitis(SAP)group,Z⁃WEHD⁃FMK(caspase⁃1inhibitor)group and disulfiram(GSDMD inhibitor)group.Experimental SAP was constructed by using5%sodium taurocholate in the latter3groups.Serum levels of amylase,lipase, procalcitonin,and the myeloperoxidase(MPO)activity were determined;the severity of pancreatic and lung injuries was assessed by histopathology and lung wet/dry weight ratio;serum levels of pyroptosis⁃related inflammatory cytokines and the expressions of proteins involved in pyroptosis pathway in lung tissue were measured by ELISA method and immunohisto⁃chemistry and Western blotting,respectively.Results:Compared with the control group,the serum biochemical indices, MPO activity,and interleukin(IL)⁃1β,IL⁃18levels in SAP group were significantly increased with aggravated pancreatic and lung tissue injuries;meanwhile,the expressions of NLRP3,caspase⁃1and GSDMD in lung tissue were significantly up⁃regulated(all P<0.05).Pretreatment with caspase⁃1or GSDMD inhibitors reduced the severity of pancreatic and lung tissue injuries,improved the serum biochemical indices and MPO activity,and ameliorated the increased pyroptosis⁃related inflammatory cytokines and pyroptosis pathway⁃related proteins(all P<0.05).Conclusions:NLRP3/caspase⁃1/GSDMD pathway mediated pyroptosis plays an important role in acute pancreatitis⁃related lung injury,and inhibition of pyroptosis pathways might be a new direction for its treatment.Key words Acute Pancreatitis;Acute Lung Injury;Pyroptosis;NLRP3InflammasomeDOI：10.3969/j.issn.1008⁃7125.2023.05.001*基金项目：东部战区总医院基础研究计划重点项目（22JCYYZD6）#Email:****************.cn&本文通信作者，Email:******************急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是消化系统疾病中最常见的住院原因之一，具有较高的发病率和死亡率，合并器官功能障碍的重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）死亡率高达20%~40%[1]。

内科学--急性胰腺炎

内科学--急性胰腺炎


病理改变
1、急性水肿型 胰腺肿大，间质充血、水肿、炎性细胞浸润，胰 腺周围有少量脂肪组织坏死。
2、急性出血坏死型 胰腺肿大变硬，组织坏死及血管破裂出血。分叶 结构消失，有较大范围的脂肪坏死灶，散落在胰 腺及胰腺周围组织如大网膜，称为灶钙斑。
临床表现
一、症状： 1、腹痛：中上腹
钝痛、刀割样痛、钻顶样疼痛或绞痛； 呈持续性，伴阵发性加剧，可向腰背部 呈带状放射； 一般解痉止痛药无效。
鉴别诊断
1、消化性溃疡急性穿孔 2、胆石症和急性胆囊炎 3、急性肠梗阻 4、心肌梗死、心肌炎
治疗
治疗的两大任务： 1、寻找并去除病因； 2、控制炎症。
一、监护：T、P、R、BP、尿量、腹部体征、
血尿淀粉酶、电解质及血气分析
二、器官支持
1、液体复苏，48h有效的液体复苏能显著降低 SIRS、MODS的发生率。
二、血、尿淀粉酶增高
血清淀粉酶：612h ，48h，持续35 d ， 血清淀粉酶超过正常值的3倍可确诊，注意除 外其他急腹症。 尿淀粉酶：1214h ，持续12w
注意：
1、 Amy高低不一定反应病情轻重。 2、急腹症：消化性溃疡穿孔、胆石症、 胆囊炎、肠梗阻等可有血清Amy ，不 ﹥正常值2倍。 3、Amy同工酶检测，胰型Amy 。
3、肠功能维护
胃肠减压：减轻腹胀，减少胃液对胰液分泌的刺激 早期营养支持：有利于肠粘膜屏障功能的恢复。
4、连续血液净化
CRRT可阻止SAP的MODS。 应用指征：①急性肾功能衰竭；②2个或2个以上器 官功能障碍；③SIRS；④严重水电解质紊乱；⑤胰 性脑病。 可以清除体内有害的代谢产物和炎性介质，利于器 官功能恢复。
2、腹膜炎症体征突出、与消化性溃疡穿孔鉴 别困难
胰腺老化与消化不良

胰腺老化与消化不良

胰腺老化与消化不良江华;耿莎莎【摘要】Objective Pancreas is the important gland with both endocrine and exocrine function, which plays a very important role in digestion, absorption and substance metabolism. The morphologic and functional changes of the aged pancreas appear to be concomitant decrease in functional capacity. In elderly population, dyspepsia is common with many reasons. This article describes the performance and functional changes in aging pancreas, explore the effects of pancreatic exocrine function on dyspepsia after pancreatic aging, and give a brief review about the relationship between pancreatic aging and dyspepsia.%胰腺是人体兼有内分泌功能与外分泌功能的重要腺体,在消化吸收和物质代谢中起着非常重要的作用.随着年龄的增长,胰腺逐年老化,大体形态,组织结构均发生改变,同时胰腺功能也有所下降.在老年患者中,消化不良是常见症状,其原因颇多,本文首先讲述胰腺老化的表现及功能变化,再探讨胰腺老化后胰腺外分泌功能变化对消化不良的影响,对胰腺老化与消化不良的相互关系做一简要综述.【期刊名称】《中华老年多器官疾病杂志》【年(卷),期】2012(011)005【总页数】4页(P347-350)【关键词】胰腺;衰老;消化不良【作者】江华;耿莎莎【作者单位】同济大学附属东方医院老年医学科,上海200120;同济大学附属东方医院老年医学科,上海200120【正文语种】中文【中图分类】R576中国 1999年就已经进入老龄化社会，2010年我国第六次人口普查，60岁以上人口已经达到总人口的13.26%，65岁以上人口达8.87%，比2000年第五次人口普查分别增长2.93%、1.91%。