液质酶解所需缓冲液的配制

实验室常用缓冲液配置方法

1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：1 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值 浓HCl

7.4 约70ml

7.6 约60ml

8.0 约42ml

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。 1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） 100ml

500mM EDTA(PH8.0) 20ml

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

组份浓度：1.5 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4)3 M 醋酸钠(pH5.2)

组份浓度：3M 醋酸钠

配制量：100ml

缓冲液流动相可以根据下面的操作步骤配制：

1 将缓冲液药品溶解在水中制成缓冲液（溶液A）。

2 用pH计确定或调节溶液A的pH。

3 将一定体积（如200ml）的有机溶剂B与由步骤2配制的溶液A（如800ml）混合，制成最终流动相（此处的有机相为20%）。

4 检查最终流动相的pH（此处为选项）。

由于测定含有有机调节剂的流动相pH计发生漂移，使其测定pH不很可靠，所以上面的步骤4一般只有在考察误差的主要来源时采用，大多数实验室皆略去此步骤。

步骤1一般是将配制缓冲液所用的两种试剂（A1和A2）分别按计算量先溶解在水中制成水溶液，然后再将这两种溶液按一定的比例混合得到预期pH的溶液A。若在此步骤2中调节pH，则可以采用溶剂A滴定溶剂B，也可反过来滴定，并通过pH计测量得到所需pH的最终缓冲溶液。在大多数实验室中，pH的测量精度通常不会达到±0.05—0.1个pH单位，这会显著影响一些样品的分离。当HPLC方法对pH非常敏感时，步骤2只能大致确定pH值。

将准确称重的缓冲液配制试剂与精确体积的脱气蒸馏水混合，使其成为均一的溶液（不进一步调整pH），如此配得缓冲溶液的pH可以控制在非常窄得范围内（±0.02单位），已知准确pH值的缓冲液浓溶液已有市售。

为了改善峰形或塔板数，有时在流动相中加入酸或碱（如三乙胺、乙酸等），如果这些添加剂并非为配制缓冲溶液时所采用得试剂，那么将这些试剂加入到流动相中后，还需重新滴加酸或碱，使流动相达到所需的pH值。

常用缓冲液的配制

当缓冲液被稀释或浓缩时，pH也应不变。其pH值应近似恒定不变，或当其中的离解的阳离子（K+、Na+）或阴离子（Cl-、Br-）被其它种类的离子替换时。

表1—4中给出了响应的配制方法，平衡阳离子为Na+，缓冲液的最终浓度为0.1mol/l，对于其它浓度的缓冲溶液或阳离子种类（通常K+）更好，表中的数据也可供参考。较稀的或较浓的缓冲溶液，及包含有不同阳离子的溶液，其pH值会与表中的数据稍有出入。在方法建立过程中，精确的流动相pH值往往并不重要，重要的是每次新配制的流动相的pH值与第一次基本相同（最好控制在±0.02范围内）。注意，只有当缓冲溶液的pH在缓冲试剂解离常数pKIa±1范围内时，缓冲溶液才具有有效的缓冲容量（如乙酸盐的pKa=4.6，其适宜的pH范围为3.6—5.6）。

实验室常见缓冲液的配比方法

以下是 6 条关于实验室常见缓冲液的配比方法：

1. 磷酸盐缓冲液，这可是很常用的哦！就像做菜时盐放多少能让菜更美味一样，磷酸盐缓冲液的配比得恰到好处。比如你要配来做细胞培养实验，那磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的比例可得好好把握呀！试试看，你会发现它超有用。

2. Tris-HCl 缓冲液，哎呀呀，它就像是实验中的好伙伴！想象一下，要是它配比不对，那实验可能就没法顺利进行啦。在配的时候，一定要认真仔细哦，就像对待一件珍贵的宝贝。例如在蛋白实验中，用对了它就能让结果更靠谱呢，是不是很厉害？

3. 柠檬酸缓冲液，嘿，这可是个特别的存在！它就如同调制一杯独特的饮料，比例稍有不同味道就完全不一样。当你在进行酶学实验时，弄好它的配比，就仿佛给实验注入了魔力。你不想亲自尝试一下这种神奇吗？

4. 醋酸盐缓冲液，哇哦，不能小瞧它呀！它就好比是搭积木时关键的那块积木，没有它可不行。配它的时候要格外留意哦，像做酸碱滴定实验，用上合适比例的醋酸盐缓冲液，那感觉，爽呆了！

5. 硼酸缓冲液，哈哈，也是很重要的呢！可以把它想象成一条通往成功的路，配比正确就是走在平坦大道上。比如在一些化学分析实验中，它能发挥大作用呢，还等什么，赶紧去调配它吧！ 6. 碳酸盐缓冲液，哇，这可是个厉害的角色哟！就跟精心挑选拼图碎片一样，要精准地配好它。你知道吗，在一些免疫实验中，它能让结果截然不同呢。还不赶快行动起来，体验一下调配它的乐趣！

总之，这些缓冲液就像一个个小魔法，只要你用心去调配它们，就能在实验中创造出意想不到的奇迹！

- 1 - 酶洗液的配制比例

酶洗液是一种常用的生物学试剂，能够帮助溶解、清洗和去除某些特定的蛋白质。酶洗液的配制比例是非常重要的，不同种类的酶需要不同的浓度来发挥最佳的效果。以下是一些常见的酶洗液配制比例：

1. 蛋白酶K洗液：将蛋白酶K溶解在磷酸缓冲液中，最终浓度为0.1mg/mL至1mg/mL。

2. RNase A洗液：将RNase A溶解在2M NaCl和10mM Tris-HCl (pH7.5)的缓冲液中，最终浓度为0.1mg/mL至1mg/mL。

3. DNase洗液：将DNase溶解在10mM Tris-HCl (pH7.5)的缓冲液中，最终浓度为0.1mg/mL至1mg/mL。

4. 脂肪酶洗液：将脂肪酶溶解在10mM Tris-HCl (pH8.0)和0.1% Triton X-100的缓冲液中，最终浓度为1mg/mL至10mg/mL。

5. 细胞酶洗液：将细胞酶溶解在10mM Tris-HCl (pH7.5)和150mM NaCl的缓冲液中，最终浓度为0.1mg/mL至1mg/mL。

以上是一些常见酶洗液的配制比例，使用时应根据实验需要选择最适合的配方。同时，注意要按照正确的步骤进行配制，保证酶洗液的质量和效果。