-化学发光分析法

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析篇一：化学发光免疫分析方法

化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物

质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激

发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。

化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不

同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避

免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学

发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结

束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧

化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。

待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。

一、化学发光免疫分析方法的类别

化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3 大类， 即化

学发光免疫分析、 化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。

（一）化学发光免疫分析 化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要

为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。

1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析 。 鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中，鲁米诺

可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化

物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、 Cu2+、 Co2+和它

们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基

态时发出光子。鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。

化学发光法和比色法 理论说明以及概述

1. 引言

1.1 概述

本文旨在对化学发光法和比色法进行理论说明和综述。化学发光法是一种利用化学反应产生的发光现象进行分析的方法，而比色法则是通过测量溶液或物质吸收或散射光的能力来定量分析与检测。两种方法在科学研究、医药领域以及环境监测中都有广泛应用。本文将深入介绍这两种方法的原理、应用领域以及实验操作步骤，并对它们进行对比分析与讨论，最后提出结论并展望未来的发展方向。

1.2 文章结构

文章主要分为五个部分，即引言、化学发光法、比色法、对比分析与讨论以及结论与展望。

在“引言”部分中，我们将首先概述整篇文章，包括介绍化学发光法和比色法，并给出本文的目标和意义。

“化学发光法”部分将详细介绍该方法的原理、应用领域以及实验操作步骤。我们将重点解释化学反应如何产生发光，并探讨其在生物医药研究、环境监测等领域的重要性。

“比色法”部分将类似地介绍该方法的原理、应用领域以及实验操作步骤。我们将讨论溶液或物质对光的吸收或散射能力如何进行定量分析和检测，并探究其在化工、生命科学以及食品行业中的应用案例。

“对比分析与讨论”部分将从优缺点对比、理论差异和实际应用案例研究三个方面进行详细分析和讨论。我们将评估化学发光法和比色法之间的优劣以及各自适用的条件，并通过实际案例研究来说明它们在不同领域的具体应用情况。

最后，“结论与展望”部分将总结整篇文章所述，提出结论并展望这两种方法未来的发展方向。我们将强调它们在科学研究、医药领域以及环境监测中的重要性，并指出可能的改进和扩大应用范围。

1.3 目的

本文旨在全面阐述化学发光法和比色法这两种常见的化学分析方法。通过深入理解它们的原理、应用领域和实验操作，我们希望有助于读者更好地理解并运用这两种方法进行科学研究、分析和检测工作。同时，通过对比分析与讨论，我们将评估它们的优劣，并展望它们在未来的发展方向。

2. 化学发光法

2.1 原理介绍 化学发光法是一种利用化学反应产生的发光现象来进行分析检测的方法。它基于物质在激发态下产生的光子自发辐射的原理。当物质受到能量激发后，电子处于激发态，随后通过跃迁回到基态时会放出能量，并以光子的形式辐射出来。

第5章 分子发光—荧光、磷光和化学发光法

(Molecular Emisssion and Luminescence)（3学时）

教学目的和要求：

1. 学会分子发光——荧光、磷光和化学发光原理。

2. 了解分子发光——荧光、磷光和化学发光法的特点和应用。

教学要点和所涵盖的知识点：

荧光、磷光和化学发光原理、仪器、分析方法及应用

重点和难点：

荧光的原理、仪器、分析方法及应用。

分子发光：处于基态的分子吸收能量(电、热、化学和光能等)被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析 包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。

第一节 荧光分析法

一、概述

分子荧光分析法是根据物质的分子荧光光谱进行定性，以荧光强度进行定量的一种分析方法。

荧光分析的特点：

灵敏度高：视不同物质，检测下限在0.10.001g/mL之间。可见比UV-Vis的灵敏度高得多。

选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。

结构信息量多：包括物质激发光谱、发射光谱、光强、荧光量子效率、荧光寿命等。

应用不广泛：主要是因为能发荧光的物质不具普遍性、增强荧光的方法有限、外界环境对荧光量子效率影响大、干扰测量的因素较多。

二、基本原理

1、分子荧光的产生

处于分子基态单重态中的电子对，其自旋方向相反，当其中一个电子被激发时，通常跃迁至第一激发态单重态轨道上，也可能跃迁至能级更高的单重态上。这种跃迁是符合光谱选律的，如果跃迁至第一激发三重态轨道上，则属于禁阻跃迁。单重态与三重态的区别在于电子自旋方向不同，激发三重态具有较低能级。在单重激发态中，两个电子平行自旋，单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s;而三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-41s以上(通常用S和T分别表示单重态和三重态)。

分子印迹－化学发光法测定甲基对硫磷

刘婷婷;刘佳莉;蔡腊梅;曾刘艺;胡桂林;张罗一览;向辉;郑红

【摘 要】Molecularly imprinted monolithic column was prepared using

methyl parathion as the tem‐plate molecule by in situ step‐addition

polymerization. A new chemiluminescence method for the determi‐nation

of methyl parathion was proposed by the combination of methyl

parathion‐imprinted polymer and KMnO4‐methyl parathion‐formaldehyde‐CL system. The linear range was 2.0 × 10-6‐5.0 × 10-5

mol/L , the detection limit was 2.0 × 10-7 mol/L ,the relative standard

deviation was 3.3% (n=11). This method has been successfully applied to

the determination of trace residue of parathion in vegetable and grain

sam‐ples.%以甲基对硫磷为模板分子，采用原位逐步聚合法制备了甲基对硫磷分子印迹聚合物，利用高锰酸钾－甲醛－甲基对硫磷化学发光体系，建立了测定甲基对硫磷高选择性的分子印迹－化学发光分析方法。方法的线性范围为2.0×10－6～5.0×10－5 mol／L ，检出限为2×10－7 mol／L ，对1.0×10－6 mol／L甲基对硫磷溶液进行11次平行测定，相对标准偏差为3.3％。此法已用于谷物中甲基对硫磷的测定，结果满意。