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门冬氨酸氨基移换酶（AST）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆AST浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-2700全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】 ASTL-天门冬氨酸+ α-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸MDH(苹果酸脱氢酶)草酰乙酸+ NADH +H+ L-苹果酸+ NAD+ + H2O【试剂】试剂1（R1）：L-天门冬氨酸试剂2（R2）：α-酮戊二酸试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
2.校准品：DiaSys TruCal U。
3. 质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l），不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。
【操作步骤】1.仪器测定参数设置Test Name:Sample: Volume L DilutiR1 L DilutiR2Sec. ODMethod FirstLMeasuring Firs Last LMeasuring LastANo-Lag-Time: Onboard2.试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8℃）。
3.校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于－20℃冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
上机校准程序：[1]入界面。
[2] 用光标键选欲校准项目，。
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1.检测原理PEPC+Mg2+PEP + HCO3------------------------- 草酰乙酸+ H2PO4MDH草酰乙酸+ NADH + H+ --------------苹果酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技责任公司CO2试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：3.2 校准血清：使用湖南永和阳光科技责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的±2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：原原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
实验室工作制度1.室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。
2.实验室工作人员工作时一律穿制服，保持衣帽整洁，试验过程中应专心致志、认真负责，坚守工作岗位，不得随意串岗、闲谈，保持实验室安静，下班离开实验室前要检查并关好水、电、门、窗等，注意实验室安全。
3.认真开展实验室质量控制工作，仪器设备应定期保养，有温度记录，检测标本的保存要求符合规范要求。
4.实验室不得放置与测试无关的物品，水、温、湿度、光照、防震、防尘、防噪声等，环境必须符合实验室的工作要求。
5.实验和楼道内必须配置足够的安全防火措施，并定期检查保养。
6.对不同属性、品种和含量水平的试样，应有足够的试验区域，予以分离检验，尤其是已知具有生物危害的试样必须分离检验。
防止损害工作人员健康和污染环境。
7.与检验无关人员不得进入实验室，外单位人员联系工作，一律在办公室接待。
8.实验结束后，应及时清理实验现场和用品，对染菌带毒的器具废弃物应严格进行消毒无菌处理。
9.实验室内禁止吸烟、用餐和进食。
丙氨酸氨基转移酶测定SOP【预期用途】用于对人血清样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力的体外定量检测，作辅助诊断用。
【临床意义】丙氨酸氨基转移酶在肝脏中有较高的含量，面在肾、心骨骼肌、胰、脾、肺脏中则含量较少。
丙氨酸氨基转移酶活性升高通常是由某些与肝脏有关的冷热病引起的，这些疾病包括：肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎和阻塞性黄疸。
在急性病毒性或中毒性肝炎时，丙氨酸氨基转移酶活性明显高于天门科氨酸氨基转移酶，而对于绝大多数的慢性肝炎病人丙氨酸氨基转移酶则低于天门冬氨酸氨基转移酶。
丙氨酸氨基转移酶活性升高也见于广泛损伤和肌肉疾病、伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。
【检验原理】（1）样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至ɑ-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
（2）丙酮酸补试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+H）被氧化办辅酶I（NAD），而使波长340nm处吸光度值下降。
包头文治医院- 1 -丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+ L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/L L-丙氨酸750 mmol/L 乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/L NADH 0.9mmol/L *不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm 温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤空白/校准/样本10ul R1200ul混匀，37℃孵育5min；R250ul 混匀，37℃孵育1min后，连续测定3min内的吸光度，计算吸光度变化率（ΔA/min）。
辅酶类检测辅酶是一小有机非蛋白分子，其用途为在酵素（酶）内载运化学基。
许多辅酶是磷化水溶性维他命。
但非维他命物质也可能是辅酶，如ATP－磷酸基的生化载具。
在细胞内，反应后的辅酶可以被再生，以维持其胞内浓度在一个稳定的水平上。
由于辅酶的再生对于维持酶反应体硫胺素系的稳定是必要的，因此，辅酶再生系统在实验室以及工业中具有广泛应用。
辅酶迪信泰检测平台采用生化的方法检测辅酶类物质，使用相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测辅酶类物质的活性变化。
目前可检测的辅酶类物质包括NADH、NADPH、乳酸脱氢酶、乙醛脱氢酶、柠檬酸合酶和丙酮酸脱羧酶等。
此外，迪信泰检测平台还提供HPLC法测定辅酶类物质的服务，以满足您的不同需求。
pH值对丙酮酸脱羧酶活性的影响迪信泰检测平台可检测辅酶类项目NADH氧化酶((NOX))活性检测乳酸脱氢酶((LDH))活性检测6-磷酸葡萄糖脱氢酶((G6PDH))活性检测NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)/ NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性检测硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测NAD激酶(NADK)活性检测柠檬酸合酶(CS)活性检测丙酮酸脱羧酶(PDC)活性检测醇脱氢酶(ADH)活性检测胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测NADP磷酸酶(NADPase)活性检测NAD-苹果酸酶(NAD-ME) /NADP-苹果酸酶(NADP-ME)活性检测6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)活性检测肌酸激酶(CK)活性检测脂肪酸合成酶(FAS)活性检测NADH含量检测NADPH含量检测生化法测定辅酶类样本要求：1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL，测定样品不返还，请您保留备份。
周期：2~3周项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）2. 相关参数（中英文）3. 图片4. 原始数据5. 辅酶类酶活性信息。
乙醛脱氢酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：乙醛脱氢酶(EC 1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。
主要作用是将乙醛氧化成乙酸，在酒精代谢中起主要作用。
在人类和许多动物体内，线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化，所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注；同时，乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。
测定原理：在辅酶Ⅰ存在的条件下，乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH，在340nm处的吸光值会增加，测定340nm处的吸光值变化，可计算得到乙醛脱氢酶的活性。
自备实验用品及仪器：天平、离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体1m L×1支，4℃避光保存。
试剂四：液体1m L×1支，4℃保存。
试剂五：液体1m L×1支，4℃保存。
ALDH提取：1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm。
2、操作表对照管测定管样本（µL）40试剂一（µL）60 60试剂二（µL ） 20 20 试剂三（µL ） 10 10 试剂四（µL ） 10 10 试剂五（µL ） 10 10 H 2O （µL ）9050充分混匀，37℃，微量石英比色皿/96孔板，对照管调零，于340nm 处测定0s 与60s 的吸光值A1和A2，△A= A2-A1。
人乙醛脱氢酶（ALDH)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中乙醛脱氢酶（ALDH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙醛脱氢酶（ALDH)水平。
用纯化的人乙醛脱氢酶（ALDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙醛脱氢酶（ALDH)，再与HRP标记的乙醛脱氢酶（ALDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的乙醛脱氢酶（ALDH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乙醛脱氢酶（ALDH)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：90ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
货号：MS2102 规格：100管/96样琥珀酸脱氢酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。
此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
测定原理：SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP 的还原速度，代表SDH酶活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：100mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：20mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：1.5mL×1支，-20℃保存；试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1、称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆600g，4℃离心5min。
3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的SDH（此步可选做）。
5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体SDH活性测定。
测定步骤和加样表：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）在试剂四中加入18mL蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；（2）在试剂五中加入1mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂五和180μL试剂四，混匀，第1页，共2页立即记录600nm处20s时的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定操作规程（SOP文件）1实验原理和检验目的本试剂用于人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的体外定量测定。
AST门冬氨酸+ α-酮戊二酸谷氨酸+ 草酰乙酸MDH草酰乙酸+ NADH + H+ 苹果酸+ NAD+在波长340nm处测定NADH降低速率，计算出AST活力。
2标本采集和处理2.1标本种类和采集方法标本：新鲜无溶血血清。
受检者（体检对象或病人）的准备：对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯。
静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布。
2.2标本处理方法标本要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
样品采集后要离心标本，吸出血清。
标本应立即测定。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3试剂3.1试剂组成3.2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。
3.3试剂稳定性试剂在2-8℃避光保存可稳定12个月，试剂开盖后稳定7天。
R1和R2以2：1混匀，即为单一工作试剂。
单一工作试剂稳定1周。
4校准4.1校准品每日进行试剂空白校准操作。
使用朗道（RONDOX）进行全点校准操作。
4.2校准品准备朗道（RONDOX）校准物复溶30分钟，充分溶解混匀后即可使用。
4.3校准品稳定性朗道（RONDOX）冻干校准物2～8℃密闭保存稳定至有效期，复溶后校准物15℃～25℃稳定8小时，2℃～8℃稳定2天，-15℃～-25℃稳定2周。
4.4试剂校准周期校准周期为2天。
当试剂批号更换时应重新校准。
5质控5.1质控品采用朗道（RONDOX）（正常范围质控）和朗道（RONDOX）（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
5.2可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。
5.3质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。
如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。
天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定方法操作程序【产品名称】通用名称：天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活力。
【检验原理】在AST催化下，从天门冬氨酸转移氨基到α-酮戊二酸，生成产物L-谷氨酸和草酰乙酸。
草酰乙酸通过苹果酸脱氢酶催化下生成苹果酸，在340nm波长条件下测定到NADH吸光度的变化率，与AST的活力成比例。
L—天门冬氨酸+α-酮戊二酸草酰乙酸+ L-谷氨酸O草酰乙酸+NADH+H+L-苹果酸+NAD++H【主要组成成份】R1：Tris缓冲液100mmol/LL-天门冬氨酸300 mmol/L苹果酸脱氢酶（MDH）≥600U/L乳酸脱氢酶≥900U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸60mmol/LNADH 0.9mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清，采集后及时测定，应避免污染和溶血。
样本3天内的活性损失：（2℃~8℃保存）<8%；（15℃~25℃保存）<10%。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织匀浆及相关液体样本中苹果酸脱氢酶(MDH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)水平。
用纯化的小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入苹果酸脱氢酶(MDH)，再与HRP标记的苹果酸脱氢酶(MDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的苹果酸脱氢酶(MDH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：135 U/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50µl，浓度分别为90U/L,60U/L ,30U/L,15U/L,7.5 U/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：Array以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%检测范围：5.0U/L – 120U/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Mouse MDHFOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name：Mouse MDH ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of MDH concentrations in Mouse serum, blood plasma, and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Mouse MDH level in the sample, use Purified Mouse MDH antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add MDH to wells, Combined MDH antibody which With HRP labeled,become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of MDH in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitMaterials provided withthe kit48determinations96 determinations Storage User manual 1 1Closure plate membrane 2 2Sealed bags 1 1Microelisa stripplate 1 1 2-8℃Standard：135 U/L0.5ml×1 bottle0.5ml×1 bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1 bottle 1.5ml×1 bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Sample diluent3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃Stop Solution3ml×1 bottle6ml×1 bottle2-8℃wash solution （20ml×20 fold）×1bottle（20ml×30 fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100µl to the first and the second well, then add Standard dilution 50µl to the first and the second well, mix; take out 100µl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50µl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50µl from the third and the forth well discard, add 50µl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50µl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50µl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50µl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50µl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50µl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50µl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50µl to each well after Diluting ,(density:90U/L,60U/L ,30U/L,15U/L,7.5 U/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40µl to testing sample well, then add testing sample 10µl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50µl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateTake the standard density as the horizontal, the ODAssay range5.0U/L – 120U/L Storage and validity 1．Storage：2-8℃. 2．validity：six months.This chartis for reference only。
