TMPRSS2-ERG、AMACR和p63在前列腺癌中的表达及相关性

安徽医科大学学报Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅ　Ⅱ蕊肘ｅｄ　ｃ　ｎ０　Ａｎ　２０１２　Ｎｏｖ；４７（１１）　・１３５１・　

ＴＭＰＲＳＳ２．ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ和ｐ６３在前列腺癌中的表达及相关性　孙文国　，夏利　，蒋雷鸣　，杨伟娇。，莫文发　

摘要　目的分析跨膜丝氨酸蛋白酶２（ＴＭＰＲＳＳ２）－ＥＲＧ、甲　酰基辅酶Ａ一旋酶（ＡＭＡＣＲ）、基底细胞标记抗体（ｐ６３）在不　同前列腺组织中的表达情况，并探讨其与前列腺癌临床病理　特征之间的相关性。方法分别用快捷免疫组织化学染色　法和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）法检测５０例前列腺癌（ＰＣａ）、３０　例前列腺增生（ＢＰＨ）、１０例高级别前列腺上皮内肿瘤（ＨＧ－　ＰＩＮ）和１Ｏ例前列腺转移癌患者组织中的ＡＭＡＣＲ、０６３蛋白　和ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ融合基因的表达情况，并分析其相关性。　结果ＴＭＰＲＳＳ２一ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ在ＰＣａ中表达阳性率显著高　于良性ＢＰＨ对照组（Ｐ＜０．０１）；０６３在ＰＣａ和前列腺转移癌　中表达阳性率显著低于ＢＰＨ和ＨＧＰＩＮ（Ｐ＜０．叭）。在ＰＣａ　中，ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ融合基因稳定高表达，不受血清ＰＳＡ大　小、Ｇｌｅａｓｏｎ评分高低及ＴＮＭ分期的影响，而ＡＭＡＣＲ表达与　血清ＰＳＡ大小、Ｇｌｅａｓｏｎ评分高低及ＴＮＭ分期密切相关（Ｐ　＜０．０５）；ＴＭＰＲＳＳ２一ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ、０６３在ＰＣａ中的表达具有　相关性（Ｐ＜０．０５）；ＴＭＰＲＳＳ２一ＥＲＧ和ＡＭＡＣＲ的阳性符合率　随ＡＭＡＣＲ信号增强而增强，＋、＋＋、＋＋＋分别对应为０、　６６．７％（４／６）、８３．３％（３０／３６），呈明显的正相关（　＝０．３９０，　Ｐ＝０．００５），阴性符合率为７１．４％（５／７）。结论在ＰＣａ诊　断中ＴＭＰＲＳＳ２一ＥＲＧ融合基因可作为独立检测因子，ＴＭ—　ＰＲＳＳ２一ＥＲＧ和ＡＭＡＣＲ在ＰＣａ诊断中具有高符合率，ＴＭ－　ＰＲＳＳ２－ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ和０６３在ＰＣａ的疾病发生、发展中具有　某种相互作用。联合检测ＴＭＰＲＳＳ２．ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ、ｐ６３可以　在基因和蛋白两个层面对ＰＣａ做出更加稳定可靠的早期诊　断。　关键词前列腺癌；免疫组织化学染色法；荧光原位杂交；　ＴＭＰＲＳＳ２一ＥＲＧ融合基因；ＡＭＡＣＲ；０６３　中图分类号Ｒ　７３７．２　文献标志码Ａ文章编号１０００—１４９２（２０１２）１１—１３５１—０５　

前列腺癌（ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ，ＰＣａ）是发达国家常　见的男性生殖系统恶性肿瘤之一，发病率逐年升　高　。我国ＰＣａ的发病率和死亡率亦有明显增　

２０１２—０７—０３接收　基金项目：广西桂林市科学研究与技术开发计划（编号：２０１２０１２１—１　—２）　作者单位：桂林医学院附属医院　泌尿外科、　皮肤性病科、　病理　科，桂林５４１００１　中山大学附属第三医院泌尿外科，广州５１００００　作者简介：孙文国，男，硕士研究生；　蒋雷鸣，男，教授，主任医师，硕士生导师，责任作者，Ｅ．　ｍａｉｌ：ｕｒｏｄｏＩ８３＠ｓｉｎａ．ｃ０ｎｌ　加＿２　Ｊ，所以早发现、早诊断、早治疗显得尤为重要。　跨膜丝氨酸蛋白酶２（ＴＭＰＲＳＳ２）一ＥＲＧ融合基因是　新近发现的ＰＣａ标志物，具有特异性及广泛性，并　在ＰＣａ早期就有出现。甲酰基辅酶Ａ－旋酶（ａｌｐｈａ—　ｍｅｔｈｙｌａｃｙｌ—ＣｏＡ　ｒａｃｅｍａｓｅ，ＡＭＡＣＲ）和基底细胞标记　抗体（ｐ６３）是目前前列腺病理诊断中常用的免疫组　织化学标志物，但是在ＰＣａ诊断中会出现部分免疫　组化与病理诊断结果不相符的情况。因此，笔者采　用快捷免疫组织化学染色和荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓ．　ｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术，从基因和蛋　白两个水平检测前列腺组织中ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ融合　基因和ＡＭＡＣＲ、ｐ６３蛋白的表达情况，分析它们与　血清前列腺特异性抗原（ｐｉｏｓｔａｔｅ．ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ，　ＰＳＡ）、Ｇｌｅａｓｏｎ评分及ＴＮＭ分期之间的关系，进而　探讨它们之间的相关性。　１材料与方法　１．１样本来源收集桂林医学院附属医院２００９年　１月～２０１２年５月的前列腺组织蜡块１００例，其中　ＰＣａ　５０例，前列腺增生（ＢＰＨ）３Ｏ例，高级别前列腺　上皮内肿瘤（ＨＧＰＩＮ）１０例，前列腺转移癌１０例；年　龄４７—７９（６６．０．４－８．４）岁；ＰＣａ患者的血清ＰＳＡ≤　２０　ｎｇ／ｍｌ　２２例，ＰＳＡ＞２０　ｎｇ／ｍｌ　２８例；按修订的Ｇｌ—　ｅａｓｏｎ评分系统（２００４年）进行病理分期：Ｇｌｅａｓｏｎ评　分≤７分２８例，＞７分２２例；按ＴＮＭ分期（２００２　年）标准进行临床分期：Ｔ１．Ｔ２　２６例，　．Ｔ４　２４例。　术前患者均未进行化疗、放疗等治疗。所有受试对　象均经医院伦理委员会同意，并签署知情同意书。　１．２试剂兔抗人ＡＭＡＣＲ和ｐ６３及快捷型酶标　羊抗鼠／兔ＩｇＧ聚合物为福州迈新公司产品；ＴＭ．　ＰＲＳＳ２一ＥＲＧ融合基因检测试剂盒为北京金菩嘉医　疗科技有限公司产品，抗体及探针均为工作液。　１．３方法　１．３．１快捷免疫组织化学染色法采用经典的ｓＰ　法。石蜡切片常规脱蜡后，在修复液中行抗原热修　复，具体操作严格按照两步快捷免疫组化法使用说　明书进行。并设已知阳性片为阳性对照，用ＰＢＳ代　替一抗设为阴性对照。　１．３．２　荧光原位杂交检测将石蜡切片通过脱蜡、

　・１３５４・　安徽医科大学学报Ａｃｔａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉ￣Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｚ　Ａｎｈｕｉ　２０１２　Ｎｏｖ；４７（１１）　ＡＭＡＣＲ是ＣＡＩＢ—ＢＡＩＦ辅酶Ａ转换酶家族成员　之一，该基因定位于５ｐ１３，参与脂肪酸及其衍生物　的Ｂ一氧化过程。有研究　报道通过免疫组织化　学法证实ＡＭＡＣＲ在ＰＣａ组织中高阳性表达，而在　ＢＰＨ中无表达。ｐ６３基因是Ｐ５３基因家族成员之　一＿ｌ　Ｈ　Ｊ，该基因定位于３ｑ２７．２８，编码异构体具有转　录酶活性、死亡诱导活性和显色失活活性的作用。　ｐ６３在肌上皮细胞中表达，但是在肌纤维母细胞中　不表达。ＡＭＡＣＲ阳性标记部位在上皮分泌细胞或　癌细胞的胞质，ｐ６３阳性标记于基底细胞核，两者结　合从正反两个方面支持ＰＣａ诊断，可以提高ＰＣａ的　诊断敏感性。但是，它们有时候是矛盾的，不是所有　的ＰＣａ都会出现ＡＭＡＣＲ阳性和ｐ６３阴性，有时也　会出现ＡＭＡＣＲ和ｐ６３双阳性。结合ＴＭＰＲＳＳ２－　ＥＲＧ融合基因、ＡＭＡＣＲ和ｐ６３进行研究结果显示，　ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ、ｐ６３与ＡＭＡＣＲ检测的总体特异性　和敏感性均大大提高，甚至达到１００％。并且ＴＭ—　ＰＲＳＳ２．ＥＲＧ和ＡＭＡＣＲ在ＰＣａ诊断中的阳性符合　率随ＡＭＡＣＲ信号增强而增强，呈明显的正相关，而　ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ与ｐ６３呈明显的负相关。这说明　ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ和ｐ６３三者在ＰＣａ的疾病　发生、发展中可能具有某种相互作用，在信号转导通　路上可能存在某些关联，但具体机制需要进一步研　究。　ＰＣａ是多因素、多步骤共同作用的结果，其发　生、发展是一系列基因表达的综合作用。ＴＭＰＲＳＳ２－　ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ和ｐ６３是目前临床比较常用的ＰＣａ诊　断指标，本研究从基因和蛋白两个水平进行分析，对　ＰＣａ的诊断有积极的作用，３个指标间可能存在某　些复杂而密切的关联，联合应用于ＰＣａ的诊断，其　敏感性和特异性都达到了１００％，具有良好的临床　应用价值，对提高ＰＣａ的早期诊断有一定的帮助。　本研究未能对正常前列腺组织进行ＴＭＰＲＳＳ２一　ＥＲＧ、ＡＭＡＣＲ和ｐ６３的免疫组织化学和荧光原位杂　交的对比研究，三者之间的失衡关系还需要进一步　探讨，以便为ＰＣａ的早期诊断提供更可靠的证据。　参考文献　［１］Ｓｉｅｇｅｌ　Ｒ，Ｎａｉｓｈａｄｈａｍ　Ｄ，Ｊｅｍａｌ　Ａ．Ｃａｎｃｅｒ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１２［Ｊ］．　ＣＡ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｊ　Ｃｌｉｎ，２０１２，６２（１）：１０—２９．　［２］　叶定伟．前列腺癌流行病学和中国的发展趋势［Ｊ］．中华外科　杂志，２００６，４４（６）：３６２—４．　［３］李鸣．前列腺癌热点问题评述［Ｊ］．现代泌尿生殖肿瘤杂　志，２０１１，３（３）：１２９—３１．　［４］Ｍｕｒｒａｙ　Ｎ　Ｐ，Ｒｅｙｅｓ　Ｅ，Ｔａｐｉａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｆｏｒ　ｅａｒｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｔｏ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｂｉｏｐｓｙ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｅｓｐ　Ｕｒｏｌ，２０１１，６４（１Ｏ）：９６１—７１．　［５］Ａｚｍｉ　Ａ　Ｈ，Ａｚｍｙ　Ｓ　Ｈ，Ｚｉａｄ　Ｍ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｕｔｉｌｉｔｙ　ｏｆｆｒｅｅ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇ－　ｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｓａｕｄｉ　Ｊ　Ｋｉｄｎｅｙ　Ｄｉｓ　Ｔｒａｎｓｐｌ，２０１　１，　２２（２）：２９１—７．　［６］方志启，吴刚，陈晓宇．增殖和凋亡基因Ｋｉ－６７、ｂｃｌ－２、ｂａｘ在　前列腺增生、前列腺癌组织细胞中的表达及相关性［Ｊ］．安徽　医科大学学报，２００７，４２（４）：３９１—４．　［７］Ｔｏｍｌｉｎｓ　Ｓ　Ａ，Ｒｈｏｄｅｓ　Ｄ　Ｒ，Ｐｅｒｎｅｒ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　ｆｕｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＭＰＲＳＳ２　ａｎｄ　ＥＴＳ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ　［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３１０（５７４８）：６４４—８．　［８］Ｔｏｍｌｉｎｓ　Ｓ　Ａ，Ｍｅｈｒａ　Ｒ，Ｒｈｏｄｅｓ　Ｄ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＴＶ４　ｇｅｎｅ　ｆｕｓｉｏｎｓ　ｄｅｆｉｎｅ　ａ　ｔｈｉｒｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｕｂｔｙｐｅ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ　［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００６，６６（７）：３３９６—４００．　［９］Ｓｕｎ　Ｑ　Ｐ，Ｌｉ　Ｌ　Ｙ，Ｃｈｅｎ　Ｚ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＴＭＰＲＳＳ２一ＥＴＳ　ｆｕ—　ｓｉｏｎｓ　ｂｙ　ａ　ｍｕｈｉｐｒｏｂｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｄｉａｇｎ，２０１０，１２　（５）：７１８—２４．　［１Ｏ］Ｇｕｏ　Ｃ　Ｃ，Ｄａｎｃｅｒ　Ｊ　Ｙ，Ｗａｎｇ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．ＴＭＰＲＳＳ２－ＥＲＧ　ｇｅｎｅ　ｆｕ－　ｓｉｏｎ　ｉｎ　ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｓｔａｔｅ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｐａｔｈｏｌ，　２０１１，４２（１）：１１—７．　［１１］ｘｕ　Ｊ，Ｓｔｏｌｋ　Ｊ　Ａ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ　ｅｘ　ｐｒｅｓｓｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ　ｕｓｉｎｇ　ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｉ—　ｃｒｏａｒｒａｒｙ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２０００，６０（６）：１６７７—８２．　［１２］Ｙａｎｇ　Ｘ　Ｊ，ｗｕ　Ｃ　Ｌ，Ｗｏｄｅ　Ｂ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａ－ｍｅｔｈｙ—　ｌａｃｙｌ－ＣｏＡ　ｒａｃｅｍａｓｅ（Ｐ５０４Ｓ）ｉｎ　ａｔｙｐｉｃａｌ　ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｓｔａｔｅ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｓｕｒｇ　Ｐａｔｈｏｌ，２００２，２６（７）：９２１—５．　［１３］Ｏｋａｄａ　Ｙ，Ｏｓａｄａ　Ｍ，Ｋｕｒａｔａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｐ５３　ｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ　ｐ５１（ｐ６３）一　ｅｎｃｏｄｅｄ，ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｐ５１　Ｂ（ＴＡｐ６３ａｌｐｈａ）ｏｃｃｕｒｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ａｎ　ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｂｌｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｗｉｔｈ　ＭＤＭ２，ｂｕｔ　ｒｅｓｐｏｎｄｓ　ｔｏ　ｇｅｎｏｔｏｘｉｃ　ｓｔｒｅｓｓ　ｂｙ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓ，　２００２，２７６（２）：１９４—２００．　［１４］Ｙａｎｇ　Ａ，Ｋａｇｈａｄ　Ｍ，Ｗａｎｇ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．０６３，ａ　ｐ５３　ｈｏｍｏｌｏｇ　ａｔ　３ｑ２７－２９，ｅｎｃｏｄｅｓ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｎｇ，ｄｅａｔｈ—ｉｎ—　ｄｕｃｉｎｇ，ａｎｄ　ｄｏｍｎａｎｔ—ｎｅｇａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ，１９９８，２　（３）：３０５—１６．