舌鳞癌动物模型的建立及研究进展

人源化SCID-beige鼠模型的建立及口腔鳞癌荷瘤模型建立任仪鹏;张蕾;史悦怡;步荣发【摘要】Objective:To establish humanized SCID-beige mouse model and apply it to the establishment of oral squamous cell carcinomamodel.Methods:A humanized SCID-beige mouse model was established by intraperitoneal injection of human peripheral blood lymphocytes.The level of humanized immunoglobulins was evaluated and the tumor bearing model was established by using the commonly used human tongue cancer cell line.Results:1、Humanized SCID-beige mouse model had a high level of human IgG;2、The common used human tongue cancer cell lineTCA8113、SCC9 and SCC25 could be transplanted in the humanized SCID-beige mouse model successfully.Conclusion:SCID-beige mice could be used in the establishment of humanized mouse model,which could be used for the immune related research of oral squamous cell carcinoma.%目的:建立人源化SCID-beige小鼠模型,并将其应用于口腔鳞癌移植瘤模型的建立.方法:采用人外周血淋巴细胞腹腔注射的方法建立人源化SCID-beige鼠模型,评估其体内人源化免疫球蛋白水平,并采用常用的人舌癌细胞系建立荷瘤模型.结果:1、人源化SCID-beige鼠模型具有高水平的人源IgG;2、常用的人舌癌细胞系TCA8113、SCC9及SCC25均可成功建立荷瘤模型.结论:SCID-beige鼠可以用于人源化小鼠模型的建立,可以用于口腔鳞癌的相关免疫研究.【期刊名称】《中华老年口腔医学杂志》【年(卷),期】2017(015)006【总页数】4页(P349-352)【关键词】人源化鼠模型;scid-beige鼠;外周血淋巴细胞;TCA8113;SCC9;SCC25【作者】任仪鹏;张蕾;史悦怡;步荣发【作者单位】解放军总医院口腔颌面外科北京100853;解放军总医院口腔颌面外科北京100853;解放军总医院口腔颌面外科北京100853;解放军总医院口腔颌面外科北京100853【正文语种】中文【中图分类】R782人源化小鼠模型(Humanized Mouse Model)是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型。

２０１８年９月第２８卷㊀第９期中国比较医学杂志ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥＳｅｐｔｅｍｂｅｒ，２０１８Ｖｏｌ．２８㊀Ｎｏ．９［基金项目］国家自然科学基金（编号：３１７７２５５１）；山西省自然科学基金（编号：２０１７０１Ｄ１２１０８７）；山西省研究生教育创新项目（编号：２０１７ＳＹ０３７）㊂［作者简介］卫佳宁（１９９４ ㊀），女，硕士研究生，研究方向：人类疾病动物模型㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：８２３９５２９５７＠ｑｑ．ｃｏｍ［通信作者］宋国华（１９７３ ㊀），女，教授，研究方向：人类疾病动物模型㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｇｈｓｏｎｇｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ研究进展环状非编码ＲＮＡ在口腔鳞癌中的研究进展卫佳宁，续国强，高继萍，宋国华∗（山西医科大学实验动物中心，实验动物与人类疾病动物模型山西省重点实验室，太原㊀０３０００１）㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀环状ＲＮＡ是一类新发现的不同于ｍｉＲＮＡ和ｌｎｃＲＮＡ的共价闭合环状内源性非编码ＲＮＡ㊂目前，已有许多报道关于ｃｉｒｃＲＮＡ在疾病发生发展机制的研究，为肿瘤的预防㊁诊断和精准治疗提供一种全新的理论依据㊂本文主要对ｃｉｒｃＲＮＡ的生物学特征和作用机制及其在口腔鳞癌中发生发展的作用进行综述㊂ʌ关键词ɔ㊀ｃｉｒｃＲＮＡ；口腔鳞状细胞癌；ｍｉＲＮＡ海绵作用；生物标志物ʌ中图分类号ɔＲ⁃３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１６７１⁃７８５６（２０１８）０９⁃００９６⁃０４ｄｏｉ：１０ ３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－７８５６ ２０１８ ０９ ０１７ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｃｙｃｌｉｃｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｉｎｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａＷＥＩＪｉａｎｉｎｇ，ＸＵＧｕｏｑｉａｎｇ，ＧＡＯＪｉｐｉｎｇ，ＳＯＮＧＧｕｏｈｕａ∗（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣｅｎｔｅｒ，ＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＳｈａｎｘｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＨｕｍａｎＤｉｓｅａｓｅＡｎｉｍａｌＭｏｄｅｌ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１，Ｃｈｉｎａ）㊀㊀ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ（ｃｉｒｃＲＮＡｓ）ａｒｅａｎｅｗｌｙｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｃｌａｓｓｏｆｃｏｖａｌｅｎｔｌｙｃｌｏｓｅｄｃｉｒｃｕｌａｒｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｓｔｈａｔｄｉｆｆｅｒｆｒｏｍｍｉＲＮＡｓａｎｄｌｎｃＲＮＡｓ．ＭａｎｙｒｅｐｏｒｔｓｈａｖｅｒｅｃｅｎｔｌｙｂｅｅｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄｏｎｔｈｅｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｃｉｒｃＲＮＡｓｉｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｄｉｓｅａｓｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇａｎｅｗｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｕｍｏｒｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄｐｒｅｃｉｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃｉｒｃＲＮＡｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｓｅｖｅｒａｌｃｏｍｍｏｎｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ｃｉｒｃＲＮＡ；ｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｍｉＲＮＡｓｐｏｎｇｙ；ｂｉｏｍａｒｋｅｒ㊀㊀口腔癌是世界上最常见的第十一种恶性肿瘤，尤其是在发展中国家，在发病总数中排名第九［１］㊂虽然随着医学技术的发展，口腔鳞状细胞癌（ｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＯＳＣＣ）的死亡率保持相对不变㊂但统计发现口腔癌患者趋于年轻化，该癌症的总体预后较差，生存率约５５％ ６５％［２］㊂这可能是由于延迟诊断，早期诊断是降低口腔癌死亡率的关键，目前寻找一种新的生物标志物和治疗目标是至关重要的㊂环状ＲＮＡ（ｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡ，ｃｉｒｃＲＮＡ）在哺乳动物中广泛存在［３］，通过共价键连接３ 和５末端形成闭合环状结构的内源性非编码ＲＮＡ［４］，因其闭环结构能够抗核糖核酸酶的降解，在细胞和组织的发育阶段能够稳定的表达［５］㊂一些研究发现，ｃｉｒｃＲＮＡ可参与ＲＮＡ蛋白复合物的形成和ＲＮＡ⁃ＲＮＡ调控网络［６］，可作为一个病毒或病毒复制的模板，在ＲＮＡ加工反应中作为顺式作用元件起作用，如ｓｎｏＲＮＡ基因和ｍｉＲＮＡ海绵［７］㊂研究表明，ｃｉｒｃＲＮＡ参与一些疾病的发生发展［８］，尤其在肿瘤方面㊂因此，从ｃｉｒｃＲＮＡ角度研究口腔鳞癌致病机理及治疗方案具有重要意义㊂１㊀ＣｉｒｃＲＮＡ的生物合成、分类及作用机制１ １㊀ＣｉｒｃＲＮＡ的生物合成ＣｉｒｃＲＮＡ是前体ｍＲＮＡ（ｐｒｅ⁃ｍＲＮＡ）通过可变剪切加工产生，广泛且稳定地存在于所有的真核生物中的一类非编码ＲＮＡ［９－１０］㊂大部分的ｃｉｒｃＲＮＡ是由外显子序列构成，在不同的物种中具有保守性，同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性㊂ＣｉｒｃＲＮＡ也可以通过非经典剪接方式进行反向剪接形成㊂２０１３年，Ｊｅｃｋ等［５］在‘ＲＮＡ“中提出ｃｉｒｃＲＮＡ产生的两种模型：套索驱动环化和内含子驱动环化㊂套索驱动环化模型认为ｐｒｅ⁃ｍＲＮＡ的转录过程中由于ＲＮＡ发生了部分折叠，拉近了原本非相邻的外显子，从而发生了外显子跳跃，使得被跨越的区域形成了环形ＲＮＡ中间体，进一步通过套索剪接形成由外显子构成的环形ＲＮＡ分子㊂另一种模型认为，内含子区域的反向互补序列导致内含子区域配对，介导反向剪接，从而形成环形ＲＮＡ分子［１１］㊂１ ２㊀ＣｉｒｃＲＮＡ的分类环状ＲＮＡ的产生多种多样，可来源于不同的基因，也可由同一基因产生㊂根据来源可以分为３类：存在于细胞质中仅由外显子构成的环状ＲＮＡ（ｅｘｏｎｉｃｃｉｒｃＲＮＡ）；置于细胞核中仅由内含子构成的环状ＲＮＡ（ｉｎｔｒｏｎｉｃｃｉｒｃＲＮＡ）［１２］；包含外显子之间的内含子的ｃｉｒｃＲＮＡ（ｅｘｏｎ⁃ｉｎｔｒｏｃｉｒｃＲＮＡ）［１３］㊂１ ３㊀ＣｉｒｃＲＮＡ的作用机制ＣｉｒｃＲＮＡ最初被认为是ｍＲＮＡ拼接错误的副产品，具有稳定㊁多样化和保守的特点㊂近期研究显示，ｃｉｒｃＲＮＡ在不同物种中起到ｍｉＲＮＡ 分子海绵 的作用，称之为竞争性内源ＲＮＡ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓＲＮＡ，ｃｅＲＮＡ），能竞争性结合疾病相关的ｍｉＲＮＡ，解除ｍｉＲＮＡ对其靶基因的抑制作用，上调靶基因的表达水平，从而在疾病调控中发挥重要作用㊂ＣｉｒｃＤＯＣＫ１通过作为ｃｅＲＮＡ调节ＢＩＲＣ３表达并参与ＯＳＣＣ细胞凋亡的过程［１４］㊂Ｃｉｒｃ＿１００２９０通过充当ｍｉＲ⁃２９的 分子海绵 在口腔癌中发挥作用［１５］㊂ＣｉｒｃＨＩＰＫ３作为ｍｉＲ⁃１２４海绵，调节靶标水通道蛋白３（ＡＱＰ⁃３）表达，ＡＱＰ⁃３进而促进细胞增殖和迁移［１６］㊂ＣｉｒｃＲＮＡ也可与ｌｎｃＲＮＡ竞争性结合ｍｉＲＮＡ㊂Ｌｉ等［１７］通过ＧＯ分析和ＫＥＧＧ分析发现，在生殖干细胞中ｌｎｃＲＮＡＭｅｇ３和ｃｉｒＲＮＡＩｇｆ１ｒ可以与ｍｉＲＮＡ⁃１５ａ⁃５ｐ竞争结合增加靶基因ＩｎｈＡ㊁ＡＣＳＬ３㊁ＫＩＦ２１Ｂ和ＩＧＦＢＰ２的表达㊂这些发现为ｌｎｃＲＮＡｓ和ｃｉｒｃＲＮＡｓ提供了新的视角，为将来对生殖干细胞中ｌｎｃＲＮＡｓ和ｃｉｒｃＲＮＡｓ调控机制的研究奠定了基础㊂２㊀ＣｉｒｃＲＮＡ与口腔鳞癌２ １㊀口腔鳞癌中充当ｍｉＲＮＡ海绵作用ＣｉｒｃＲＮＡ可以与ｍｉＲＮＡ结合，从而阻止ｍｉＲＮＡ沉默，因此ｃｉｒｃＲＮＡ也称ｍｉＲＮＡ海绵［１８－１９］㊂有研究表明［３，７，１４－１５］，ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０㊁ｃｉｒｃＤＯＣＫ１㊁ｃｉｒｃＲＮＡＢＡＮＰ和ｃｉｒｃＲＮＡＩＴＣＨ在口腔癌中通过ｍｉＲＮＡ的海绵参与发病机制㊂２ １ １㊀ＣｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０Ｃｈｅｎ等［１５］使用微阵列分析对ＯＳＣＣ中的ｃｉｒｃＲＮＡ进行了全面研究，鉴定出在ＯＳＣＣ组织和非癌组织之间差异表达的ｃｉｒｃＲＮＡｓ，发现ｃｉｒｃ＿１００２９０在ＯＳＣＣ发展中起着重要的调节作用㊂ＣｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０在口腔癌组织中表达上调，通过充当ｍｉＲ⁃２９家族成员的 分子海绵 来调节基因表达㊂ＣｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０与ＯＳＣＣ细胞在体外和体内的增殖相关㊂他们还发现ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０在ＯＳＣＣ组织中上调并与ＣＤＫ６共表达㊂通过使用ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０特异性小干扰ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ）敲低ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０的表达水平，检测ＯＳＣＣ细胞系中Ｇ１／Ｓ期阻滞，抑制细胞增殖并降低ＣＤＫ６的表达㊂通过荧光素酶报告基因检测，观察到ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０直接与ｍｉＲ⁃２９家族成员结合，包括ｍｉＲ⁃２９ａ㊁ｍｉＲ⁃２９ｂ和ｍｉＲ⁃２９ｃ㊂进一步ＥＧＦＰ／ＲＦＰ报告分析显示ＣＤＫ６是ｍｉＲ⁃２９ｂ的直接靶标㊂总之，ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０可能作为ｃｅＲＮＡ通过抑制ｍｉＲ⁃２９ｂ家族成员来调节ＣＤＫ６表达㊂这表明ｃｉｒｃＲＮＡ可能在ＯＳＣＣ中发挥调节功能，可作为ＯＳＣＣ治疗的潜在靶点㊂进一步的研究显示ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０通过携带ｍｉＲ⁃２９家族成员来发挥其调控功能，以减少ＣＤＫ６的表达，ＣＤＫ６也直接被ｍｉＲ⁃２９家族靶向㊂它表明ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０和ＣＤＫ６ｍＲＮＡ是由ｍｉＲ２９家族连接的一对ｃｅＲＮＡ㊂２ １ ２㊀ＣｉｒｃＤＯＣＫ１ＣｉｒｃＤＯＣＫ１为环状ＲＮＡ鸟苷酸交换因子，先前有研究显示［２０］通过ＴＧＦ⁃β处理，ｃｉｒｃＤＯＣＫ１的表达降低，而ｃｉｒｃＤＯＣＫ１的靶基因ｍＲＮＡ表达增加２倍㊂此外ＴＧＦ⁃β处理可以诱导上皮间质转化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＥＭＴ），表明ｃｉｒｃＤＯＣＫ１的功能之一可以诱导上皮细胞ｍＲＮＡ下调，从而保持细胞稳定性㊂Ｗａｎｇ等［１４］通过用ＴＮＦ⁃α刺激ＣＡＬ⁃２７细胞建立凋亡模型，使用高通量微阵列从细胞凋亡模型和正常ＣＡＬ⁃２７细胞中获得差异表达的ｃｉｒｃＲＮＡ谱，发现ｈａｓ＿ｃｉｒｃ＿１００７２１（ｃｉｒｃＤＯＣＫ１）过表达并且敲低ｃｉｒｃＤＯＣＫ１表达水平可导致细胞凋亡率的增加㊂他们利用多种生物信息学方法，预测了ｃｉｒｃＲＮＡ㊁ｍｉＲＮＡ和基因之间的相互作用，并构建了ｃｉｒｃＤＯＣＫ１／ｍｉＲ⁃１９６ａ⁃５ｐ／ＢＩＲＣ３网络，确定ｃｉｒｃＤＯＣＫ１与ｍｉＲ⁃１９６ａ⁃５ｐ通过与ＢＩＲＣ３竞争，最终调节细胞凋亡而相互作用㊂用ｓｉＲＮＡ沉默ｃｉｒｃＤＯＣＫ１和模拟物上调ｍｉＲ⁃１９６ａ⁃５ｐ的表达，导致ＯＳＣＣ细胞中细胞凋亡增加并减少ＢＩＲＣ３形成，并通过ｑＲＴ⁃ＰＣＲ方法比较口腔鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的ｃｉｒｃＤＯＣＫ１，ｍｉＲ⁃１９６ａ⁃５ｐ和ＢＩＲＣ３的表达进一步证实了此结果㊂最后得出结论，ｃｉｒｃＤＯＣＫ１通过在ＯＳＣＣ中靶向ＢＩＲＣ３抑制ｍｉＲ⁃１９６ａ⁃５ｐ来抑制细胞凋亡㊂２ １ ３㊀ＣｉｒｃＲＮＡＢＡＮＰ和ｃｉｒｃＲＮＡＩＴＣＨ研究人员一直在探索控制牙周膜干细胞（ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＰＤＬＳＣ）成骨分化的分子机制㊂研究表明，ｃｉｒｃＲＮＡ参与成骨分化［３，７］㊂ＣｉｒｃＲＮＡＢＡＮＰ和ｃｉｒｃＲＮＡＩＴＣＨ分别为环状ＲＮＡ酸性神经肽和环状ＲＮＡ泛素连接蛋白㊂ＣｉｒｃＲＮＡＢＡＮＰ和ｃｉｒｃＲＮＡＩＴＣＨ可能与ｍｉＲＮＡ⁃３４ａ和ｍｉＲＮＡ⁃１４６ａ相互作用以通过ＭＡＰＫ途径调节ＰＤＬＳＣ成骨分化㊂虽然有数种ｌｎｃＲＮＡｓ㊁ｃｉｒｃＲＮＡｓ和ｍｉＲＮＡｓ被认为参与了ＰＤＬＳＣ成骨分化，但是关于它们潜在的网络和功能的数据并不多㊂为了充分了解ｃｅＲＮＡ对ＰＤＬＳＣ成骨分化的影响，整合ｌｎｃＲＮＡ／ｃｉｒｃＲＮＡ⁃ｍｉＲＮＡ⁃ｍＲＮＡ竞争性调控网络至关重要㊂利用ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳｅｑ２０００开发ＲＮＡ测序（ＲＮＡ⁃ｓｅｑ），以全面鉴定正常和成骨诱导性ＰＤＬＳＣｓ中差异表达的ｌｎｃＲＮＡ和ｃｉｒｃＲＮＡ㊂使用ｑＲＴ⁃ＰＣＲ进一步证实了代表性的ｌｎｃＲＮＡ和ｃｉｒｃＲＮＡ㊂最后，基于ｍｉＲａｎｄａ预测了ｌｎｃＲＮＡ㊁ｃｉｒｃＲＮＡ㊁ｍｉＲＮＡ和ｍＲＮＡ的ｃｅＲＮＡ网络，并通过ＧＯ分析和ＫＥＧＧ分析研究了它们的潜在调控作用㊂ＣｅＲＮＡ网络表明，ＴＣＯＮＳ＿００２１２９７９㊁ＴＣＯＮＳ＿００２１２９８４㊁ｃｉｒｃＲＮＡＢＡＮＰ和ｃｉｒｃＲＮＡＩＴＣＨ可能与ｍｉＲＮＡ⁃３４ａ和ｍｉＲＮＡ⁃１４６ａ相互作用以通过ＭＡＰＫ途径调节ＰＤＬＳＣ成骨分化［２１］㊂研究结果可能为探索ＰＤＬＳＣ成骨分化的分子机制提供新的证据㊂２ ２㊀转录调节作用Ｌｉ等［２２］研究发现，在人类ＨｅＬａ细胞中存在与ＲＮＡ聚合酶ＩＩ相关的ｃｉｒｃＲＮＡｓ㊂在这些ｃｉｒｃＲＮＡ中，外显子被环化，内含子在外显子之间 保留 ，可称它们为外显子⁃内含子ｃｉｒｃＲＮＡ或ＥＩｃｉＲＮＡ（ｅｘｏｎ⁃ｉｎｔｒｏｎｃｉｒｃＲＮＡ）㊂ＥＩｃｉＲＮＡ主要定位于核内，与Ｕ１ｓｎＲＮＰ相互作用并促进其亲本基因的转录㊂他们的研究结果揭示了ｃｉｒｃＲＮＡ在调节细胞核中基因表达中的新作用，其中ＥＩｃｉＲＮＡｓ增强其顺式的亲本基因表达，并突出了通过Ｕ１ｓｎＲＮＡ和ＥＩｃｉＲＮＡｓ之间的特定ＲＮＡ⁃ＲＮＡ相互作用进行转录控制的调控策略［２２］㊂２ ３㊀生物标志物据报道，ｃｉｒｃＲＮＡＢＡＮＰ和ｃｉｒｃＲＮＡＩＴＣＨ有助于致癌并可能作为癌症生物标志物［２３－２４］㊂ＣｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０作为ｍｉＲ⁃２９家族成员的海绵起作用，在口腔癌中起到ＣＤＫ６的ｃｅＲＮＡ的作用［１５］，ｃｉｒｃＤＯＣＫ１通过作为ｃｅＲＮＡ调节ＢＩＲＣ３表达并参与ＯＳＣＣ细胞凋亡的过程［１３］㊂因此，ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０和ｃｉｒｃＤＯＣＫ１可能成为ＯＳＣＣ的新型潜在生物标志物和治疗靶点㊂ＣｉｒｃＲＮＡ参与多种病理状态，包括神经系统疾病［２５－２６］㊁血液病［２７］㊁软骨退化［２８］㊁先天性巨结肠病［２９］和多种癌症，这可以作为有前途的诊断生物标志物和治疗靶点㊂与ｍｉＲＮＡ和ｌｎｃＲＮＡ相比，ｃｉｒｃＲＮＡ具有序列保守性，生物学稳定性和组织特异性特点，因此ｃｉｒｃＲＮＡ被认为是有希望的生物标志物和治疗靶点，并且可能在基因表达的调节中发挥潜在的功能㊂３㊀展望近几年来，ｃｉｒｃＲＮＡ具有充当ｍｉＲＮＡ分子 分子海绵 ㊁调控基因转录㊁与蛋白质相互作用㊁吸附蛋白质以及参与蛋白质的翻译等功能，且能稳定存在于血清等特性㊂虽然目前对ｃｉｒｃＲＮＡ的研究并不是很多，但随着ＲＮＡ测序技术的迅速发展，ｃｉｒｃＲＮＡ这个未来之星在口腔鳞癌的诊断和预后治疗方面有很大的发展前景㊂从ｃｉｒｃＲＮＡ入手挖掘新的生物标志物及ｃｉｒｃＲＮＡ在口腔中的潜在功能有助于口腔癌的早发现㊁早治疗㊂目前部分ｃｉｒｃＲＮＡ已被证实与肿瘤的发生㊁侵袭㊁转移和患者的预后相关㊂随着生物信息学方法及实验技术手段不断成熟，大数据分析的广泛应用，挖掘新数据㊁筛选具有生物标记的ｃｉｒｃＲＮＡ㊁结合ｃｉｒｃＲＮＡ⁃ｍｉＲＮＡ⁃ｍＲＮＡ机制及ｃｉｒｃＲＮＡ⁃ｌｎｃＲＮＡ⁃ｍＲＮＡ机制分析疾病通路对于研究口腔鳞癌发生发展进程具有广阔的发展前景㊂参考文献：［１］㊀ＧｌｏｂａｌＢｕｒｄｅｎｏｆＤｉｓｅａｓｅＣａｎｃｅｒＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ．ＴｈｅＧｌｏｂａｌＢｕｒｄｅｎｏｆＣａｎｃｅｒ２０１３［Ｊ］．ＪＡＭＡＯｎｃｏｌ，２０１５，１（４）：５０５－５２７．［２］㊀ＧｈａｎｔｏｕｓＹ，ＹａｆｆｉＶ，Ａｂｕ⁃ＥｌｎａａｊＩ．Ｏｒａｌｃａｖｉｔｙｃａｎｃｅｒ：ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙａｎｄｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．ＲｅｆｕａｔＨａｐｅｈＶｅｈａｓｈｉｎａｙｉｍ（１９９３），２０１５，３２（３）：５５－６３，７１．［３］㊀ＢａｒｒｅｔｔＳＰ，ＳａｌｚｍａｎＪ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０１６，１４３（１１）：１８３８－１８４７．［４］㊀ＨｅｎｔｚｅＭＷ，ＰｒｅｉｓｓＴ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ：ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｓｅｎｉｇｍａｖａｒｉａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ，２０１３，３２（７）：９２３－９２５．［５］㊀ＪｅｃｋＷＲ，ＳｏｒｒｅｎｔｉｎｏＪＡ，ＷａｎｇＫ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓａｒｅａｂｕｎｄａｎｔ，ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ，ａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＡＬＵｒｅｐｅａｔｓ［Ｊ］．ＲＮＡ，２０１３，１９（２）：１４１－１５７．［６］㊀ＭｅｎｇＸ，ＬｉＸ，ＺｈａｎｇＰ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡ：ａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｋｅｙｐｌａｙｅｒｉｎＲＮＡｗｏｒｌｄ［Ｊ］．ＢｒｉｅｆＢｉｏｉｎｆｏｒｍ，２０１７，１８（４）：５４７－５５７．［７］㊀ＬａｓｄａＥ，ＰａｒｋｅｒＲ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ：ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｆｏｒｍａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＲＮＡ，２０１４，２０（１２）：１８２９－１８４２．［８］㊀ＹｏｕＸ，ＶｌａｔｋｏｖｉｃＩ，ＢａｂｉｃＡ，ｅｔａｌ．ＮｅｕｒａｌｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓａｒｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｓｙｎａｐｔｉｃｇｅｎｅｓａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ［Ｊ］．ＮａｔＮｅｕｒｏｓｃｉ，２０１５，１８（４）：６０３－６１０．［９］㊀ＨｕａｎｇＺ，ＳｕＲ，ＤｅｎｇＺ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓｉｎｈｕｍａｎｍｏｎｏｃｙｔｅｄｅｒｉｖｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０１７，７（１）：１３６７３．［１０］㊀罗清，姚芳苡，邓桢，等．ＬＰＳ诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应中环状ＲＮＡ表达谱变化分析［Ｊ］．中华微生物学和免疫学杂志，２０１７，３７（６）：４０５－４１１．［１１］㊀战昊，朱凯，胡志强，等．环状ＲＮＡ：非编码ＲＮＡ研究新方向［Ｊ］．中国临床医学，２０１６，２３（５）：６５１－６５５．［１２］㊀ＷｅｓｔｈｏｌｍＪＯ，ＭｉｕｒａＰ，ＯｌｓｏｎＳ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ⁃ｗｉｄｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｍｓｏｐｈｉｌａｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓｒｅｖｅａｌｓｔｈｅｉｒｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄａｇｅ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｎｅｕｒａｌａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｅｌｌＲｅｐ，２０１４，９（５）：１９６６－１９８０．［１３］㊀ＣｈｅｎＩ，ＣｈｅｎＣＹ，ＣｈｕａｎｇＴＪ．Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｅｘｏｎｉｃｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ［Ｊ］．ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐＲｅｖＲＮＡ，２０１５，６（５）：５６３－５７９．［１４］㊀ＷａｎｇＬ，ＷｅｉＹ，ＹａｎＹ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃＤＯＣＫ１ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃１９６ａ⁃５ｐｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＢＩＲＣ３ｉｎＯＳＣＣ［Ｊ］．ＯｎｃｏｌＲｅｐ，２０１８，３９（３）：９５１－９６６．［１５］㊀ＣｈｅｎＬ，ＺｈａｎｇＳ，ＷｕＪ，ｅｔａｌ．ｃｉｒｃＲＮＡ＿１００２９０ｐｌａｙｓａｒｏｌｅｉｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒｂｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇａｓａｓｐｏｎｇｅｏｆｔｈｅｍｉＲ⁃２９ｆａｍｉｌｙ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０１７，３６（３２）：４５５１－４５６１．［１６］㊀ＣｈｅｎＧ，ＳｈｉＹ，ＬｉｕＭ，ｅｔａｌ．ｃｉｒｃＨＩＰＫ３ｒｅｇｕｌａｔｅｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｂｙｓｐｏｎｇｉｎｇｍｉＲ⁃１２４ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＡＱＰ⁃３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｓ，２０１８，９（２）：１７５．［１７］㊀ＬｉＸ，ＡｏＪ，ＷｕＪ．ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｅｄｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｌｎｃＲＮＡｓａｎｄｃｉｒｃＲＮＡｓｗｉｔｈａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｏ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｅＲＮＡｎｅｔｗｏｒｋｓｉｎｍｏｕｓｅｇｅｒｍｌｉｎｅｓｔｅｍｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１７，８（１６）：２６５７３－２６５９０．［１８］㊀Ｍｏｍｅｎ⁃ＨｅｒａｖｉＦ，ＢａｌａＳ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇｒｏｌｅｏｆｎｏｎ⁃ｃｏｄｉｎｇＲＮＡｉｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌ，２０１８，４２：１３４－１４３．［１９］㊀ＪｅｃｋＷＲ，ＳｈａｒｐｌｅｓｓＮＥ．ＤｅｔｅｃｔｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ［Ｊ］．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１４，３２（５）：４５３－４６１．［２０］㊀ＣｏｎｎＳＪ，ＰｉｌｌｍａｎＫＡ，ＴｏｕｂｉａＪ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＲＮＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｑｕａｋｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｅｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃｉｒｃＲＮＡｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２０１５，１６０（６）：１１２５－１１３４．［２１］㊀ＧｕＸ，ＬｉＭ，ＪｉｎＹ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｎｔｅｇｒａｔｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｌｎｃＲＮＡｓａｎｄｃｉｒｃＲＮＡｓｒｅｖｅａｌｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｃｅＲＮＡｎｅｔｗｏｒｋｓｄｕｒｉｎｇＰＤＬＳＣｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢＭＣＧｅｎｅｔ，２０１７，１８（１）：１００．［２２］㊀ＬｉＺ，ＨｕａｎｇＣ，ＢａｏＣ，ｅｔａｌ．Ｅｘｏｎ⁃ｉｎｔｒｏｎｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓｒｅｇｕｌａｔｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｉｎｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓ［Ｊ］．ＮａｔＳｔｒｕｃｔＭｏｌＢｉｏｌ，２０１５，２２（３）：２５６－２６４．［２３］㊀ＺｈｕＭ，ＸｕＹ，ＣｈｅｎＹ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｒＢＡＮＰ，ａｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｔｈａｔｍｏｄｕｌａｔｅｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ，２０１７，８８：１３８－１４４．［２４］㊀ＧｕｏＷ，ＺｈａｎｇＪ，ＺｈａｎｇＤ，ｅｔａｌ．ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆｃｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｃｉｒｃ⁃ＩＴＣＨｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１７，８（２９）：４８１６９－４８１７７．［２５］㊀ＫｕｍａｒＬ，Ｓｈａｍｓｕｚｚａｍａ，ＨａｑｕｅＲ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｓ：ｔｈｅｅｍｅｒｇｉｎｇｃｌａｓｓｏｆｎｏｎ⁃ｃｏｄｉｎｇＲＮＡｓａｎｄｔｈｅｉｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｈｕｍａｎｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＭｏｌＮｅｕｒｏｂｉｏｌ，２０１７，５４（９）：７２２４－７２３４．［２６］㊀ＮａｎＡ，ＣｈｅｎＬ，ＺｈａｎｇＮ，ｅｔａｌ．ＡｎｏｖｅｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｎｅｔｗｏｒｋａｍｏｎｇＬｎｃＲｐａ，ＣｉｒｃＲａｒ１，ｍｉＲ⁃６７１ａｎｄａｐｏｐｔｏｔｉｃｇｅｎｅｓｐｒｏｍｏｔｅｓｌｅａｄ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．ＡｒｃｈＴｏｘｉｃｏｌ，２０１７，９１（４）：１６７１－１６８４．［２７］㊀ＢｏｎｉｚｚａｔｏＡ，ＧａｆｆｏＥ，ＴｅＫｒｏｎｎｉｅＧ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃＲＮＡｓｉｎｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓａｎｄｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ［Ｊ］．ＢｌｏｏｄＣａｎｃｅｒＪ，２０１６，６（１０）：ｅ４８３．［２８］㊀ＬｉｕＱ，ＺｈａｎｇＸ，ＨｕＸ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅＥＣＭｒｅｇｕｌａｔｅｓＭＭＰ１３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇａｓａＭｉＲ⁃１３６ ｓｐｏｎｇｅ ｉｎｈｕｍａｎｃａｒｔｉｌａｇｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０１６，６：２２５７２．［２９］㊀ＰｅｎｇＬ，ＣｈｅｎＧ，ＺｈｕＺ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｒＲＮＡＺＮＦ６０９ｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｓａｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓＲＮＡｔｏｒｅｇｕｌａｔｅＡＫＴ３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｓｐｏｎｇｉｎｇｍｉＲ⁃１５０⁃５ｐｉｎＨｉｒｓｃｈｓｐｒｕｎｇ ｓｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１７，８（１）：８０８－８１８．收稿日期 ２０１８－０５－１０。

分子 生物 学 机 制 研 究 。Ｃ ｅ ｈ ｎ等 ］ 利 用 该 模 型 进 也 行 了相关 的研 究 。程鹏 等也 利 用 Ｓ Ｄ大 鼠建立 该动 物 模 型 ，观 察过 度暴 露 于 胃一 十二 指 肠 反 流 物 中 的食 管
食 管癌 大 鼠模 型 有 学 者对 近 年诱 发 食 管 癌 所 用 动 物 的 种类 进 行 分析 ， 现 应 用 最 多 的是 大 鼠 ， 中 又 以 Ｆ ４ 发 其 ３ ４和 Ｓ Ｄ
Ｈ ｒｓ —ａ 编码 序列 第 ３ ５嘌呤 核苷 酸 （ 即第 ｌ 密码 子 Ｇ — ＧＡＡ） 没 ２位 ＧＡ ， 有 发 现 其 他 的 Ｈ—ａ ｒｓ和 Ｋ ｒｓ突 变 。Ｂ ｃ ｓ等 用 —ａ ａｕ ＮＭＢ Ａ诱 导 的 Ｆ ４ ３ ４大 鼠食 管 癌 进 行 全 组 织 图 像 分
中图分类号 ：７５１ Ｒ ３． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６３４ ３ （ ０ ７ ０—３ －３ １ ７— １０ ２ ０ ）５４ ３０
实 验动 物科学 既是生 命 科 学 的重 要 组 成 部分 ， 又 是 生命科 学 发 展 的重 要 基 础 。实 验 动 物 在 保 障人 类
对 食 管乳 头 状 瘤 有 抑 制 作 用 。王 立 东 等 也 用 该 食 管 癌 大 鼠模 型研 究 食 管癌 致 病 因 素 、 病 机 制及 防 治 。 发
健康 和优 化 生 存 环 境 中 的作 用 是 不 容 置 疑 的 。对 生
命 科学 发展 的促进 作用 也 是 显 而 易见 的 。据 统 计 ， ］ １６ ９ ６年 至 １ ９ ９ ６年 ３ Ｏ年 间 ， Ｏ位 诺 贝 尔 医学 奖 获 得 ３ 者中 ２ ３位 （ ８ ％） 占 Ｏ 的工 作需 要使 用 实 验 动 物 ， ０ ２ ２０ 年 ２ 位 医学 诺贝 尔奖 获奖 者 ， 中 １ １ 其 ３位 （ ６ ） 占 Ｏ 的 工作 与实 验 动 物 有 关 。食 管 癌 是 人 类 常 见 的恶 性 肿

#### 一、实验背景肺癌是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。

为了深入研究肺癌的发病机制、评估治疗效果和寻找新的治疗方法，建立可靠的肺癌动物模型至关重要。

本实验旨在通过二乙基硝胺（DEN）诱导小鼠肺癌，构建一种可靠的肺癌动物模型，并对其进行详细观察和分析。

#### 二、实验材料与方法##### 1. 实验动物选用SPF级C57BL/6小鼠，雄性，体重18-22g，购自某实验动物中心。

##### 2. 实验药物二乙基硝胺（DEN），纯度≥98%，购自某化学试剂公司。

##### 3. 实验方法（1）动物分组：将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

（2）实验组：每周对实验组小鼠进行1次皮下注射1% DEN水溶液，每次剂量为56mg/kg，连续注射12周。

（3）对照组：每周对对照组小鼠进行1次皮下注射等体积的生理盐水。

（4）观察指标：观察小鼠的生长状况、行为表现、体重变化等，并在实验结束后进行病理学检查。

#### 三、实验结果##### 1. 小鼠生长状况实验期间，实验组小鼠生长状况与对照组无明显差异，体重变化无显著性差异。

##### 2. 小鼠行为表现实验组小鼠在实验过程中出现不同程度的咳嗽、呼吸困难等症状，而对照组小鼠无明显异常。

##### 3. 病理学检查实验结束后，对实验组和对照组小鼠进行病理学检查，结果显示：（1）实验组小鼠肺组织出现明显的病理改变，表现为肺泡壁增厚、肺泡腔内细胞增生、肺泡结构破坏等；（2）部分实验组小鼠肺组织中出现肿瘤细胞，呈浸润性生长，符合肺癌的特征；（3）对照组小鼠肺组织无异常。

#### 四、讨论与分析本实验通过二乙基硝胺诱导小鼠肺癌，成功构建了一种可靠的肺癌动物模型。

实验结果显示，实验组小鼠在实验过程中出现咳嗽、呼吸困难等症状，病理学检查发现肺组织出现明显的病理改变，符合肺癌的特征。

与对照组相比，实验组小鼠的肺组织出现肿瘤细胞，表明本实验构建的肺癌动物模型具有可靠性。